摘要：目的构建靶向cortactin基因的sh RNA重组质粒,并筛选出沉默cortactin基因效果最明显的sh RNA重组质粒。方法设计并合成3对针对cortactin基因不同位点的sh RNA片段,构建相应的重组质粒(命名为p BSilence1.1-cortactin-sh RNA1-3),并进行酶切鉴定和测序分析。通过脂质体转染方法将各重组质粒及阴性对照质粒分别转染至人肝癌Hep G2细胞中,转染24 h后荧光显微镜下观察各组细胞的转染情况,并采用RT-PCR检测各组细胞m RNA的表达情况。结果构建的重组质粒经酶切鉴定与测序分析证实完全符合设计要求,转染成功的细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光,3组重组质粒组Hep G2细胞的cortactin基因m RNA表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。与p BSilence1.1-cortactin-sh RNA1和p BSilence1.1-cortactin-sh RNA2两组相比,p BSilence1.1-cortactinsh RNA3组的cortactin基因m RNA表达降低更加显著(P<0.05)。结论成功构建并筛选的重组质粒能有效抑制Hep G2细胞中cortactin基因m RNA表达,为下一步研究沉默cortactin基因对肝癌细胞生物学行为的影响提供了实验基础。

摘要：流程架构设计是内部控制建设的重要环节,是控制活动的关键。本文全面阐述了中国石油集团公司流程架构设计及与内控建设的五大核心要素关系,分析了集团公司流程架构设计现状,给出了优化的建议。

摘要：针对细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)和CXC趋化因子受体4型(CXCR4)两个靶点,设计anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体的基因序列,C末端连接组氨酸标签(6×His标签),通过pET-22b(+)重组表达质粒转化大肠埃希菌*** BL21,经IPTG诱导表达,以可溶性形式存在于菌体裂解上清液。为了提高双特异性纳米抗体的产量和纯度,采用3种不同的方法进行样品制备和纯化。结果表明,通过机械裂菌并改进缓冲液的盐离子和咪唑浓度以及pH,经His Trap FF亲和色谱柱纯化后,对双特异性纳米抗体分离效果较好,目的蛋白产量超过1 mg/L,纯度可达到97%。同时,anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体能够与细胞表面两个抗原特异性结合,增强IL-2活化的人外周血单个核细胞(PBMC)对胰腺癌细胞株AsPC-1的杀伤能力,为其后续体内药效学评价奠定了基础。

摘要：HXN3型大功率交流传动内燃机车转向架车梯的安装折弯处螺栓孔位置产生严重的裂纹,影响了机车的安全运行。通过采用美国ANSYS公司商业版ANSYS软件对该型车梯的垂向、横向和纵向三个方向进行有限元强度分析,找出车梯产生裂纹的原因,并提出合理的改进方案。

摘要：随着靶向β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)和淀粉样蛋白轻链(amyloid light chain,AL)单克隆抗体的开发,建立一种有效的抗Aβ和AL单克隆抗体亲和力及其生物活性检测方法十分必要。Crenezumab是基于Aβ靶点研制的IgG4型全人源化抗Aβ单克隆抗体,对Aβ寡聚体具有较强的亲和力。前期计算机方法模拟抗体抗原分子结合试验证实,可能设计1种新型的抗体对2种抗原均有结合力和生物活性。本文基于研发同时具备抗Aβ和AL 2种抗原新型抗体的需求出发,以Crenezumab为例,建立间接ELISA方法,并用该方法分别检测Crenezumab抗体对Aβ寡聚体和AL纤维的亲和力。进一步建立SH-SY5Y细胞活性实验方法和ThT荧光分析方法,分别检测Crenezumab对Aβ和AL抗原的生物活性。本研究建立的检测方法可为同时靶向Aβ和AL的抗体的药学初步研究提供检测方法。

摘要：目的:针对污泥热泵干化时设备分布零散难以集群管控,以及污泥含水率数据无法实时检测等工程问题,研究设计了一种物联网监控系统。方法:分析讨论污泥热泵干化机的系统功能需求、总体方案设计、监控因子确定等因素,并对系统硬件、软件、物联网云平台等进行模块化设计,以STM32、NB-IoT和阿里云为核心开发了一种能实现数据采集、远程传输、设备上云、故障报警等功能的污泥热泵干化专用智能监控设备,最后进行了稳定性测试。结果:现场软件和硬件测试结果表明,该设备能够更快地完成实时数据采集和有效监控、报警,实行云端管理。结论:该智能监控设备有效地实现了污泥干化设备的集群管理和含水率的实时检测,实现了互联性和智能化,并具有操作简便、功能强和易于二次开发等优点。

