摘要：为建立一种能够快速鉴别猪瘟病毒野毒和疫苗弱毒株的临床检测方法,本实验针对猪瘟病毒野毒株及疫苗弱毒株分别设计了特异性鉴别引物及探针,利用RT-PCR方法特异性扩增目的基因后进行芯片杂交反应并显色,直观判定检测结果,经反应条件优化建立了一种鉴别检测猪瘟病毒的基因芯片方法,并对该方法的特异性、敏感性及重复性进行了试验。结果显示,该芯片检测方法仅能鉴别检测出猪瘟病毒野毒株与疫苗弱毒株,不能检测猪的其他12种主要传染病病原,特异性较强。对猪瘟病毒野毒株和疫苗弱毒株重组质粒标准品的最低检出限分别为6.98拷贝/μL和6.92×101拷贝/μL,敏感性较高。选择不同批次基因芯片对同一质粒标准品的检测结果均为阳性,重复性良好。利用该方法检测177份临床样本,结果与国标猪瘟病毒RT-nPCR检测方法(GB/T26875-2018)相比较,总体符合率为99.43%(176/177)。可视化猪瘟病毒鉴别诊断基因芯片方法可在2 h内完成对猪瘟野毒感染和疫苗免疫的临床样本的鉴别检测,且检测结果可用肉眼直观判定,在基层猪瘟流行病学监测及我国猪瘟的防控和净化方面具有良好的应用前景。

摘要：为建立犬细环病毒(TTCV)的快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的TTCV ORF7基因设计合成一对特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了检测TTCV的SYBR Green I荧光定量PCR方法。结果显示:建立的荧光定量PCR方法 Ct值与标准品模板在5.82×10~9拷贝/μL^5.82×10~3拷贝/μL范围内呈良好的线性关系。该检测方法仅对TTCV检测为阳性,而对狂犬病病毒、犬冠状病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒和犬副流感病毒均无特异扩增;该检测方法灵敏度可达5.82×103拷贝/μL。对27份犬血清样品检测结果显示,建立的荧光定量PCR阳性检测率为11.11%,而普通PCR方法检测阳性率为3.7%。本实验建立了TTCV SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,对TTCV诊断及致病机制的研究提供了高通量的定量检测方法。

摘要：目的探讨遗传性非息肉病性大肠癌(HNPCC)患者的身心社会功能和生活质量情况及影响因素。方法选择2006年6月至2009年1月上海新华医院确诊的HNPCC患者为调查对象。采用单一样本问卷调查,内容包括:(1)一般人口学特征;(2)疾病及治疗情况;(3)生活质量情况:参照癌症患者生活质量测定量表(EORTCQLQ-C30)设计,采用多元线性回归模型分析。结果发放问卷47份,收回47份。分析结果 :(1)基本属性与生活质量:年龄与整体健康生活质量成负相关(r=-0.24,P=0.006),与生活品质的身体功能成负相关(r=-0.27,P=0.007);教育程度与生活质量成正相关(r=0.21,P=0.003);收入与生活质量的情绪功能和认知功能成正相关(r=0.21,P=0.002;r=0.23,P=0.008);身体功能状态与整体健康生活质量成正相关(r=0.33,P<0.001)。(2)生活质量多元回归分析:忧郁和年龄可解释总变异数的29.8%;忧郁程度对生活质量有较高的解释力,解释总变异数为24.4%,年龄的解释总变异数为5.4%。结论 HNPCC患者在整个治疗康复过程中,身心社会功能和整体生活质量均有不同程度的降低,其中心理健康状态、年龄、经济状况等因素对整体生活质量的影响较大。

摘要：目的对肿瘤专科医院住院患者住院服务体验和满意进行监测及分析,为医疗服务质量持续改进提供依据。方法参考北京大学医学部住院患者体验和满意监测工具,结合本院设施和服务情况,设计肿瘤专科医院患者住院服务体验和满意监测调查表,包括住院患者总体满意度、总体服务指数、次级指数共69题选择题及2题开放型问答题。用邮寄信函问卷方式对1000例出院患者进行调查。结果回收有效问卷363份,住院患者的总体满意度平均(86±17.80)分,总体服务指数及各项次级服务指数结论为好。结论患者住院服务体验和满意监测能反映医院服务质量,是持续改进的基础。

摘要：为了提高微型汽车的驱动效率和通过性,研究了一款微型汽车匹配限滑差速器(Limited Slip Differential,简称LSD)。运用多刚体动力学分析方法,建立LSD模型,分析限滑转矩的影响因素。基于限滑转矩最大并以此为优化目标对LSD建立数学模型,最后基于MATLAB优化工具中的fmincon函数优化出满足驱动性能要求的LSD结构参数,对指导限滑差速器的设计提供了理论基础,为评价限滑差速器性能提供了一种方法。

