摘要：在浆液的 anti-p53 抗体的存在是为癌症的 biomarker。然而，它的高敏感察觉仍然是在癌症诊断的一个问题。处理这挑战，我们使用了 fd 噬菌体，对人安全的细菌特定的病毒 nanofiber 那能被以一种无差错的方式感染主人细菌大量生产，并且遗传上设计了它显示能够在它的方面墙上认出并且捕获 anti-p53 抗体的肽。我们作为一根俘获探针采用了结果的噬菌体 nanofibers 开发连接酶的 immunosorbent 试金(ELISA ) 的一个修改版本方法，称为的 phage-ELISA。我们为 anti-p53 抗体的察觉把它比作传统的 ELISA 方法， p53-ELISA，哪个使用 recombinant 捕获 anti-p53 的野类型的 p53 蛋白质抗体。我们使用了 phage-ELISA 与恶意的肿瘤的各种各样的类型在 316 个病人的一个试验性的组检测 anti-p53 抗体。我们发现 17.7% 的察觉率(56 个积极盒子) 被 phage-ELISA 完成，它为 p53-ELISA (65 个积极盒子) 比得上 20.6% 的察觉率。然而，当噬菌体和 p53 被联合为 phage/p53-ELISA 形成捕获抗体的探针时， 30.4% 的察觉率(96 个积极盒子) 被完成。我们的工作证明由于由噬菌体 nanofibers 和 p53 的 anti-p53 抗体的联合俘获， phage/p53-ELISA 与癌症的各种各样的类型在病人为 anti-p53 抗体完成了最高诊断的精确性和察觉效率。我们的工作建议那 nanofibers 和抗原的联合，哪个俘获抗体，能导致增加的察觉敏感，它为在生命科学，临床的药，和环境科学的应用是有用的。

摘要：【目的】制备马缨杜鹃(Rhododendron delavayi)查尔酮异构酶(Chalcone isomerase,CHI)基因表达的重组蛋白并验证其活性,为解析查尔酮异构酶功能提供理论依据,为改良植物花色、增加药用成分奠定基础。【方法】根据所获得的马缨杜鹃查尔酮异构酶RdCHI1基因的序列信息设计引物,构建其原核表达载体,优化RdCHI1可溶性重组蛋白最佳诱导表达条件,制备可溶性重组蛋白并检测其活性。【结果】成功构建RdCHI1原核表达载体,RdCHI1重组蛋白可在上清中表达,最佳诱导条件为:15℃、36 h,IPTG浓度0.35 mmol·L^(-1)。经镍柱纯化得到质量较好的RdCHI1重组蛋白,通过体外酶活反应确定,与对照组相比,RdCHI1可以更快地催化柚皮素查尔酮(Naringenin chalcone)反应生成柚皮素(Naringenin)。【结论】RdCHI1为I型CHI,可极大提高柚皮素查尔酮生成柚皮素的速率,增加黄酮类物质积累量。

摘要：查尔酮异构酶(CHI)是类黄酮生物合成过程中的关键酶之一,其在类黄酮的合成过程中发挥着非常重要的作用。本研究以日本蛇根草为研究材料,根据其转录组测序结果设计全长引物,通过RT-PCR方法成功克隆得到日本蛇根草查尔酮异构酶基因完整的cDNA序列,并对其进行生物信息学分析。结果表明,该基因序列全长为702 bp,编码233个氨基酸,预测其蛋白分子量为25.018 k D,等电点为4.95,是亲水性蛋白质,不含有信号肽,很可能定位在叶绿体基质中。同时,二级结构分析显示,日本蛇根草CHI的二级结构分别由96个α螺旋、51个延伸链、86个无规则卷曲组成,这与三维结构预测结果相一致。日本蛇根草CHI基因的克隆对于研究植物类黄酮的生物合成及其分子机制具有重要意义,同时也丰富了双子叶植物CHI基因家族的相关研究。

摘要：查尔酮合酶(CHS)是类黄酮生物合成过程中的第一个关键酶,其在类黄酮的合成过程中发挥着非常重要的作用。本研究以日本蛇根草为研究材料,根据其转录组测序结果设计全长引物,通过RT-PCR方法成功克隆得到日本蛇根草查尔酮合酶基因完整的cDNA序列,并利用相关生物信息学软件对其进行分析。结果表明,该基因序列全长为1 170 bp,编码389个氨基酸,预测其蛋白分子量为42.783 kD,等电点为6.05,是亲水性蛋白质,不含有信号肽,很可能定位在细胞质中。同时,二级结构分析显示,日本蛇根草CHS的二级结构分别由180个α螺旋、84个延伸链、125个无规则卷曲组成,这与三维结构预测结果相一致。日本蛇根草CHS基因的克隆对于研究植物类黄酮的生物合成及其分子机制具有重要意义,同时也丰富了双子叶植物PKS基因家族的相关研究。

