摘要：克隆河南人免疫缺陷病毒(HIV)感染者HIV-1B型株tat基因完整编码框序列,并分析比较其编码产物的序列结构特点。使用重叠PCR技术,从河南省1名HIV-1感染者外周血标本中扩增出tat基因第一和第二外显子并重组为完整的tat基因序列。获得的HIV-1B病毒株tat基因,第一外显子为263bp,第二外显子为214bp。将该基因编码产物与其他HIV-1株Tat蛋白经DNA软件编辑并翻译成蛋白质,使用ClustalX1.81进行多序列对比分析发现,第一外显子编码产物的3个保守区域的氨基酸组成大致相同,只有少数氨基酸存在差异。由于Tat蛋白不同病毒株间有高度保守的Cys富集区、核心区和碱性氨基酸富集区,tat基因的克隆为研究其功能并以其为靶点设计和筛选抗艾滋病的药物奠定了基础。

摘要：为从东北地区腹泻仔猪粪便样品中分离猪萨佩罗病毒(PSV)流行株,本研究采集2020年~2022年东北地区不同猪场仔猪腹泻粪便样品,首先利用PSV特异性的RT-PCR方法对临床样品初步检测,将RT-PCR检测为PSV阳性样品接种PK-15细胞进行病毒分离并传至30代,然后将第30代病毒经PCR和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,采用Reed-Muench法测30代分离病毒的TCID50及全基因组序列分析,最后将分离病毒经口服5 mL(10^(7.386)TCID_(50)/0.1 mL)感染3日龄仔猪进行致病性分析。结果显示,在采集的95份样品中有17份样品在624 bp左右出现目的条带,将PSV阳性粪便样品接种PK-15细胞,结果有1份样品于接种后24 h细胞出现变圆、皱缩和脱落等PSV特征性细胞病变,表明分离到1株PSV,将其命名为HLJ 2204株;病毒蚀斑纯化后的30代病毒效价为107.386TCID50/0.1 mL;HLJ 2204株基因组全长7306 bp,同源性分析结果显示其与GenBank中PSV基因组核苷酸的相似性为84.3%~91.5%,系统发育树结果显示,HLJ 2204株与上海流行株SHCM2019处于同一分支,亲缘关系最近。HLJ 2204株经口服感染3日龄仔猪进行致病性研究,结果发现仔猪感染后24 h出现腹泻、体重减轻、精神亢奋等症状,肠道、肺脏以及脑组织出现不同程度的剖检病变,肠黏膜上皮细胞脱落,黏膜下层明显水肿;脑组织神经元变形、神经细胞空泡化、神经纤突变短。感染组仔猪在感染后4 d粪便病毒载量最高,病毒主要分布在肠道组织。综上,本实验成功分离获得了PSV HLJ 2204株,并分析了其全基因组序列特征及致病性,对深入了解黑龙江地区猪病毒性腹泻的流行及防控具有重要意义,并进一步丰富了PSV病毒库,为开发设计新型疫苗奠定了基础。

摘要：目的探讨孕期邻苯二甲酸酯(phthalates,PAEs)复合暴露与双胞胎出生体重差异的关联。方法采用前瞻性队列研究设计,在2013年1月至2016年12月,招募了来自武汉双胞胎出生队列(The Wuhan Twin Birth Cohort,WTBC)的289名双胞胎妊娠孕妇,使用高效液相色谱串联质谱检测孕妇孕早期、中期和晚期尿液中8种PAEs代谢物浓度,包括邻苯二甲酸单乙酯(monoethyl phthalate,MEP)、邻苯二甲酸单异丁酯(monoisobutyl phthalate,MiBP)、邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)、邻苯二甲酸单苄基酯(monobenzyl phthalate,MBzP)、邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]、邻苯二甲酸单(2-乙基-5-氧己基)酯[mono(2-ethyl-5-oxohexyl)phthalate,MEOHP]、邻苯二甲酸单(2-乙基-5-羧基戊基)酯[mono(2-ethyl-5-hydroxyhexyl)phthalate,MEHHP]、邻苯二甲酸单(2-乙基-5-羧基戊基)酯[mono(2-ethyl-5carboxypentyl)phthalate,MECPP]。采用多重线性回归分析这8种PAEs代谢物暴露与双胞胎出生体重差的关系,分位数g计算回归(quantile g-computation,qgcomp)和加权分位数和回归(weighted quantile sum regression,WQS)来评估PAEs复合暴露与双胞胎出生体重差异的关系。结果研究对象尿液中PAEs代谢物检出率均超过80.00%,其中MBP检出率最高为97.00%,整个孕期的浓度中位数是42.08μg/L;检出率最低的是MBzP为84.43%,整个孕期的浓度中位数是0.46μg/L。双胞胎体重差的中位数为210 g。校正多个潜在混杂因素后,多重线性回归结果表明,整个妊娠期,MEP、MBP、MEHP暴露与双胞胎出生体重差正相关。基于WQS的分析结果显示,整个孕期PAEs复合暴露与双胞胎体重差间存在正相关,qgcomp分析结果表明8种PAEs混合物每增加一个四分位数,双胞胎出生体重差增加3.88%(95%CI:0.25%~7.64%)。结论整个孕期PAEs的复合暴露可增大双胞胎出生体重差。