摘要：目的观察可诱导共刺激因子(inducible co-stimulator factor,ICOS)短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对大鼠活化T细胞中ICOS基因的沉默效应,筛选有效干扰靶点。方法设计合成ICOS RNA寡核苷酸片段,经退火、连接等步骤克隆至线性化的pRNAT-U6.1/Neo真核表达载体上,测序鉴定。应用Lipofectamine2000将该质粒转染活化的大鼠T细胞,荧光定量RT-PCR检测ICOS mRNA表达情况,Western blot检测ICOS蛋白表达情况。结果成功构建了3个靶点的重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA1、2、3,荧光定量RT-PCR和Western blot显示转染这3种重组质粒的T细胞ICOS mRNA和蛋白表达均较对照组有不同程度的下降,其中1号靶点的干扰效应最为明显。在转染后的T细胞中,其抑制率分别达到了51.3%、78.3%.结论重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS-siRNA能有效抑制大鼠活化T细胞中ICOS基因的表达,并筛选出了有效干扰靶位。RNA干扰技术有望成为研究ICOS在实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎中作用的有效手段。

摘要：目的 评价盐酸安妥沙星片治疗呼吸道、泌尿道和皮肤软组织感染的安全性和有效性。方法 采用区组随机化、双盲双模拟、多中心、平行对照的临床试验设计方法，选用左氧氟沙星片为对照药物，疗程7～14d。结果 719例患者入选，其中安妥沙星组359例，左氧氟沙星组360例，分别有330与337例完成研究，进入符合方案集（PPS）分析人群；安妥沙星组和左氧氟沙星组PPS人群治疗结束后第1天临床痊愈率分别为79．7％与77．4％，有效率分别为95．2％和96．7％，细菌清除率分别为96．7％与97．5％。呼吸道、泌尿道、皮肤软组织感染患者分别为239、240与240例，两组临床疗效差异没有统计学意义。左氧氟沙星组与盐酸安妥沙星组分别有357例和356例进行了安全性评价，不良事件发生率均为10．1％，不良反应发生率分别为7．8％和7．9％，主要以轻度消化道反庸为主。没有发现心电图QTc延长患者，两组各有1例患者治疗结束时血糖轮度增加，随访均恢复正常；两组临床、细菌学疗效以及不良反心发生情况差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 盐酸安妥沙星片治疗急性细菌性呼吸道、泌尿道和皮肤软组织感染疗效确切，安全性良好。

摘要：介绍了以VC++6.0为开发语言,TMS320C6713为下位机核心,USB为数据通信方式的吞水音采集模块。文中叙述了模块的整体架构、硬件组成以及软件设计。结果表明,该模块可有效可靠地进行人体吞水音信号的采集。

摘要：目的以猪源新城疫病毒JL02/2000株为模板,构建新城疫病毒反向遗传研究所需的基因起始片段。方法将NDV起始片段(ND1,226-4 916bp)设计拆分为ND1-1、ND1-2、ND1-3、ND1-4的4个约1.2kb的小片段,分别PCR扩增各片段,后采用SOE PCR技术将ND1-1、ND1-2拼接成中间片段ND1-1-2,将ND1-3、ND1-4拼接为ND1-3-4,再经第二次SOE-PCR整合拼接ND1-1-2和ND1-3-4片段,完成NDV起始片段ND1的构建,并连接到pCI载体上,构建pCIND1质粒,最后经酶切PCI-ND1质粒并送测序鉴定目的片段是否构建正确并成功连接到pCI载体上。结果经PCR扩增得到ND1-1、ND1-2、ND1-3、ND1-4共4个分别约1 200bp大小的片段,经第一轮SOE-PCR得到ND1-1-2和ND1-3-4两个2 200bp左右的片段,第二轮SOE-PCR得到4 900bp左右的ND1片段。连接产物PCI-ND1质粒经酶切和测序鉴定片段大小和序列与预期相符。结论成功构建了新城疫病毒基因起始片段(226-4 916bp),为构建新城疫病毒全长基因奠定了基础。

摘要：目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制。方法:以构建成功的pVAX-LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2LATORF2基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别引入KpnⅠ和PstⅠ酶切位点。用PCR特异性扩增LAT基因ORF2片段,PCR产物纯化回收后经KpnⅠ、PstⅠ双酶切,再次回收后产物与同样经双酶切的pcDNA 6/myc-His B质粒进行连接,Amp抗性筛选阳性重组子,双酶切及测序鉴定连接产物。在脂质体介导下瞬时转染Vero细胞,用RT-PCR及SDS-PAGE检测其在Vero细胞中的表达。结果:重组质粒经KpnⅠ和PstⅠ双酶切获得预期大小的两条片段,测序表明ORF2正确,RT-PCR及SDS-PAGE显示转染了重组质粒的Vero细胞内有目的基因及其编码蛋白的表达。结论:成功构建了ORF2-pcDNA6/myc-His B重组质粒,并可在Vero细胞内有效表达。