摘要：黄酮醇合酶(flavonol synthase, FLS)是艾纳香(Blumea balsamifera)黄酮醇化合物代谢途径中的一个关键酶,在黄酮醇化合物的合成代谢中扮演重要的角色。本研究利用产自贵州罗甸的艾纳香为研究材料,通过对其转录组进行测序,并设计引物成功克隆得到了其黄酮醇合酶基因的完整cDNA序列。通过生物学信息分析发现,艾纳香FLS基因全长1 008 bp,编码335个氨基酸,其蛋白分子量约为38.39 kD,等电点为5.96,属于亲水性蛋白,可能定位于细胞质中。同时,艾纳香FLS蛋白的二级结构中α螺旋含量最高,与三级结构预测结果一致。本研究对于探究黔产艾纳香黄酮醇类化合物的生物合成分子机制有一定的指导意义,也为将来黄酮醇类化合物的生物合成提供理论基础。

摘要：花青素还原酶(anthocyanidin reductase, ANR)是原花青素合成途径中的关键酶,同时花青素还原酶对植物花色苷的积累也发挥着重要作用。本研究以日本蛇根草为材料,以其转录组测序结果为基础,设计引物通过RT-PCR方法成功克隆得到日本蛇根草ANR基因完整的cDNA序列,利用生物信息学方法和工具对日本蛇根草ANR基因的功能结构域、生理和化学参数、亲/疏水性、信号肽、二级结构等进行预测和分析。结果表明,该基因cDNA全长为1 020 bp,编码339个氨基酸,预测其蛋白分子量为36.37 kD,等电点为5.92,为亲水蛋白,不含信号肽序列。综上,本研究成功克隆获得日本蛇根草ANR基因并完成其生物信息学分析,研究结果将为解析该基因的功能奠定基础。

摘要：查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)是艾纳香(Blumea balsamifera DC.)黄酮类化合物代谢途径的关键酶之一。本研究以产自贵州省罗甸县道地艾纳香为研究材料,参照艾纳香叶的转录组数据,设计PCR引物,成功克隆得到查尔酮合成酶基因的完整cDNA序列,利用生物信息学分析软件对其进行相关分析,包括氨基酸性质、信号肽、跨膜域、多序列比对、进化树构建以及蛋白的二、三级结构预测等,并且构建了CHS原核表达载体,在BL21宿主菌中可以表达目的蛋白,为黔产艾纳香中CHS的生物学研究提供依据,同时为艾纳香黄酮类物质的生物合成提供理论指导。

摘要：糖基转移酶是广泛存在于内质网和高尔基体内的一大类酶,参与体内重要生物活性物质如糖蛋白和糖脂中糖链的形成。本实验以日本蛇根草为研究材料,根据转录组测得的OjGT2基因序列设计引物,通过分子生物学方法克隆获得日本蛇根草OjGT2基因的cDNA序列,并完成了该基因及其编码蛋白质的生物信息学分析。分析显示,OjGT2基因的c DNA长度为1 041 bp,共编码346个AA,预测蛋白相对分子质量为52.37 kD,等电点为5.07,归属于糖基转移酶GTB超家族,含有多个糖基转移酶功能保守域,与其它植物糖基转移酶具有很高的同源性。研究结果将为该基因功能的解析及日本蛇根草糖基化代谢产物的研究提供参考。

摘要：糖基转移酶(GTs)是花色苷合成过程中最重要的修饰酶之一,其在花色苷合成过程中发挥重要作用。本研究以日本蛇根草为材料,依据其转录组测序结果,设计引物通过RT-PCR方法成功克隆得到OjGT1基因完整的cDNA序列,随后对OjGT1的功能结构域、生理和化学参数、亲/疏水性、信号肽,二级结构等进行生物信息学分析。分析结果显示,OjGT1基因完整的CDS长度为1 413 bp,翻译形成蛋白的分子量为52.087 kD,等电点为5.12,编码形成亲水性蛋白质,不含信号肽。同时二级结构与三级结构分析显示,OjGT1蛋白结构主要以不规则卷曲为主,其次是α螺旋,延伸链所占比重最小。OjGT1基因的成功克隆与生物信息学分析,将为后续研究茜草目其它植物糖基转移酶提供参考,同时也为日本蛇根草花色苷的生物合成研究提供科学依据。

摘要：类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶(3GT)是花色苷合成途径中首个修饰酶,在花色苷合成与积累过程中起关键作用。本研究以日本蛇根草作为材料,依据其转录组信息设计Oj3GT1基因特异性引物,通过RT-PCR等分子生物学方法,分离并获得Oj3GT1基因的完整cDNA序列,并对Oj3GT1的信号肽、功能结构域、理化参数、亲/疏水性和二级结构等进行了生物信息学分析。根据分析结果可知,Oj3GT1基因的完整CDS长度为1 377 bp,蛋白分子量为50.922 kD,等电点为6.20,属于亲水性蛋白质,不含有信号肽。同时二级结构分析结果显示,Oj3GT1的蛋白二级结构主要是以不规则卷曲为主。综上所述,Oj3GT1基因的克隆与生物信息学分析,将为日本蛇根草花色苷的生物合成研究提供科学依据,同时也为通过基因工程方法调控和改变日本蛇根草花色苷的合成提供理论支撑。