摘要：背景:对于BK病毒感染、BK病毒相关性肾病的认识缺乏规范的实验室诊断程序和标准化的无创性检验方法。目的:建立肾移植后患者尿液和外周血BK病毒感染负荷实时荧光定量PCR检测方法。方法:针对BK病毒基因组,自主设计特异性引物BKV-F和BKV-R,Taqman荧光探针BKV-P,Taqman荧光探针BKV-P的5’端标记有荧光基团,在除5’端外的任意一个位置上标记有淬灭基团;然后处理待测样本,进行PCR反应。结果与结论:将检测阳性的扩增产物进行基因测序,测序结果经BLAST比对后证实为BK病毒基因序列;利用上述方法对56份样本进行检测,其中,20份BK病毒血清样本及20份BK病毒尿液样本检测均为阳性,有S型扩增曲线。动态范围测定显示在103～1010copies/mL之间标准曲线具有良好的相关性。5份健康人尿液样本,5份血液样本及6份临床常见的其他病原体血液样本检测均为阴性,无S型扩增曲线。结果表明该方法可进行定性、定量检测,特异性好,反应快速,一般30min即可得到反应结果,并且成本低、假阳性少。

摘要：克隆Ty1-copia类反转录转座子反转录酶序列并分析其特性,为开发栽培种花生基于LTR反转录转座子的分子标记奠定基础。根据Ty1-copia类反转录转座子反转录酶的保守区设计简并引物对,利用PCR技术对栽培种花生品种“桂花1026”的基因组DNA进行扩增,目的条带经回收、克隆、测序,最后对序列进行生物信息学分析。目的条带大小约260 bp,克隆获得了34条反转录酶序列,序列长度变化范围为256~267 bp,AT所占比例范围为51.36%~67.79%,AT与GC比例范围为1.06~2.10,序列间相似性范围为44.9%~98.5%,序列存在较高异质性,表现为缺失突变与点突变;34条反转录酶序列系统聚类为3个家族,家族Ⅰ和家族Ⅱ分别占到了总序列数的55.88%和35.29%;翻译成氨基酸后,有14条序列发生了无义突变,序列间相似性范围为11.4%~98.9%,呈现高度异质性;序列间保守基序也存在较大差异,呈现较高异质性;对栽培种花生与其他物种植物该类型反转录酶的氨基酸序列构建系统进化树,结果显示所有序列被分为7类,其中Ⅰ类和Ⅱ类分别包含16条和11条栽培种花生反转录酶序列,表明栽培种花生反转录酶序列具有比较高的保守性,同时栽培种花生也与葡萄、马铃薯、辣椒、烟草、番茄、大豆、甜菜、草莓等物种植物的反转录酶序列之间具有较近的亲缘关系,表明不同物种植物的Ty1-copia类反转录转座子之间有可能存在着横向传递。本研究所获得的反转录酶序列为栽培种花生Ty1-copia反转录转座子的分子标记开发利用及花生分子育种奠定了一定基础。

摘要：目的了解并评估DTP药房患者管理服务现状与效果。方法本研究是一项基于院外DTP药房日常运营数据的真实世界研究,采用回顾性队列研究设计方法,利用全国79家DTP药房的销售及随访数据,建立了一个使用PD-1/L1类药物的肺癌患者队列。使用Cox回归分析方法探索购药时长和随访时长的影响因素。结果12226名患者中,76.4%为男性,中位年龄为62岁,其中低随访率组1902人(15.56%)、中随访率组1448人(11.84%)、高随访率组8876人(72.60%)。三组在中位购药时长与中位随访时长方面差异有统计学意义。Cox回归分析显示,与更长的购药时长相关的影响因素包括参加慈善赠药项目(HR=0.873,P<0.001)、随访中曾经出现不良事件记录(HR=0.761,P<0.001)、随访接通率大于70%(HR=0.790,P<0.001);与更长的随访时长相关的影响因素包括参与慈善赠药项目(HR=0.535,P<0.001)、随访中曾经出现不良事件记录(HR=0.689,P<0.001)、末次随访中出现不良事件记录(HR=0.763,P<0.001)、随访接通率30%~70%(HR=0.688,P<0.001)和大于70%(HR=0.579,P<0.001)。结论DTP药房开展的患者管理服务对于延长肺癌患者PD-1/L1类药物的治疗时间和随访时间具有积极作用。

