摘要：参照PRRSV ATCC VR2332株基因序列设计1对引物P1、P2,经RT-PCR扩增出PRRSV SD-1株ORF7基因,经与PMD18-T Vector连接后筛选出阳性克隆株测序。把PRRSV SD-1株ORF7 cDNA亚克隆到PQE上构建PQE-N原核重组表达载体。结果表明,PRRSV SD-1株ORF7核甘酸序列与PRRSV ATCC VR2332株ORF7核甘酸序列完全一致,与欧洲株LV符合率为58%。成功构建原核表达载体PQE-N,为N蛋白的研究和制备诊断性抗原奠定了基础。

摘要：目的:构建食物中毒菌多联融合毒素基因并分析其是否保持了原来毒素基因的抗原特性。方法:采用一定的linker序列(G-P-G-P-G)将克隆的3种食物中毒菌5个毒素基因片段进行串联,构建重组融合毒素Hc-VT1B-SEA-VT2B-SEB(命名为F5)基因,应用DNAstar,对F5融合蛋白抗原特性等进行预测分析。结果:构建的融合毒素F5保留了5种毒素的抗原特性,基因全长序列2 937 bp,编码成熟蛋白979个氨基酸,测序结果与设计序列(GeneBank)100%同源。结论:成功构建了食物中毒菌多联融合毒素F5基因,为下一步研究融合毒素F5的表达及利用融合毒素检测食物中毒菌毒素建立广谱免疫学检测新方法奠定了基础。

摘要：研究玉米品种熟期类型和种植密度对子粒脱水特性和产量的影响,以期筛选出适宜机械粒收的高产玉米品种,并为机械粒收高产品种的选育提供参考。采用两因素裂区试验设计,选用不同熟期的8个玉米品种(德美亚1号、A6565、承单1171、富尔116、先正达408、三北5018、先玉335和华农887)进行密度(4.5万、6.0万、7.5万、9.0万、10.5万和12.0万株/hm^(2))试验,研究了不同品种和密度下玉米成熟后子粒含水量、脱水速率、抗倒性、产量等的变化。结果表明:种植密度对玉米生理成熟时的子粒含水量无显著影响;不同品种的自然脱水速率不同,玉米品种生理成熟后的天数与子粒含水率呈直线下降关系;不同熟期类型品种的机械粒收适宜时间不同,极早熟品种适宜在9月下旬收获,早熟品种适宜在10月上旬收获,中熟和中晚熟品种适宜在10月中旬收获;玉米品种的种植密度与产量呈二次曲线关系,极早熟和早熟品种的适宜种植密度为9.07万~10.29万株/hm^(2),中熟品种和中晚熟品种的适宜种植密度为6.45万~8.56株/hm^(2);早熟品种可以通过增加密度使产量水平达到或接近中熟和中晚熟品种,而极早熟品种即使增加密度也达不到中熟和中晚熟品种的产量水平。在北方春玉米区,可利用早熟品种适当增加密度代替中晚熟品种实现玉米子粒机械直收。

摘要：目的评价基于载体的靶向乙型肝炎病毒(HBV)C基因的小发卡RNA(shRNA)对耐拉米夫定HBV的抑制作用,探讨新的抗病毒治疗手段。方法从临床耐拉米夫定患儿中提取耐药HBV基因组,经高保真重复延伸及序列拼接后测序,纯化并克隆到pGEM-T Easy TA载体,再经酶切消化,连接入pcDNA3.1载体,构建表达耐药HBV的表达载体pcDNA-HBV-1;根据GenBank收录HepG2细胞系中HBV基因全序列,设计构建针对HBV C基因区的3条siRNA的表达载体pSilencer4.1/HBV-C1,C2,C3。经退火连接入pSilencer-CMV4.1载体。中量超纯提取质粒,定量后与转染试剂siPort XP-1及pcDNA-HBV-1共转染人肝癌细胞系HepG2细胞。分别设立正常HepG2组(未转染组)、载体阴性对照组及共转染组。在共转染后的不同时间点,应用Western blot检测细胞中乙肝病毒表面抗原(HBsAg)蛋白、乙肝病毒e抗原(HBeAg)蛋白的表达;应用实时荧光定量PCR定量检测细胞上清中HBV DNA拷贝的变化。结果构建的耐药HBV表达载体用于转染HepG2细胞,在转染后的第7天至下次传代前该细胞中可检测到稳定表达的HBV DNA,HBsAg、HBeAg可检出。Western blot结果:在转染的第3天载体pSilencer4.1/HBV-C1、pSilencer4.1/HBV-C2、pSilencer4.1/HBV-C3均可抑制HBV的复制与表达,其中pSilencer4.1/HBV-C2抑制效应尤其显著,在转染后第3天对HBsAg、HBeAg的抑制率分别为(83.53±0.48)%、(86.12±0.83)%。定量PCR检测显示特异性siRNA可以显著抑制HBV-DNA,可以使DNA拷贝数降低102个数量级。结论基于载体的特异性siRNA在体外可抑制HepG2细胞中耐药HBV的复制和表达。该特异性siRNA可作为耐拉米夫定HBV的一种有效的基因治疗措施。

