摘要：目的:克隆肉毒梭菌(Clostridium botulinum)A型肉毒毒素(BoNTa)编码基因。方法:提取肉毒梭菌国际标准株(62A)基因组DNA,根据肉毒梭菌BoNTa基因(GenBank登录号M30196)序列设计引物,采用LA-PCR方法,扩增出目的基因片段,与pMD18-T载体连接,通过酶切鉴定、测序分析克隆到的A型肉毒毒素基因序列。结果:该基因片段与Genbank中的BoNTa基因序列(GenBank登录号M30196)一致性为100%,预测氨基酸序列一致性为100%。结论:成功克隆肉毒梭菌的A型肉毒毒素基因序列,为肉毒梭菌的快速检测,以及进一步用基因工程方法生产A型肉毒毒素奠定了基础。

摘要：本文主要以宁波地区的企业和高校为调查对象,收集双方对工业设计人才的核心能力态度指数,然后分析双方的认知差异,并对其进行分析,最后为高校制定工业设计人才培养方案提出的建议。

摘要：从松树林土壤中筛选出3株菌株用于乌梅发酵,通过培养液嗅香评价,选出其培养液嗅香较好的一株进行分子生物学鉴定,鉴定结果为Penicillium polonicum真菌,利用其制备乌梅发酵香料。采用L_(9)(3^(4))正交试验设计进行工艺优化,确定最佳发酵工艺条件,并针对其致香成分的种类和含量进行了数据分析。结果表明,该菌株用于乌梅发酵能转化生成具有果香气味的苯甲醇、苯乙醛、3-甲基丁醛等物质。乌梅发酵最佳工艺条件为发酵温度25℃、发酵时间24 h、接种量为2%,此工艺增加和丰富了乌梅香料的香气。

摘要：目的:建立一种可快速检测沙门菌的实时荧光定量PCR方法,对粪便、海鲜等样本中的沙门菌进行检测。方法:根据沙门菌ompF基因的特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立检测沙门菌的实时荧光定量PCR快速检测方法,对方法的特异性、敏感性和稳定性进行评价,并对临床样本中的沙门菌进行检测。结果:该检测方法可扩增不同型别沙门菌的基因组DNA,对其他10种不含沙门菌的肠道病原菌基因组DNA均不扩增,具有很好的特异性;对构建的阳性质粒模板检测灵敏度可达0.1 ng/L,对菌株样本基因组DNA检测灵敏度为10 CFU/mL,可快速准确地检出临床样本中分离的沙门菌阳性菌株,且与商业化沙门菌检测试剂盒的阳性检出率相同;该方法的重复性也很高,5次重复实验Ct值的变异系数低于0.8%。结论:建立的沙门菌TaqMan实时荧光定量PCR法具有简单快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可应用于临床沙门菌核酸检测。

摘要：目的:对穿心莲糖苷水解酶(ApGH)基因进行克隆、生物信息学分析、原核表达和相对表达量分析。方法:取穿心莲新鲜叶片,提取RNA并反转录为互补脱氧核糖核酸(cDNA)作为模板,以穿心莲转录组中筛选到的糖苷水解酶ApGH基因开放阅读框(ORF)设计特异性引物,进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,经测序后获得的基因序列利用生物信息学软件预测基因编码蛋白特征,构建原核表达载体在大肠埃希菌中诱导表达目的蛋白质,并利用实时荧光定量PCR分析ApGH基因的表达模式。结果:克隆所得ApGH基因的ORF全长1734 bp,编码577个氨基酸(GenBank登录号:OR887606)。ApGH为稳定亲水蛋白质,无信号肽和跨膜结构域,属于糖苷水解酶家族;系统进化分析表明,ApGH归属于GH1家族。将ApGH基因构建到原核表达载体HIS-MBP-pET28a上,在大肠埃希菌Transetta(DE3)中成功表达出重组蛋白质。实时荧光定量PCR检测结果表明,ApGH基因在叶中表达量最高,茎和根中表达量较低。结论:克隆得到穿心莲ApGH基因并对其蛋白质序列特征进行了系统分析,证明其在大肠埃希菌中成功表达重组蛋白质,且主要在穿心莲叶中表达。研究结果为进一步探索穿心莲糖苷水解酶的催化功能提供了依据。

