摘要：目的:构建携带绿色荧光蛋白的TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒表达载体,转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)。方法:设计含有GM-CSF信号肽序列和BglⅡ及HindⅢ酶切位点的引物,PCR扩增TNFα-Tumstatin,将扩增产物亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后转化含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组。筛选获得含有融合基因的重组腺病毒质粒,酶切鉴定并测序。重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,经过包装、扩增后感染hUCMSCs并检测细胞内融合基因的表达。结果:重组腺病毒质粒经PCR和PacⅠ酶切鉴定,证实含有TNFα-Tumstatin融合基因,测序结果和设计片段的序列一致。重组腺病毒感染的hUCMSCs表达绿色荧光蛋白和融合基因。结论:成功构建了TNFα-Tumstatin融合基因的腺病毒表达载体,能高效率感染hUCMSCs,为进一步研究融合基因修饰的hUCMSCs抗肿瘤效应奠定了基础。

摘要：《环境工程微生物学》是环境工程专业重要的专业基础课。本文就网络课程的设计思路及运行效果进行了讨论。通过网络课程的建设与应用,极大地丰富了教学内容,加强了学生自主学习的能力,增强了教学资源的共享性。

摘要：目的探讨应用反求工程(RE)和快速成型(RP)技术制作的个体化钛下颌人工骨修复下颌骨缺损的临床效果。方法选择2007～2009年中山市人民医院收治的下颌骨肿瘤病例6例,通过CT扫描加三维重建采集病变下颌骨的测量数据,按照手术设计在数字模型上切除病变骨段,形成下颌骨缺损模型,通过数字镜像得到植入体的数字模型,利用RP技术获得树脂实体模型并进行包埋铸造获得个体化人工骨。结果术前利用RE和RP技术制作个体化下颌人工骨快速精确,术中就位顺利,手术创口均为Ⅰ类愈合,术后随访7～30个月,缺损区面部外形恢复满意,开口度3.2～3.6cm,咬合关系正常,张口无偏斜。结论应用RE和RP技术制作个体化人工骨修复下颌骨缺损,方法简便精确,能达到外形与功能兼备的临床效果。

摘要：目的对常用的结核潜伏感染诊断方法进行成本效益研究,为我国将来开展大规模全社区人群结核感染状况调查和选择适宜的干预措施提供基础数据。方法采用横断面研究设计,整体抽取丹阳市导墅镇2个村全人群作为研究对象,选择自身对照研究方法,对研究对象同时开展结核菌素试验(TST)和γ-干扰素释放试验(选用Quanti FERON-TB Gold InTube,QFT-GIT)检测其结核分枝杆菌感染情况,并模拟TST与QFT-GIT法联用检测,计算3种方法筛查目标人群的感染阳性率、精准率、试剂费、检测费,并分析其成本效益。结果以TST法检测,分别以注射硬结平均直径≥5mm、≥10mm为结核杆菌感染标准,研究人群感染率分别为44.1%、37.3%;以QFT-GIT法检测,人群感染率为19.7%,显著低于TST法检测结果(P值均0.05)。以GFT-GIT检测阳性感染为标准,TST检测成本最低为30元,误诊率为47.1%;QFT-GIT法检测成本最高为500元;TST+QFT-GIT法结合使用的成本为250.4元,显著低于单纯使用QFT-GIT法。每检出一个结核杆菌阳性感染者,TST、QFT-GIT、TST+QFT-GIT的成本分别为80.7元、2 539.8元、1 342.9元。结论目前,TST、QFT-GIT、TST+QFTGIT等3种结核感染检测方法均存在缺陷,TST+QFT-GIT法结合使用虽具有较好的成本效益,但成本依旧过高无法应用于大范围筛查。研发其他特异性强、价格合理、方便使用的结核菌感染高危人群筛查方法迫在眉睫。

摘要：目的:观察地黄菟丝调经颗粒(DHTXTJ颗粒)对卵巢早衰模型大鼠促性腺激素释放激素受体(GnRHR)蛋白表达的影响,探讨DHTXTJ颗粒治疗卵巢早衰(POF)的机制。方法:采用一次性腹腔注射环磷酰胺(CTX)60mg/kg的方法制造POF大鼠模型,实验设空白组、模型组、戊酸雌二醇组、DHTXTJ颗粒预防组、DHTXTJ颗粒组,共5组,灌胃给药8周后,光镜下观察卵巢形态学改变;采用化学发光法检测大鼠血清雌二醇(E2)、促卵泡刺激素(FSH);免疫组织化学法检测GnRHR蛋白表达。结果:DHTXTJ颗粒可使大鼠卵巢生长期卵泡和黄体数量增多,闭锁卵泡数量减少,发育成熟卵泡增多,卵巢间质淋巴细胞浸润减少。DHTXTJ颗粒能够降低FSH水平,升高E2水平(P<0.05),预防组优于西药组(P<0.05);与西药组比较,DHTXTJ颗粒预防组能明显上调颗粒细胞GnRHR蛋白的表达(P<0.05)。结论:DHTXTJ颗粒能减轻CTX对卵巢的损伤,其机制可能是通过促进各级卵泡发育,调节雌激素的分泌,调节颗粒细胞GnRHR蛋白表达来实现的。

