摘要：为建立一种适用于现场快速检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,本研究以PEDV N基因的保守序列为靶基因设计引物,优化并建立了基于RT-LAMP的PEDV快速检测方法。结果显示,RT-LAMP方法的最佳反应条件为:反应温度为61℃,反应时间为50 min,Mg2+和dNTPs浓度分别为8.0 mmol/L和4.0 mmol/L,外引物和内引物最佳浓度比为1.4。特异性试验结果显示,该方法只能检测出PEDV,对其他病原检测均为阴性,具有良好的特异性;敏感性试验结果显示,该方法能够检测出的最低RNA浓度为6.52×10^(-5)mg/L,而常规RT-PCR能检测到最低浓度为6.52×10-3mg/L,表明RT-LAMP敏感性是RT-PCR的100倍;重复性试验结果显示,批内和批间重复性试验结果无明显差异,重复性较好。利用RT-LAMP和RT-PCR方法分别对3份已知阳性样品,5份已知阴性样品以及52份未知临床样品进行检测。阳性样品经RT-LAMP和RT-PCR方法均检测到PEDV,阴性样品均未检测到PEDV。52份临床样品中,RT-LAMP对PEDV检测阳性率为23.08%(12/52);RT-PCR检测阳性率为17.31%(9/52),二者的符合率为94.23%。以上结果表明,建立的RT-LAMP方法具有成本低、检测快、灵敏度高、特异性强等优点。且结果易于判定、便于现场检测,在病原检测方面具有良好的应用前景,为该病的流行病学调查及综合防制提供重要的实验依据。

摘要：为了解云南糯玉米地方品种糯性waxy基因的等位变异类型与构成,有针对性地保护和利用携带稀有基因的珍稀遗传材料,在用糯玉米已知基因wx-D7、wx-D10、wx-Cin4、wx-124和wx-Reina等的特异分子标记检测并获得携带有未知糯性基因的云南糯玉米地方品种基础上,设计出能检测waxy全基因的11对分子标记,检测10份带有未知waxy等位基因的云南糯玉米地方品种,发现来自云南曲靖市辖宣威市的糯玉米地方品种糯包谷(统一编号232248)带有的waxy基因的突变位点。用简化的热交错不对称PCR(Tail-PCR)对该突变位点作进一步扩增和测序,并分析包含突变点在内的waxy基因的分子特征。宣威糯包谷的waxy基因在其第14外显子中插入了约4.9 kb的未命名反转录转座子,本研究将其命名为xuanwei(宣威)。该反转录转座子属于长末端重复(Long terminal repeat,LTR)反转录转座子,具有序列完全相同的LTR结构。因此waxy基因wx-xuanwei是一个反转录转座子插入造成的新的等位突变基因。

摘要：目的设计并合成4-(2',3'-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3-吡啶甲酸甲酯。方法以2,3-二氯苯甲醛为起始原料经缩合、环合、水解反应制备得到目标化合物。结果合成了目标化合物,并利用MS和1H-NMR确证了结构;HPLC归一化法测得质量分数为98.3%。结论 4-(2',3'-二氯苯基)-1,4-二氢-2,6-二甲基-3-吡啶甲酸甲酯的合成为丁酸氯维地平中杂质的研究提供了方便。

摘要：目的:探讨老年膝骨关节炎患者步行的时空参数指标、膝关节支撑期屈伸角度及地面反作用力与正常老年人的差异。方法:纳入2019年9月~2020年9月在我院收治的23例老年膝骨关节炎患者,按K/L分级分为轻度组(n=13)及中重度组(n=10),并招募10名正常老年人作为对照组,使用Vicon红外运动捕捉系统和AMTI对三组受试者进行步态采集,并对其步态时空参数指标、地面反作用力、膝关节支撑期内屈伸角度峰值等数据进行分析。结果:中重度组的步速、步幅、患侧支撑相时与轻度组、对照组比较,差异均有统计学意义(P<0,05);对照组与轻度组、中重度组的患侧支撑相膝关节最大屈曲角度时相与支撑相膝关节最大伸直角度比较,差异均有统计学意义(P<0.05);患侧与健侧垂直地面反作用力的第一峰值、第二峰值、谷底对照组与轻度组、中重度组相比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:膝骨关节炎患者伸肌群力量下降、膝关节屈伸活动度降低,造成患者步速、步幅、垂直地面反作用力等明显低于身体健康的人群,缓冲体重能力出现不同程度的下降。上述指标均可判断老年膝骨关节炎的严重程度,在医学领域具有应用价值。

摘要：采用政策研究法、文献研究法、问卷调查法和结构化访谈法,剖析重庆市公立医院成本核算实践过程存在的问题:医院成本核算整体处于不完全科室成本核算阶段;医院成本核算实践基础薄弱,多因素制约成本核算工作开展;医院科室归类、编码与三级分摊参数选择等核心技术缺乏标准化体系;医院成本核算外生压力和内生动力不足;医院成本核算结果运用广度和深度不足。因此建议:强化顶层设计,完善公立医院成本核算的体制机制;健全公立医院标准化成本核算体系,制定具体的行业操作指导规范;夯实公立医院成本核算基础,分步分类推进成本核算实践;细化成本核算功能内涵与外延,拓宽成本核算结果运用范围。