摘要：目的采用长链非编码RNA(lncRNA)芯片检测在骨肉瘤与瘤旁组织中lncRNA表达谱,分析差异表达的lncRNA,探讨其功能。方法利用lncRNA芯片筛查2010年至2012年期间广州市第一人民医院和南部战区总医院7对骨肉瘤组织与瘤旁组织中lncRNA表达谱,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)验证芯片结果;分层聚类和火山图分析特征性表达lncRNA,结合基因本体论数据库(GO)分析和通路分析探讨lncRNA参与肿瘤细胞的生物过程。使用Agilent Array平台对样品进行微阵列分析。Agilent Feature Extraction软件分析采集阵列图像。GeneSpring GX v11.5.1软件包进行分子标准化和随后数据处理。采用重复测量设计的方差分析评价各组之间的变化,多组间比较采用单因素方差分析。结果筛选得到7组瘤组织中差异lncRNA总数为4221个,其中上调的1995个,下调的2226个;RT-qPCR验证结果与lncRNA结果基本一致;分层聚类分析显示骨肉瘤组织(T)和瘤旁组织(C)中的lncRNA表达差异有统计学意义;GO分析显示lncRNA广泛参与细胞的生物过程,还参与细胞的细胞器组成。结论lncRNA芯片能有效检测骨肉瘤组织差异性表达的lncRNA,结合分子生物学分析技术发现lncRNA参与骨肉瘤细胞多种生物活性过程。

摘要：为了解决电磁致动机构多物理场之间相互影响不明的问题,建立了电磁-结构多物理场耦合模型,并对微机电系统(Microelectromechanical System,MEMS)电磁致动机构的驱动特性进行了仿真研究。首先,以电压作为激励源,将磁矢势作为因变量引入,得到驱动器整体的磁场分布,实现电磁场耦合。然后通过麦克斯韦应力张量法得到滑块所受的电磁力,并作为载荷施加在滑块上进行瞬态动力学分析,实现电磁-结构场耦合,从而实现电磁致动机构的多物理场耦合仿真。最后,进一步研究了不同输入条件下电磁致动机构的驱动特性,阐明了响应时间、位移速度、最大电磁力和位移等不同输出条件的变化规律,分析了电压对驱动特性的影响,从而为MEMS电磁致动机构设计与驱动特性研究提供指导。

摘要：为提高地铁预应力桥梁孔道灌浆密实度检出率从而保障地铁运营安全,研究了针对预应力桥梁隐蔽病害的超声波检测技术。根据实际情况,分别设计了不同箍筋和配筋率的预应力混凝土试验梁作为检测试件,在试件中预设了不同材料类型及尺寸的人工缺陷进行对比。试验结果表明:超声波检测技术对地铁预应力桥梁孔道缺陷的检测效果较好,最小可以检测出尺寸为5cm的不密实缺陷。在北京某地铁线路的预应力桥梁进行了现场试验,结果与模拟试验结果基本一致。

摘要：目的:探讨Cortactin的氨基端序列在磷酸化介导的蛋白相互作用中的功能。方法:设计表达标签为GST的氨基端缺失的Cortactin突变体,纯化突变体蛋白,以及全长Cortactin蛋白,同时纯化His标签的细胞发动蛋白Dynamin,采用Src磷酸化Cortactin蛋白,并采用pull-down分析观察与Dynamin的相互作用。结果:成功表达和纯化Cortactin的1-80氨基酸(CortΔ80)缺失、1-349缺失的Cortactin突变体(CortΔ349),以及全长Cortactin(Cort WT)和Dynamin。Pull-down分析结果表明:与磷酸化的野生型Cortactin蛋白比较,氨基端缺失的Cortactin蛋白在磷酸化后与Dynamin的结合作用减弱。结论:实验提示Cortactin分子的氨基端是Arp2/3与actin结合的重要结构域其参与肌动蛋白聚合的过程,对于磷酸化信号的正常传导是不可或缺的部分。