摘要：目的构建pEGFP-N1-BRCC3真核表达重组质粒,鉴定并检测其在HEK293细胞中的表达。方法根据去泛素化酶BRCC3(人的同源物称为BRCC36)基因cDNA克隆基因序列和表达载体增强绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP-N1)质粒上的多克隆位点设计引物,利用RT-PCR从小鼠脑组织中提取BRCC3全长基因作为目的DNA片段,选择HindⅢ/SalⅠ内切酶将目的片段与pEGFP-N1真核表达载体进行双酶切,然后用T4连接酶连接,导入大肠杆菌经过转化、抗性筛选、质粒提取等过程获得融合的重组质粒,并再次双酶切电泳后初步筛选出可能正确的重组质粒,进而寄送公司进行DNA测序分析,通过DNAMAN软件比对,鉴定出目的基因BRCC3成功插入pEGFP-N1的重组质粒,以脂质体介导法转染HEK293细胞,通过Western blot检测BRCC3蛋白的表达。结果 DNA测序结果显示,pEGFP-N1-BRCC3重组质粒中目的DNA序列及方向完全正确,开放阅读框正确无误,表明重组pEGFP-N1-BRCC3质粒构建成功,将其转染HEK293细胞后,Western blot检测BRCC3蛋白表达明显增加。结论成功构建了pEGFP-N1-BRCC3真核表达重组质粒,并能在HEK293真核细胞中有效表达,为深入研究BRCC3基因在神经生物学领域的功能提供了实验基础。

摘要：目的:设计并研发一种适用于小儿哮喘临床随访的专病库系统,使临床专科医师能在信息系统的辅助和支持下,开展高质量的专病研究。方法:通过专科医师、信息管理部门协同研发一个系统,包括定义小儿哮喘专病数据采集表、规范纳入和排除标准、建立入组流程、升级门诊医生工作站、搭建医患交互平台,将多来源数据整合形成临床科研一体化的专病库系统。结果:该小儿哮喘专病库系统建设了一个能将患儿首诊、复诊及随访数据进行整合,实现多维数据高效采集并良好整合和呈现的系统,在哮喘专病门诊为小儿哮喘队列研究的患者自动入组、数据自动采集、长期随访管理等多种功能提供了信息化支持。结论:信息化专病库系统在临床上为高效开展专病队列患者入组和随访提供了技术支持,为专病数据采集和管理提供了解决方案,有效提升了专病队列研究的效率。

摘要：背景在医院医疗信息中自动抓取真实世界数据用于临床研究和管理备受关注。目的构建电子病例报告表(eCRF)数据采集平台,实现真实世界数据服务于临床研究和疾病管理。设计数据建模。方法系统文献检索和提取儿童肺炎变量形成变量池,审核专家根据变量池确定核心变量,开发临床数据交换标准协会eCRF表单。验证和修正变量后,构建和完善平台数据中采集测试模型,测试数据采集能力,并行测试数据采集时效性和系统安全性分析。主要结局指标儿童肺炎采集数据的应答率。结果审核专家选择了7部指南、4部诊疗建议、10部专家共识和9部经典专著作为变量的来源,确定了18个域及其335个可自动采集的儿童肺炎变量,经5轮测试评估和改进修正结果。人口学信息模块(8个变量)第1~5轮均100%达标。结构化信息模块(175个变量)第1轮89.7%达标,第2~5轮均100%达标。文本数据模块(152个变量)第1轮50.0%达标,未达标变量数21个,未出现变量数70个;第5轮90.1%达标,未达标变量数7个,未出现变量数8个。总体达标率为95.5%(320/335)。检测变量均能够在数据产生的24 h内实现自动采集,均可实现数据的核查和锁定功能。结论构建的儿童肺炎eCRF数据采集平台可以实现在医院医疗信息中自动抓取真实世界数据,服务于临床研究和疾病管理。

摘要：目的基于4D-CT确定肝转移癌的运动特征,比较3D-CT、4D-CT和门控CT计划的几何学和剂量学的差异。方法选取从2018年9月至2019年12月期间在本单位治疗的9位肝转移患者,每位患者分别进行3D-CT扫描和加上时间维度的4D-CT扫描,并选择呼吸末40%~60%的时相重建的平均图像作为门控CT;在每套CT图像上勾画肿瘤可见病灶大体肿瘤靶区(Gross Tumor Volume,GTV),分别加上不同的外扩边界得到计划靶区体积(Planning Target Volume,PTV)3D、PTV4D和PTVGate,为每套CT的靶区设计治疗计划,同一位患者的三种不同靶区计划的处方和布野方式相同,比较三套计划中靶区和危及器官的体积大小和剂量学差异。结果研究表明,9位患者的原发病灶GTV在头脚方向运动明显大于左右和前后方向,平均数值分别为(0.75±0.37)、(0.16±0.08)、(0.45±0.244)cm。同时靶区PTV3D的体积最大,平均值(117.11±65.06)cm^3,PTV4D靶区体积的平均值为(84.92±52.14)cm^3,PTVGate靶区体积最小,其平均值为(65.81±42.74)cm^3。三种计划靶区PTVs的剂量D1、D99和Dmean差异不大,没有统计差异。对正常器官的保护,肝脏的平均剂量Plan3D为(11.35±5.49)Gy,Plan4D为(10.22±5.73)Gy,PlanGate的剂量最小为(9.144±5.462)Gy。在右肾的保护上,平均剂量从Plan3D的6.36 Gy降到了门控计划的3.93 Gy(P=0.049)。胃的高剂量从19.47 Gy降到15.42 Gy(P=0.048),所以门控计划对肝脏、右肾和胃的保护明显优于其他两个计划,但是在小肠及脊髓的剂量比较没有统计学差异。结论我们的研究证实了门控技术在肝转移癌患者放射治疗中能够减少PTV的体积,从而更好的保护正常器官。

