摘要：真实世界研究可利用临床实际产生的数据,通过科学合理的研究设计及严谨的数据治理工作,形成真实世界证据,与随机对照试验形成互补的关系。数据治理包括数据链接、数据提取、数据核查、数据清理4个步骤。其中,数据链接的核心在于患者识别码的治理,应确定唯一、无重复的患者ID序列,并进行“纵向锁定”;数据提取的核心是同质化操作,可通过背靠背、培训、预提取、格式限定等方法,减少不同操作人员间的差异;数据核查的难点在于选择恰当的核查范围,可采用抽样核查和全面核查相结合的方式,在保证有效核查的前提下减少核查工作量;数据清理的重点在于对核查出的重复数据、矛盾数据、极端值和缺失值等各种问题数据制定恰当的清理规则。本文以“中西医结合治疗新型冠状病毒感染研究型数据库”为例,对研究中数据治理的方法进行介绍,以供研究人员参考。

摘要：目的：了解临床医护人员在心肺复苏时给药途径的情况及方法，并加以分析，以便提出正确的观点。方法：采用非试验性描述性研究，自行设计问卷随机调查了天津５ 所医院急诊科医护人员７６ 名，其中医生３３ 名，护士４３ 名。结果：目前心肺复苏给药途径以静脉给药为主。在无静脉导管的情况下，医护人员在静脉部位的选择上有６７１ ％ 的人选择手背或足背静脉给药。在给药方式上，有５１３ ％ 的人回答从输液器与针头的衔接处给药，有４４７ ％ 的人回答从莫菲氏滴壶给药。在给药后的处理问题上，有９３５ ％ 的人给药后不用１０ ｍｌ 生理盐水冲洗或加快输液速度２ 分钟抬高给药侧肢体。结论：临床有关医护人员应加强心肺复苏知识的继续医学教育，不断地补充新知识，以适应现代医学发展的需要。

摘要：原核表达并纯化马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)糖蛋白(glycoprotein,GP)受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白,并以此为抗原免疫家兔制备抗MARV-GP-RBD多克隆抗体。参照GenBank提供的MARV GP全基因序列,找到主要抗原表位区域,设计特异性引物,采用PCR方法扩增RBD基因,扩增产物经双酶切(EcoRⅠ/XhoⅠ)后定向克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a(+)-GP-RBD,转化BL21(DE3)感受态表达宿主菌,在不同条件下(时间、IPTG浓度、温度)诱导表达目的蛋白,并用His-Band N+柱进行亲和层析纯化;以纯化的重组pET-30a(+)-GP-RBD蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。通过SDS-PAGE、Western blot和IFA鉴定重组蛋白的反应原性及免疫原性。结果显示:PCR扩增到长度为453bp的RBD基因片段;构建的重组质粒pET-30a(+)-GP-RBD经双酶切后得到与目的片段长度相同的特异性条带,测序结果显示没有突变;转化产物在培养7h、终浓度为0.4mmol/L IPTG和37℃条件下能够充分诱导目的蛋白表达,得到相对分子质量为25 000的重组蛋白,主要以包涵体形式存在,BCA试剂盒产量测定,每升诱导的重组菌可纯化约20mg纯度较高的目的蛋白;Western blot检测证实重组pET-30a(+)-GP-RBD蛋白能同时被抗His标签的单抗和兔源多抗识别并发生特异性反应,证明重组蛋白有良好的反应原性;IFA鉴定证实所制备的兔源多抗能够特异性识别表达MARV GP蛋白的重组杆状病毒rBacmid-GP-VP40,证明重组蛋白具有良好的免疫原性。结果表明:成功表达、纯化了MARV GP RBD蛋白,并完成了兔源多抗的制备,为MARV亚单位疫苗的制备和抗原、抗体检测方法的建立奠定基础。

摘要：在对深圳断裂带构造活动性演化分析的基础上 ,配合现今构造应力场平面和三维数值模拟 ,定量计算输水隧洞不同地段轴向与最大水平主压应力方向的夹角、深圳断裂带与隧洞交汇部位的现今活动量级范围以及深埋隧洞地段现今构造应力状态 。

摘要：利用大型活动式防雨棚,设计了3个施氮水平和2个水分水平,研究了氮水耦合对玉米产量和品质及氮肥利用率的影响。结果表明:控释尿素处理开花前玉米的地上部干重、叶面积指数低于常规尿素处理,开花后开始赶超常规尿素处理,收获时其籽粒产量和生物产量均显著高于常规尿素。适宜的水分和施氮显著提高了玉米的籽粒产量、蛋白质产量及氮肥利用率。从产量上看,在田间持水量的50%±5%(W1)处理中常规尿素N 150 kg/hm2(NU)和控释尿素N 150 kg/hm2(CU)的籽粒产量分别比对照提高15.77%和29.97%;在田间持水量的75%±5%(W2)中二者分别提高35.60%和40.87%,处理间差异均达显著水平。因此,与常规尿素相比,不论在干旱或水分适宜条件下,控释尿素能更好地协调玉米的地上、地下部生长,利于获得高产,而适宜的水分可以显著提高这种效果。

