摘要：软件定义网络(SDN)架构给网络带来了卓越的灵活性和可管理性。为了给新型SDN技术与应用提供大规模可行性验证试验床与试点部署平台,提出了依托于CERNET的层次化跨区域SDN异地验证示范网络试验系统的总体架构,建设了9个城市、13个节点的SDN验证示范核心网与包含3个数据中心的接入网,并对基于SDN的v CPE智能专线业务、IPv4/IPv6过渡技术、流量监控调度应用和数据中心应用进行验证与示范。

摘要：目的构建流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)真核表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达。方法根据Genbank(NCBI ISDN13425)中查得的M2e编码序列,设计并合成两条DNA单链;在两条链两端添加碱基构成酶切位点的粘性末端,退火后使之互补结合成为M2e编码序列;然后将其插入到经双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-M2e;经酶切和DNA测序鉴定后,转染HEK293细胞,用免疫荧光技术检测pcD-NA3.1(+)-M2e在HEK293细胞的表达,并通过MTT检测刺激淋巴细胞增殖及M2e蛋白的分泌情况。结果合成的寡核苷酸链经退火形成双链,插入酶切的真核表达载体后构建成pcDNA3.1(+)-M2e。免疫荧光技术证实该质粒表达的M2e蛋白定位于细胞膜上,转染细胞的培养上清经MTT实验证实能刺激淋巴细胞增殖,表明表达的M2e蛋白也可分泌至细胞外。结论成功构建了流感病毒M2e的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-M2e,表达的M2e蛋白不仅存在于细胞膜上,也可分泌到细胞外。流感病毒M2e基因真核表达质粒的构建及成功表达为流感病毒基因工程疫苗、通用疫苗和核酸疫苗的研究奠定了基础。

摘要：采用最新设计带侧向喷口的微管靶,当微管内壁平均激光辐照强度约为3.5×10^(13)W·cm^(-2)时,观察到沿整个喷口1s3p^1P_0~0和1s4p^1P_0~0能级间强烈的粒子数反转。测得相应环境等离子体平均电子温度470—520eV,密度约为2×10^(20)cm^(-3)。分析了可能导致高温条件下粒子数反转的机制。

摘要：目的实现CT方舱CT装置的科学安装,对CT装置进行一定的技术改装研究。方法综合CT方舱舱体和空间布局以及CT装置技术参数等信息,考虑CT方舱CT装置的减振需求,对CT装置包括CT机架、扫描床、控制台、CT主机等进行一定的技术改装,对各组件的空间尺寸、固定方式和放置位置进行精确化设计和处理。结果在狭小有限空间内将CT装置安装成功,并具有一定抗振性能。结论该研究结果为CT方舱野外机动应用奠定了基础。

摘要：冷冻过程中水的输运直接影响生物材料低温保存的效果。对细胞渗透特性的测量将有助于低温保存方案的设计。本文采用渗透腔法,对脐带血干细胞的渗透性能或特性进行了实验研究。实验测得脐带血干细胞的不变体积比例为0.52±0.07,平均直径为9.9±1.0μm,25℃下对水的渗透系数为4.394×10^(-13)m^3/N·s,10℃下对水的渗透系数为1.256×10^(-13)m^3/N·s。根据Arrhemius关系式,得到渗透系数的活化能为58.6κJ/mol。文中将脐带血干细胞的这些性能数据与从其它文章得到的干细胞的类似性能数据进行了对比。