摘要：体外观察s1RNA对HepG2 2.2.15细胞中乙型肝炎病毒(HBV)HBV-DNA分泌的影响。设计并合成针对HBV S区的三条siRNA,构建含上述siRNA的表达载体pSilencer ZYl、pSilencer ZY2和pSilencer ZY3,测序及酶切鉴定后用脂质体介导重组质粒转梁HepG2 2.2.15细胞,用酶免分析法对HepG2 2.2.15 细胞上清中HBV-DNA进行定量检测。结果成功构建了针对HBV S区的siRNA的表达载体,三条s1RNA 均可不同程度地抑制HepG2 2.2.15细胞上清中HBV-DNA,转染72 h抑制效果最好,分别为62%、31%、63%。说明针对HBV S区的siRNA能明显抑制HBV-DNA。

摘要：文章介绍了出口墨西哥380HBW级别LH在线热处理钢轨的生产工艺概况,通过对钢轨微合金化成分设计、冶炼工艺高洁净度控制和精准在线热处理工艺调控,成功批量生产LH在线热处理钢轨。钢轨各项性能满足用户技术要求和AREMA标准要求,通过SGS国际检测认证,满足国外重载铁路大轴重货运列车的运行要求,钢轨已出口至墨西哥、澳大利亚、美国等国家。

摘要：目的建立双重荧光逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)与荧光逆转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided amplification,RT-RAA)快速有效地检测食品中食源性GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的方法。方法根据GⅠ型、GⅡ型诺如病毒基因组保守序列设计引探,经过一系列引探浓度筛选,建立了双重荧光RT-PCR和恒温荧光RT-RAA两种检测方法,分别从敏感性、特异性、稳定性、重复性等方面进行了比较研究;同时将这两种方法应用于实际临床样本检测中,并与GB4789.42—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验》进行比对验证。结果建立的两种方法特异性良好,敏感性均可达10 copies/μL;双重荧光RT-PCR方法质粒梯度变异系数(coefficient of variation,CV)值在0.1%~1.5%区间,恒温荧光RT-RAA方法CV值在1.0%~10.0%区间,稳定性和重复性显示双重荧光RT-PCR优于恒温荧光RT-RAA检测方法;31份诺如病毒阳性食品核酸样本均能检出,且50份食品盲样检测结果与国标一致。结论本研究成功建立了双重荧光RT-PCR与恒温荧光RT-RAA快速检测食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒方法,两种方法各有优缺点,双重荧光RT-PCR稳定性和重复性好,恒温荧光RT-RAA检测时间短,仅20 min就能完成扩增,可根据不同需求选择一种或两种作为食源性GⅠ型、GⅡ型诺如病毒的检测方法。

摘要：目的构建人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(h OGG1)左右臂载体敲除质粒对。方法针对OGG1基因,设计左臂识别序列3个,右臂识别序列2个,应用转录激活子样效应因子核酸酶技术(TALEN)一步法进行构建。结果成功将左右臂识别序列接入相应的表达载体中,构建出5个TALEN质粒,形成3X2组合模式。结论成功构建了敲除h OGG1基因的TALEN质粒对。

摘要：目的了解基于载体的siRNA对HepG2.2.15细胞中HBV的抑制作用,观察特异性siRNA载体对细胞的毒副作用及可能的非靶向效应,探讨新的抗病毒治疗手段。方法根据GenBank收录HepG2.2.15细胞系中HBV基因全序列,设计构建针对HBV的C基因区的3条siRNA的双链复合体,经退火连接入p-Silencer-Cmv4.1载体,连接产物转化JM109细胞,载体经聚丙烯酰胺凝胶电泳及测序鉴定后中量超纯提取质粒,定量后与转染试剂siPort XP-1转染HepG2.2.15细胞。免疫荧光及Western blot检测病毒蛋白HBsAg、HBeAg的表达;RT-PCR检测HBV RNA的表达变化;Real-time PCR定量检测HBV DNA拷贝变化。同时采用MTT法检测细胞的生长曲线与生长率。ELISA法检测IFN-α的表达变化。结果Western Blot结果显示在转染第3天p-C2对HBsAg、HBeAg的抑制率分别为(81.15±0.69)%、(88.12±0.92)%,免疫荧光显示同样结果。RT-PCR检测结果显示C基因特异的表达性siRNA可以显著抑制HBV的mRNA表达,对C区HBV mRNA的抑制达96.9%。定量PCR检测显示特异性siRNA使HBV DNA拷贝数降低102个数量级。而MTT检测表明该特异性siRNA表达载体不影响细胞的生长曲线与生长率,治疗组与对照组比较无差异。ELISA法检测表明特异性siRNA并不影响细胞干扰素的表达,p-C1、p-C2、p-C3组与未转染组、p-NC组比较表达均无差异。结论基于载体的特异性siRNA在体外可抑制HepG2.2.15细胞中HBV的复制和表达。该抑制作用是特异性的,同时对细胞无明显毒副作用。该作用为基因水平的裂解作用,不会出现耐药现象。

摘要：提高实践创新能力是培养具有引领行业发展和具有国际竞争力的软件类高级工程技术卓越人才过程中重要环节。以"卓越工程师教育培养计划"为引导,树立教育创新理念,明确"实践、创新、能力"为培养目标,从教学模式的构建、核心专业课程群的建立、激励机制的制定等方面突出计算机专业本科生实践创新能力的培养。