摘要：目的探究泡菜直投菌对抗生素诱导的小鼠肠道菌群紊乱的改善效果。方法选取36只Balb/c雄性小鼠,随机分为实验组、模型组与空白组(n=12)。实验组小鼠灌胃头孢曲松(40mg/d/只)+泡菜直投菌(109CFU/d/只);模型组小鼠灌胃头孢曲松(40mg/d/只);空白组使用等量生理盐水灌胃。连续灌胃7d后停止干预,继续喂养21d。喂养过程中每3d测量体重,每7d收集粪便,提取DNA,采用qPCR和二代测序法分析小鼠粪便细菌浓度及粪便菌落构成。28d实验结束后,处死小鼠收集相关样品,称量脏器质量,计算脏器系数。结果抗生素干预后3d开始,实验组和模型组小鼠体重显著低于空白组(P<0.05);停止干预后,实验组和模型组小鼠体重分别第15d和第21d与空白组无差异,第28d实验组小鼠肝脏系数高于模型组(P<0.01)。在抗生素诱导期间,实验组、模型组小鼠的粪便细菌总浓度下降,丰富度与多样性均与空白组有明显差异(P<0.01);粪便菌落构成中以厚壁菌门占明显优势,而空白组则以厚壁菌门和拟杆菌门两种菌群占优势。经21d自然恢复后,实验组与模型组小鼠粪便细菌浓度,菌落丰富度与多样性逐渐恢复至正常水平,实验组小鼠肠道菌群丰富度低于模型组和空白组(P<0.01),但其多样性指数更接近于空白组;粪便菌落组成中均以厚壁菌门占优势,拟杆菌门次之,且实验组的菌落构成优于模型组。结论抗生素的使用会造成小鼠肠道菌群紊乱,在抗生素投用期间联合使用泡菜直投菌有助于促进肠道菌群紊乱的恢复,并在一定程度上促进机体损伤的修复。

摘要：目的研究一种利用耳屏内联合颌下小切口入路制备隧道复位固定髁突颈部及基部骨折的方法,并观察其临床疗效。方法选择2012年1月至2018年1月30例髁突颈部中低位骨折患者,采用耳屏内联合颌下小切口入路,制造隧道式入路进行手术治疗。术后随访测量张口度、CT检查骨折断端对位情况及钛板有无变形、移位。结果①30例患者术中恢复正常咬合关系,术后复查无一例出现咬合紊乱;②张口度分析采用重复测量设计资料的方差分析进行检验(P<0.05),术前及术后1~12个月复查,患者平均张口度分别为(5.43±2.012)mm,(14.83±2.135)mm,(19.67±2.123)mm,(32.20±2.140)mm,(32.23±1.633)mm,(32.40±1.653)mm,患者术后张口度逐渐改善;③术后1、3、6、12个月复查CT显示骨折断端对位愈合,钛钉钛板无松动、变形、移位;④瘢痕位于耳内及颌下,位置隐蔽。⑤1例患者术后出现口角轻度歪斜症状,予以神经营养治疗,术后6个月复查症状消失。结论耳屏内联合颌下小切口隧道式入路治疗髁突颈部及基部骨折,显露充分,复位精确,实现早期张口功能训练及咬合关系恢复的同时,可做到瘢痕隐蔽,有效保护了面神经、颞浅动静脉、翼外肌等重要解剖结构,为临床髁突颈部及基部骨折手术入路的选择提供新的参考。

摘要：目的:采用一种高灵敏度的DNA甲基化分析方法,即巢式甲基化特异性PCR法(nested-MSP,nMSP),检测外科手术切除新鲜组织、石蜡包埋组织及纤维支气管镜活检组织中WIF-1基因启动子的异常甲基化状态。方法:将基因组DNA变性成为单链,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA,所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化等位基因的特异引物,进行巢式PCR扩增,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果:在3种类型的原发性非小细胞肺癌标本中都检测出了WIF-1基因启动子的异常甲基化。结论:巢式甲基化特异性PCR是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化的分析。

摘要：目的:分析广州市药物(美沙酮)维持治疗(MMT)点工作的疗效,为进一步推广和完善MMT提供参考依据。方法:采用自我设计的社区美沙酮维持治疗调查表,对笔者所在门诊2006年09月～2008年-07月收治的125例海洛依赖者进行入组和随访凋查。结果:①受治者使用毒品的行为明显减少,2年来平均尿吗啡检测阴性率65%,未见共用针具行为;②家庭关系改善,家庭关系良好者从18例(14.4%)增至105例(84%);正常生活水平从12例(9.6%)增至105例(90.4%);精神变好从14例(11.2%)增至115例(90.2%);③就业率从入组12例(9.6%)增至65例(52%)。结论:实施MMT在改善海洛因依赖者社会功能,降低毒品危害方面有一定成效,但还存在脱失率偏高,就业率不足等现象。怎样采取有效措施,降低脱失率,提高就业率,是今后急需解决的一个问题。

摘要：目的获得自然杀伤(NK)细胞缺陷的小鼠动物模型,并研究溶酶体运输调节因子(Lyst)基因的功能。方法采用CRISPR/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠的Lyst基因:针对小鼠Lyst基因编码区第50个外显子,设计CRISPR/Cas9靶点引物(sgRNA),并重组构建pUC57-Lyst-sg RNA载体。将重组质粒体与Cas9质粒分别利用T7 RNA聚合酶体外转录为mRNA,并按比例显微注射入小鼠受精卵,将受精卵移植到受体动物。获得子代小鼠后,利用PCR扩增和测序方法筛选Lyst基因发生改变的动物个体。结果显微注射移植后获得7只F0代基因敲除小鼠,且毛色均发生了明显的变化。结论利用CRISPR/Cas9技术可以构建Lyst基因缺陷小鼠,外观表型与已有的文献报道一致。