摘要：应用分子马达生物传感技术,建立食品中诺如病毒特异性快速检测方法。以嗜热菌中提取的载色体(chromatophore)为材料,根据诺如病毒ORF1和ORF2连接处的高度保守区设计探针,利用生物素-亲和素系统将诺如病毒探针连接在F0F1-ATPase的ε亚基上构建生物传感器。提取病毒RNA并将其与生物传感器结合的同时启动ATP合成,比较其荧光强度的差别,对样品中的RNA进行检测。建立并优化了F0F1-ATPase生物传感技术检测食源性诺如病毒的方法。所建立的方法具有良好的特异性,12个含诺如病毒样品均能检出,3个不含诺如病毒样品均未检出,无假阴性或假阳性情况出现。该方法可在1 h内完成检测,检测灵敏度在RNA水平上达到0.005 ng/m L。所建立的分子马达生物传感技术可以较好的检测食品中的诺如病毒,并为其他病毒的检测提供参考。

摘要：目的研究一种适用于胆碱酯酶试剂盒比色法原理的农药残留检测仪的校准方法。方法经过对农药残留检测仪的波长稳定性及示值误差,透射比示值误差及重复性、通道差异、灵敏度等性能指标的实验和研究,建立该特定原理的农药残留检测仪的校准方法。结果起草农药残留检测仪校准规范,提出了仪器的校准项目与技术指标,确定了校准用的仪器设备,设计了完备的校准方法,使农药残留检测仪的量值溯源准确、可靠。结论制订国家统一的计量校准规范,完善农药残留检测仪的量值溯源体系,为统一相关量值发挥重要的作用。

摘要：目的了解河北省石家庄市活跃青壮年群体艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)防治知识和态度,为艾滋病防治工作提供依据。方法在石家庄市大型商厦、写字楼内50个免费发放瓶装水的广告机上,通过扫码答题的方式进行调查,采用SPSS 21.0软件建立数据库,用χ^2检验进行统计分析。结果本研究共开展四轮调查,共30 487人次参与。72.64%的被调查者认为艾滋病与自己有关,98.16%知晓艾滋病可通过性、血液、母婴3种途径传播,65.81%知晓跟艾滋病病人一起吃饭不会被传染,38.26%知晓蚊虫叮咬不会传播艾滋病;36.82%了解艾滋病需要通过医学检测诊断;不发生婚前和婚外性行为、性行为中正确使用安全套可以有效预防艾滋病的知晓率分别为94.75%和94.20%,80.05%的人知晓暴露后预防性用药可以降低感染风险,52.24%知晓拒绝与艾滋病病人在一个办公室工作并不是预防艾滋病的措施。女性对艾滋病的非传播途径知晓率均高于男性,差异均有统计学意义(P均<0.05);不同年龄组间对艾滋病的传播途径、诊断、预防知识知晓情况差异均有统计学意义(P均<0.05),20~35岁年龄组知晓率相对较高,<20岁年龄组知晓率较低。结论石家庄市活跃的青壮年群体对共同抵御艾滋病态度积极,对艾滋病的传播途径和预防措施有基本的认识,但对艾滋病的诊断知识了解不足,对日常生活接触是否传播仍有疑虑,存在对感染者的歧视,<20岁的青少年防治知识知晓率存在一定差距。

摘要：目的应用德尔菲法构建一套比较完整的高血压风险敏感指标体系,为设计行为干预计划,进一步提高高血压患者的治疗依从性提供指导。方法通过查阅相关文献,专家讨论以及结合患者实际情况初步制定4个一级指标,25个二级指标,在此基础上运用德尔菲法,通过对15名专家2轮问卷咨询确定高血压风险敏感指标体系。采用SAS 9.13软件进行统计分析,重要性评价采用x±s进行描述,专家一致协调程度用变异系数及协调系数表示,采用Kendall W检验计算专家协调系数。结果确定的高血压风险敏感指标体系共有心血管风险指标、生化指标、脏器功能损伤、并发症风险和生活方式5个一级指标和23个二级指标;两轮专家的积极系数分别为100%和93.33%;两轮专家咨询的平均权威系数分别为0.89和0.91;两轮专家咨询意见的协调系数分别为0.283和0.435,有统计学意义(P<0.01)。结论本次研究建立的"高血压风险敏感指标体系"具有一定的科学性,合理性,有待今后在高血压患者中进一步验证其效果。

摘要：目的研究甲状腺癌5种驱动基因RAS(KRAS,NRAS,HRAS)、BRAF和TERT突变与临床病理特征的关系,以期细化甲状腺癌主要驱动基因突变的人群特征,在临床实践中为患者提供更精准的分子分型检测指导。方法回顾性收集319例甲状腺癌患者的临床病理特征和5种基因突变状态资料,分析各基因突变状态与患者年龄、性别、病理类型的相关性。结果 319例患者的RAS(KRAS,NRAS,HRAS)、BRAF和TERT突变频率分别为5. 3%、45. 1%和12. 9%。其中37例患者检出双基因突变(11. 6%);BRAF和TERT共突变发生频率最高,为9. 4%;其次为NRAS/TERT共突变4例。RAS和BRAF的突变状态与患者病理类型显著相关(均P<0. 01);RAS突变在滤泡性癌中比例高;BRAF突变主要见于乳头状癌,滤泡性癌中少见;TERT突变在乳头及滤泡性癌中均可见,在滤泡性癌中比例增高,但无统计学意义。此外,RAS/BRAF/TERT基因突变患者的平均年龄分别为52. 5岁、44. 6岁和59. 5岁,均显著高于总体平均年龄(40岁)(P <0. 01);而<19岁的青少年患者(31例)仅1例检出BRAF基因突变;所有病例其他驱动基因均为阴性。结论甲状腺癌RAS(KRAS,NRAS,HRAS)、BRAF和TERT驱动基因突变与患者的病理分型及年龄相关。青少年甲状腺癌患者RAS(KRAS,NRAS,HRAS)、BRAF和TERT驱动基因突变发生频率极低,在临床实践中需有针对性的设计基因检测方案。