摘要：目的探讨多药耐药蛋白4(MRP4)在去势抵抗性前列腺癌(CRPC)中的表达及其作用机制。方法首先采用雄激素递减法建立CRPC细胞株(CR-LNCaP),应用RT-PCR及Western-blotting检测雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP)及CR-LNCaP中MRP4基因的表达变化。然后用慢病毒感染RNA干扰技术(RNAi)沉默CR-LNCaP(KD组)中MRP4表达,并设计未感染病毒的细胞株(CON组)及加阴性对照病毒感染细胞株(NC组)作为对照,应用MTS法、流式细胞术检测RNAi-MRP4后3组细胞的增殖活性及凋亡情况。结果 CR-LNCaP中MRP4 mRNA(0. 89±0. 18 vs. 0. 35±0. 10,P <0. 05)和蛋白(0. 92±0. 28 vs.0. 12±0. 05,P <0. 01)明显高于LNCaP。KD组中MRP4 mRNA(0. 15±0. 01)及蛋白表达(0. 09±0. 02)明显低于CON组(mRNA:0. 95±0. 15,P <0. 01;蛋白:0. 91±0. 11,P <0. 01)及NC组(mRNA:0. 85±0. 11,P <0. 05;蛋白:0. 83±0. 09,P <0. 01)组,并伴随细胞增殖能力下降(P <0. 05)及凋亡数目增加(P <0. 01)。结论雄激素依赖性前列腺癌向CRPC转变过程中伴随有MRP4过表达,下调MRP4表达有抑制肿瘤细胞增殖及促凋亡作用,提示MRP4有可能成为CRPC治疗的新靶点。

摘要：目的:蒙特卡洛模拟评价标准给药方案(600 mg/q12h)的利奈唑胺(LIN)静脉治疗中国成人休克患者常见革兰阳性(G+)球菌感染的临床有效性与安全性。方法:搜集LIN静脉给药在中国成人休克患者中的群体药动学参数及其对常见G+球菌的最低抑菌浓度值(MIC)和其分布频率,分别以24 h血药浓度-时间曲线下面积与MIC之比(AUC24h/MIC)和稳态最小血药浓度(CminSS)作为研究微生物学疗效和临床安全性的目标指数,模拟10000例次后得到对应目标(AUC24h/MIC≥80,CSSmin<7 mg·L-1)的达标概率(PTA)。结果:对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌和屎肠球菌,仅当MIC≤2 mg·L-1时方可达满意抗菌活性(PTA=100%),而对肺炎链球菌,均可达满意抗菌活性(PTA=100%);CminSS与协变量血小板计数呈负相关关系,当CminSS<7 mg·L-1时的PTA为6.53%。结论:对于LIN静脉治疗中国成人休克患者金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌和屎肠球菌感染,当MIC≤2 mg·L-1时,标准给药剂量能获得较好抗菌疗效,而对于肺炎链球菌感染则均可达满意抗菌活性。此类患者标准给药剂量方案下其血小板减少症风险亦较高,必要时应根据临床情况适当减量。

摘要：为了更好防治由出血性大肠杆菌O157∶H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗时具有很大优势。构建表达tir和stx1b的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stx1b亚基基因72个氨基酸串联构建pGEX-stx2b-tir-stx1b重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右。重组蛋白纯化后皮下途径免疫小鼠,能够诱导高滴度(105)的IgG,鼻腔内途径免疫小鼠不仅能够诱导高滴度(104)的IgG,还能诱导高达102的IgA。二免后攻击50LD50的EHECO157∶H7,相对于对照组,免疫组粪便中排菌量明显降低、排菌时间明显缩短。结果表明:该融合蛋白免疫原性良好,并且由Tir、Stx2b和Stx1b三部分抗原组成,可刺激机体产生针对转位紧密素受体(Tir)和志贺毒素(Stx)的抗体,在EHECO157亚单位疫苗设计或单克隆抗体抗制备中具有重要价值。

摘要：siRNA的"脱靶效应"(off-target effects)是RNA干扰应用研究领域的热点问题.采用蛋白组学技术对质粒介导的siRNA稳定沉默原癌基因c-myc可能存在的"off-target"效应进行初步研究,为siRNA靶向特异性的系统评价奠定理论与实验基础.构建靶向c-myc的siRNA真核表达质粒p-Mat01-1及其错配质粒p-Mis09-1,空质粒pEGFP-C1为对照,并稳定转染MCF-7人乳腺癌细胞.通过RT-PCR和Western印迹分析结果显示p-Mat01-1稳定转染克隆中c-myc/c-MYC的表达降低.采用2-DE及LC-ESI-MS/MS等方法,研究了p-Mat01-1与pEGFP-C1稳定转染克隆的蛋白组表达差异.结果显示,p-Mat01-1稳定转染克隆中有47个c-myc非调控蛋白点表达升高或降低,约占423个随机检测蛋白点的11.1%.这些蛋白涉及细胞骨架、代谢、增殖、信号传导、分子伴侣、氧化还原等多条途径.实验结果表明,质粒介导靶向c-myc的siRNA在MCF-7细胞中存在明显的"off-target"效应,提示在设计siRNA实验及应用研究时应系统考察其靶向特异性.