摘要：目的制备含有7种血清型肉毒毒素切割位点(SNAP25-VAMP)的特异性绿色荧光融合蛋白,在***中诱导表达,纯化后用于肉毒毒素活性测定。方法根据SNARE蛋白复合物中SNAPE25和VAMP基因序列及各血清型肉毒毒素(Bo NTs)的切割位点,设计合成含有SNAREs中突触小体(SNAP25)和突触小泡膜蛋白(VAMP)的Bam HⅠ-HIS6-SNAP62-Eco RⅠ-VAMP57C-TAA-HindⅢ(以下简称为SV)基因,连接至p ET-28a-GFP载体上,构建重组质粒p ET-28a-GFP-SV,转化感受态*** BL21(DE3),IPTG诱导表达后,经DEAE阴离子交换层析、Cu2+金属螯合层析、Q阴离子交换层析3步纯化,BCA法测定纯化产物的蛋白浓度,ELISA法检测B型肉毒毒素轻链蛋白(Bo NT/BL)活性。结果构建的质粒p ET-28a-GFP-SV经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的GFP-SV融合蛋白相对分子量约40 000,主要以可溶形式存在,蛋白浓度为18.4μg/μl,纯度可达70%以上。利用该融合蛋白的荧光强弱变化可测定Bo NT/BL活性大小,同时也可测定其抗体中和活性大小。结论制备的含有SV的特异性绿色荧光融合蛋白在***中获得了高效表达,为后续各型肉毒毒素活性检测及抗体中和毒素活性检测奠定了基础。

摘要：目的探讨"四证合一"模式对住院医师规范化培训的影响。方法随机抽取参加规培的100名专业型研究生学员进行问卷调查,问卷调查内容包括学员的基本信息、学员的环境信息、规培的制度设计、规培的效果分析、规培学员的意见和建议,运用SPSS 22.0软件对调查结果进行统计学分析。结果学员对住院医师规范化培训的印象总体比较积极。规范化培训对巩固学员理论知识,提高临床实践能力及专业技能有较好的作用。同时,规培学员中也存在学习冲突、就业等实际问题,需要进一步梳理解决。结论针对性优化培训方案,加强规培研究生临床思维与人文精神的培养,可以为进一步完善规培制度提供参考。

摘要：建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法。根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以EHEC O157:H7纯培养和模拟制备的3种阳性样品为原材料,对方法的敏感性和特异性进行分析。运用成功建立的二重PCR,从带菌率最高的牛粪便中检测EHEC O157:H7,并进行菌株分离和鉴定。成功建立了rfbE与fliC的二重PCR方法,rfbE与fliC引物比例为2.5∶1,PCR循环参数中退火温度为56℃,扩增片段长度rfbE为812 bp,fliC为625 bp。检测阳性临床样品检测敏感性可以达到10 cfu/g。检测24株非EHEC O157:H7大肠杆菌和15株非大肠杆菌,只有EHECO157:H7能够扩增出特异性的rfbE条带,EHEC O157:H7和EPEC O55:H7能够扩增出fliC。只有EHEC O157:H7能够同时扩增出rfbE与fliC 2条目的条带。从63份牛粪便样品中分离到4株EHEC O157:H7:生化试验表明4株EHEC O157:H7具有典型EHECO157:H7的生化特性;药敏试验表明4株EHEC O157:H7具有较为广谱的耐药性;rfbE序列分析与GenBank序列同源性介于97.3%～99.2%之间,fliC序列与GenBank序列同源性介于97.6%～100%之间;4株EHEC O157:H7对Balb/c小鼠的致病性有差异,EHEC O157:H728#和EHEC O157:H738#致病性强,EHEC O157:H73#和EHEC O157:H717#较弱。以rfbE和fliC为目的基因成功建立了二重PCR,敏感性和特异性良好,可用于临床样品的检测,提高细菌分离率。

摘要：目的克隆SARS冠状病毒(SARS-CoV)GD322株M基因,并进行序列分析。方法根据GenBank中公布的SARS冠状病毒Tor2株M基因序列,设计一对引物,用RT-PCR法从SARS-CoVGD322株基因组中扩增M基因片段。克隆至pET-32(a)载体,转化大肠杆菌BL-21后测序,利用DNAstar和ClustalX分析所测序列翻译的氨基酸与81株SARS-CoVM基因翻译的氨基酸序列的差异。结果该M基因与Tor2株M基因核苷酸同源性为99.86%;与已收集的81株SARS-CoVM基因所译氨基酸相比,和41株(占50.62%)M蛋白完全同源,37株(占45.68%)仅有一个氨基酸改变,同源性为99.55%,仅与3株(占3.70%)有2个氨基酸差异,同源性为99.10%。结论已获得具有代表性的SARS-CoVM基因重组质粒。

摘要：目的 通过母体乐-375、TCu380A和元宫-365 3种宫内节育器（IUD）的大样本上市后多中心随机对照试验,评价中国妇女使用IUD的安全性和有效性,为我国IUD荐优汰劣提供参考依据.方法 应用多中心随机对照临床试验对24 000例健康已婚育龄妇女进行健康筛查,采用分层区组随机分配3种IUD；在置器后的1～3、6、12个月进行随访,观察IUD的使用终止率.结果 3种IUD 1年的总终止率不同,元宫-365 IUD最低,为4.21％；TCu380A其次,为8.42％；母体乐-375最高,为13.91％（P＜0.01）；3种IUD 1年的意外妊娠发生率、脱落率、出血终止率和下移取出率均有差异.使用母体乐-375、有不良反应无医学处理、随访次数少、宫腔较深、IUD失败后再次使用是使用终止的高风险因素.结论元宫-365 IUD是发生终止风险最小的IUD种类；规范随访,及时处理不良反应可较大程度地减少发生终止的风险.