摘要：针对目前城市道路除雪效率低下,作业人员工作时存在一定安全隐患,融雪剂使用过多,导致植被破坏等问题。本文对积雪清理车进行结构分析与优化,利用Solidworks,设计了一台具有收集、分离、压缩等功能的小型积雪清理车,改善目前国内除雪设备功能单一,清理后的积雪只能无序堆放,得不到有效利用等状况。最终实现可调控的压缩、处理一体化。

摘要：目的为股深动脉穿支供血的横半月形股薄肌肌皮瓣在乳房再造中的应用提供解剖学依据，并探讨将其做成穿支皮瓣的可能性及大隐静脉属支在该皮瓣的分布规律。方法在4例8侧灌注红色乳胶的成人尸体下肢标本上对股薄肌上股深动脉穿支的出现率及其在股薄肌内的走行、血管外径、血管蒂长度以及伴随静脉和神经情况等进行解剖学观测。结果股深动脉股薄肌支在股薄肌肌皮瓣中的出现率为100％，其中75％来自于股深动脉，25％来自于旋股内侧动脉。穿支入肌点距股薄肌起点为（13．21±1．03）em，入肌处动脉外径（1．35±0．30）mm，沿途发出2～3只皮支，血管蒂动脉起点外径（2．77±0．54）mm，蒂长为（74．14±9．42）mm。伴随静脉终点外径（2．83±0．63）mm，大隐静脉属支在皮瓣范围内出现率87．5％，除1例无大隐静脉属支分布外，其余7例标本均有1支属支，外径为（2．60±0．64）mm。闭孔神经外径（1．85±0．53）mm。结论①股深动脉穿支在股薄肌中上1／3处出现率高，分布具有规律性，可以作为乳房再造的可靠供区；②皮瓣范围内存在较为恒定的大隐静脉的属支，可以作为皮瓣的第二套静脉系统予以保留以获得更好的静脉回流；③存在将横半月形股薄肌肌皮瓣做成穿支皮瓣的可能，在适合的病例中可以考虑减少肌肉的携带量以减少供区损伤；④股深动脉穿支供血的横半月形股薄肌肌皮瓣经标本手术模拟，证明切实可行；⑤供区关闭后切口瘢痕隐蔽，患者更易于接受；⑥根据胸部乳腺切除后缺损大小设计皮瓣，皮瓣宽度以供区能直接拉拢关闭为准，不仅可用于整个乳房的再造，而且适合于保乳术后乳房局部缺损的修复，对于双侧缺损的患者可以提供双侧皮瓣作为供区。

摘要：目的建立可用于快速筛查孕妇B族链球菌(GBS)的等温扩增法。方法培养GBS并提取基因组DNA。根据其cfb基因设计LAMP(环介导等温扩增)和RPA(重组酶聚合酶扩增)反应引物,进行目的基因扩增。采集临床标本50份,同时用两种方法进行检测,评价方法的特异性和敏感性。结果 LAMP可在45min完成基因扩增,RPA法可在15min完成目的基因的扩增。二者均具有高度敏感性和特异性,最低检出浓度均为0.01ng DNA/μl。检测50份临床标本LAMP法4份阳性,RRP法5份阳性(其中1份假阳性)。结论 LAMP和RPA均不依赖特定仪器,在恒温条件下即可完成目的基因扩增,以LAMP方法操作更简单、快速,特异性更高,可用于女性孕期GBS感染筛查。

摘要：目的:对自行编制的食物频率问卷进行效度检验,探究其是否可用于孕期妇女的膳食调查及规模人群营养流行病学调查。方法:以在孕早期(10~13w^(+6) d)完成食物频率(FFQ)调查,并收集到3天24小时膳食回顾(3days 24HR)数据的111名孕妇作为调查对象。采用Wilcoxon配对秩和检验比较两种方法摄入量之间的差异;采用Spearman相关系数评估两种方法的一致性程度;采用Bland-Altman图用于比较两种方法所得平均总能量和宏量营养素摄入量的差异。结果:使用FFQ调查与3 days 24HR调查对热量、主食及蔬菜的摄入量估计无统计学差异。热量、三大宏量营养素的Spearman相关系数范围为0.249(脂肪)~0.529(蛋白质)。除主食、薯类、菌藻类及水果外,其他食物组的相关性均有统计学意义,Spearman相关系数范围为0.180(粗粮)~0.578(奶制品)。BlandAltman图显示,热量、蛋白质及脂肪的比值均在1附近。结论:本研究设计的较为短小的食物频率问卷的效度较好,可以用于孕期孕妇的膳食调查,也可用于开展大规模人群营养流行病学调查。