摘要：目的研究和评估乙型肝炎病毒(HBV)DNA G1896A点突变的实时荧光PCR检测方法。方法收集经测序验证HBV DNA G1896A未突变的野生型样本150例和已发生突变的突变型样本58例,在突变区域设计分子信标探针,点突变处进行锁核酸处理,利用荧光PCR方法检测HBV前C区G1896A点突变;再从临床标本中随机抽取18例、8例和19例荧光PCR结果分别显示为G1896A突变的标本、杂合的标本以及野生型的标本的PCR产物进行序列测定。结果突变型质粒和野生型质粒的检测灵敏度均可以达到100copies/ml;突变型探针检测高浓度的野生型质粒时无检测信号,野生型探针检测高浓度突变型质粒时无检测信号;突变型模板在总杂合模板中的比例达到5%时则都可以将突变型检测出来;序列测定的8例G1896A突变标本、6例杂合标本和19例野生型标本的PCR产物结果和荧光PCR检测结果完全吻合。结论实时荧光PCR检测方法可以快速、简便、准确地检测HBVDNAG1896A点突变,是检测点突变的重要方法,具有重要的临床应用价值。

摘要：目的探索早期预测儿童难治性肺炎支原体肺炎(RMPP)的方法。方法前瞻性多中心研究,收集2019年5月1日至2020年1月31日在浙江13家医院就诊的1428例发热>48~48~<120 h的肺炎支原体肺炎患儿,可根据首次就诊前的最高体温和LDH水平计算RMPP的预报概率,以期达到早期预测RMPP的目的。

摘要：为了明确新选育的饲料大麦品种川农饲麦1号作青贮用时的适宜收获时期及其栽培技术,采用4因素5水平二次回归通用旋转组合设计方法研究了播种密度(X1)、播种期(X2)、收割期(X3)和氮肥用量(X4)4个因素在成都种植时的最佳栽培技术模式。其鲜质量产量为目标函数Y(kg/667 m^2)的数学回归模型为:Y=2 172.172 1+104.449 7 X1-276.310 1 X2-76.485 3 X3-64.818 1 X4+3.789 9 X12+42.680 7X22-5.377 3 X32+13.234 8 X42+7.778 2 X1X2-105.005 2 X1X3-2.222 3 X1X4+27.223 6 X2X3+91.115 7 X2X4-23.890 1 X3X4。全株鲜质量产量大于3 500 kg/667 m2时的农艺措施优化组合方案为:播种密度为9.89~11.32 kg/667 m^2,播种期为10月24—26日,收割期为4月13—18日,氮肥用量为10.83~16.71 kg/667 m^2。在4个参试因素中,播种期对全株鲜质量产量的影响最大,其次是播种密度,氮肥施用量对全株鲜质量产量的影响最小。

摘要：采用随机区组试验设计研究了赣南生态条件下移栽期和移栽方式对烤烟生长及产质量的影响。结果表明,膜下小苗移栽能够促进烟株前期生长和烤后烟叶经济性状,但烤后杂色烟叶比例较高、用工成本高。井窖式移栽操作简便、较为省工,但易受到土壤类型和土壤湿度的影响,前期生长较慢。改良井窖式移栽有效克服了前两者的缺点,有利于烟株早生快发,烟叶质量和经济效益均得到提升,且生产用工成本合理,适宜在赣南烟区推广。

摘要：特高压GIS基础全天候移动暖棚施工车间能够营造一种密闭环境,克服外部环境对GIS基础混凝土浇筑及养护的影响,同时车间内设有智能监测系统,能够保证GIS大体积混凝土冬季施工安全、质量和进度,为后续电气安装创造良好条件。介绍了特高压GIS基础全天候移动暖棚施工车间的研制背景、设计形式及智能管控系统、工程应用情况和效益等内容。全天候移动车间在长治站扩建工程GIS基础混凝土冬期施工中成功应用,说明严寒条件下,其可有效隔离外界不利环境的影响,实现连续施工,保证了工程进度,提高了基础施工质量管控精度。

摘要：目的:建立一种基于qRT-PCR的微量细胞中和实验改良法,快速、定量检测汉滩病毒感染中的中和抗体活性。方法:将本室前期制备的抗汉滩病毒高中和活性鼠源性单抗3G1、鼠/人嵌合单抗1D9和感染剂量为100 TCID50的病毒混合液于37℃孵育1 h后感染Vero-E6细胞,提取细胞总RNA。根据GenBank数据库中汉滩病毒76-118株S基因序列设计特异性引物,在上述实验基础上以细胞总RNA为检测样品,建立qRT-PCR快速、定量检测汉滩病毒感染中中和抗体活性的实验方法。结果和结论:建立了一种基于qRT-PCR的微量细胞中和实验改良法,可定量测定汉滩病毒感染中的中和抗体活性,该法具有快速、灵敏、特异和重复性好等优点。