摘要：本实验旨在对乳品中酵母菌活菌总数进行准确的定量检测,深入研究PMA处理乳品中酵母热损伤菌的最佳工作条件,去除热损伤死菌DNA的影响。针对从乳品中分离的三株酵母菌26S rDNA D1/D2区域序列设计引物Y3和Y4,运用实时荧定定量PCR进行序列扩增,以重组质粒pMD-18T-26S拷贝数对数与扩增循环数(Ct)值为坐标轴建立标准曲线,建立PMA-qPCR检测方法,并对实际样品中的酵母菌活菌富集后进行数量检测。PMA-q PCR法可达到国标规定的食品中酵母菌最高限量值1×10~2CFU/mL的检测标准,对应Ct值为36.67±0.43,重复性良好,总耗时6～7 h,可对酵母菌数量进行准确和快速的定量分析,为乳品中腐败微生物的鉴定与监控提供有价值的借鉴。

摘要：为探究遵义烟区适宜的硫肥用量,以烤烟K326为试验材料,采用大田试验,设计7个硫素水平:0、2.4、4.8、7.2、9.6、19.2、38.4kg/667m^2,测定烟株不同时期的农艺性状、干物质积累量和烟叶含硫量,选取成熟期烟样测定其常规化学成分。结果表明:伸根期、团棵期及旺长中期硫肥对烤烟株高和茎围无明显影响;现蕾期叶片数及茎围随施硫量的增加而减少,叶面积以不施硫处理最高。施入7.2kg/667m^2硫时,干物质积累量最高,较不施硫处理增加了76.38%;施入4.8kg/667m^2硫时,烟叶化学成分含量最高,其中全氮、全磷及全钾含量较不施硫处理分别增加了7.14%、24.13%和33.80%,还原糖、总糖、糖碱比及钾氯增加量分别为78.91%、74.09%、81.13%和38.06%。遵义烟区硫肥用量与糖碱比、钾氯比的关系符合GuassAmp方程,分别为y=3.45+2.98×exp{-0.5×[(x-3.93)/1.2]^2}、y=7.65+3.14×exp{-0.5×[(x-6.52)/3]^2},根据方程计算最佳施硫量范围为3.25~4.25kg/667m^2。

摘要：在高路堤、大型桥梁,大量的涵洞、通道处软土都给它们带来不同程度的危害。如路基的滑坍、崩塌、沉陷等路面起伏不平,桥涵通道等人工构造物处的跳车颠簸,而使这些地区的公路建设者感到非常棘手,要花大量人力、物力、财力和时间,去进行勘察、测试、设计、科研和施工,目的是为了处理好路基,使来往车辆及司乘人员安全,快速,舒适地行驶在公路上。若不加处理往往会发生路基失稳或过量沉陷,导致公路破坏或不能正常使用。软土对公路的危害,引起我国公路方面的重视,设计、施工等单位全力以赴,协同作战,经过多年努力,已摸索了不少对策,并取得了可喜的成绩。

摘要：分别以1-溴萘和酮或1-萘甲醛及有机金属试剂为原料,经12步反应合成了8个含萘三氮唑甲烷骨架的硫代乙酸类尿酸转运体1(URAT1)抑制剂(1h^1o),其结构经~1H NMR,^(13)C NMR和MS(ESI)表征。体外活性测试结果显示:对URAT1的抑制活性最强的是1k,是阳性对照药lesinurad的133倍[IC_(50)=0.054μmol·L^(-1)(1k),7.18μmol·L^(-1)(lesinurad)]。

摘要：目的:设计建立一套体外循环离体肝脏灌注模型用于治疗急性肝功能衰竭的动物实验灌注方法。方法:选用品质优良的健康杂种猪10只,分为5对,分为受体猪和供体猪,受体猪股静脉插管,引流静脉血灌注至供体猪的离体肝脏,血液经氧合后回输入受体猪上肢静脉系统。通过监测离体肝动脉压力和门静脉压力,调整离体肝脏的灌注量和受体猪的血流动力学稳定,每个离体肝脏建立体外循环灌注维持6～8 h。结果:体外循环灌注期间离体肝脏颜色红润,质地柔软,胆汁排泄通畅;受体猪血流动力学稳定。结论:离体肝脏体外循环支持灌注,可为治疗急性肝功能衰竭或等待肝移植的体外循环相关实验研究提供可靠的动物模型和理论支持。