摘要：[目的]测定H9N2AIV4个毒株血凝素基因序列,并进行比较分析,从分子生物学角度了解各毒株间的差异和变异规律,进而了解该亚型禽流感的分布及流行规律。[方法]参照H9N2亚型禽流感HA基因序列设计1对引物,对禽流感A/Chicken/Hebei/WD/98(H9N2)、A/Chiken/Hebei/ZD/04(H9N2)、A/Chicken/Beijing/MY/06(H9N2)和A/Chicken/Beijing/PG/08(H9N2)4个毒株HA基因进行扩增、克隆和测序,并将这4个毒株的HA基因序列分别与GenBank登录的10个H9N2亚型禽流感毒株(序列号分别为AF156376,AF156377,AF156378,AF461517,AF461519,AF461521,AF461530,AY364228,AY862606,D90305)进行比较分析,并绘制进化树。[结果]4个毒株HA基因(ORF)全长1683bp,编码561个氨基酸;4个毒株之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为92.5%～95.6%和95.2%～96.8%,其中MY株和ZD株HA基因同源性和氨基酸同源性均为最高;WD株、MY株、PG株和ZD株与其他10个毒株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为82.6%～95.1%、83.0%～99.0%、82.7%～95.5%和81.30%～95.7%、86.6%～96.3%、86.6%～97.9%、87.0%～97.1%、86.9%～97.3%,遗传进化树分析表明,H9N2的HA基因的进化树有2个大的分支,分为2个种系:欧亚种系和北美种系。欧亚种系又分为3个群系,分别以A/Quail/HongKong/G1/97(AF156378),A/Duck/HongKong/Y439/97(AF156377)和A/Duck/HongKong/Y280/97(AF156376)为代表株,将这4个分离株与国内一些参考株、韩国代表株(AY862606)以及上述欧亚种系代表株的HA基因序列进行比较。结果表明,MY株、WD株、PG株和ZD株均属于欧亚种系,并且都属于A/Duck/HongKong/Y280/97群系,与国内参考株的亲缘关系都较近,而MY株与A/Chicken/Shandong/2/99(AF461521)亲缘关系最近。PG株与A/Chicken/Liaoning/2/00(AF461519)的亲缘关系最近,氨基酸同源性达到97%。ZD株与A/Chicken/Beijing/1/97(AF461530)的亲缘关系最近,核苷酸和氨基酸的同源性都是最高的,分别达95.7%、97.3%。韩国株(AY862606)则属于A/Duck/HongKong/Y439/97(AF156377)群系。总体来看,这4个分离株与国内参考株亲缘关系较近,而与韩国株(AF156377)较远。4个分离株除WD株的HA基因裂解位点为PSRSSR/GLF,MY、PG和ZD株的HA基因裂解位点均为PARSSR/GLF,WD株裂解位点附近的A变为S,也就是由丙氨酸变为丝氨酸,S也是非碱性氨基酸,因此,致病力没有变化,这4个分离株均为低致病性禽流感病毒。HA基因的几个受体位点分别为109aa,161aa,163aa,191aa,198aa,202aa,203aa,通过比较除了PG株的198aa为丙氨酸(Ala),其他3个都为缬氨酸(Vla)。编码198aa的3个碱基由GTG突变为GCG,其他参考株的198aa变异性也较大,A/Duck/HongKong/Y439/97(AF156377)和A/Quail/HongKong/G1/97(AF156378)的198aa都是谷氨酸(Glu),还有的国内株为T。这4个分离株的其他几个受体结合位点的氨基酸都是一样的,然而,通过对10个参考株的比较发现,191aa也容易发生变异,有的变为组氨酸(His)。202aa和203aa在所有的毒株中都比较保守。[结论]HA基因在不同毒株间具有很高的同源性。但有很多因素能够影响其HA基因的变异,从而影响其致病力,这与地域因素有很大的相关性,因此,应加强地域间的防控。