摘要：Background： A comprehensive metabolism network of engineered E. coli is very important in systems biology and metabolomics studies. Many tools focus on two-dimensional space to display pathways in metabolic network. However, the usage of three-dimensional visualization may help to understand better the intricate topology of metabolic and regulatory networks. Methods： We manually curated large amount of experimental data （including pathways, reactions and metabolites） from literature related with different types of engineered E. coli and then utilized a novel technology of three dimensional visualization to develop a comprehensive metabolic network named SynBioEcoll. Results： SynBioEoli contains 740 biosynthetic pathways, 3,889 metabolic reactions, 2,255 chemical compounds manually curated from about 11,000 metabolism publications related with different types of engineered E. coil Furthermore, SynBioEcoli integrates with various informatics techniques. Conclusions： SynBioEcoli could be regarded as a comprehensive knowledgebase of engineered E. coli and represents the next generation cellular metabolism network visualization technology. It could be accessed via web browsers （such as Google Chrome） supporting WebGL, at http：//***/synbioecoli/.

摘要：【目的】建立藤黄生孢链霉菌NRRL 2401的遗传操作系统和基因文库,以便筛选次级代谢产物生物合成基因。【方法】利用大肠杆菌和链霉菌的属间接合转移的方法,以整合型载体pPM927、pSET152和复制型载体pJTU1278构建链霉菌遗传操作系统。以pCClFOS^(TM)载体,大肠杆菌EP1300^(TM)-T1~R为宿主菌构建Fosmid文库。随后,设计引物,利用"板池-行池-单克隆"的三级PCR方法对文库进行快速筛选。【结果】pPM927、pSET152和pJTU1278均成功转入藤黄生孢链霉菌NRRL 2401,其中pSET152载体的转化效率最高。构建了稳定高效的藤黄生孢链霉菌NRRL 2401的基因文库,含2880个克隆,平均插入片段大小约为35 kb,空载率小于1%,文库覆盖率为99.99%,覆盖基因组16.5倍。同时,初步筛选出可能含有吲哚霉素生物合成基因簇的9个阳性克隆。【结论】成功构建了稳定高效的藤黄生孢链霉菌NRRL 2401遗传操作系统和高质量的基因文库,为克隆该菌中次级代谢产物生物合成基因簇以及进一步遗传改造奠定了基础。

摘要：【目的】采用特征次级代谢产物生物合成的保守功能基因探针,定向分离土壤中产生特征次级代谢产物的菌种资源,借助基因转录分析为导向的培养基优化方法,获得目标次生代谢产物。【方法】首先,根据5种特征次级代谢产物保守的合成功能基因设计简并引物,定向从土壤样品中筛选、分离并纯化菌株。然后,以RT-qPCR为指导开展目标产物的发酵培养基优化;最后,对菌株进行发酵,利用多种色谱技术分离纯化目标天然产物,并结合高分辨质谱与核磁共振等技术对所获得的化合物进行结构鉴定。【结果】从土壤中筛选得到了一株AHBA合酶基因和环氧化酶基因均为阳性的链霉菌菌株(编号为CQ01819),根据转录分析优化发酵培养基,最终从该菌株分离纯化得到了含有AHBA结构单元的丝裂霉素C、聚醚类抗生素莫能霉素A和缬吲霉素。【结论】本研究通过菌株的定向分离纯化,筛选得到了产生预期抗生素的浅紫灰链霉菌菌株CQ01819;基于RT-qPCR指导的发酵培养基优化,确定了菌株的发酵条件;获得发酵粗提物后,采用多种色谱整合技术和光谱分析策略,快速分离并鉴定了目标产物。该研究为目标菌种资源的定向筛选、菌株的发酵条件的快速优化和化合物的定向分离提供了较好的参考。

摘要：萜类化合物种类繁多,生物活性多样,在食品、药品与化妆品等行业中具有广泛的应用。萜类化合物多来源于植物,然而随着合成生物学的快速发展,相较于传统的天然植物提取与化学合成方法,利用工程微生物进行萜类化合物异源合成的方法显得更为经济与环保。萜类合成酶的催化活性及合成产物的结构特性是萜类化合物异源合成的关键。通过蛋白定向进化与理性设计可以有针对性地优化萜类合成酶的催化性能及产物专一性,但该方案需要一个特异的筛选方法来实现蛋白突变体库的高通量筛选。近年来,一系列高通量筛选方法的建立使得萜类合成酶的筛选变得更加灵敏与高效。本文对近期建立的萜类合成酶高通量筛选方法进行了综述,简要概述了各种筛选方法的基本原理与优缺点,并对高通量筛选技术在萜类合成酶改造中的应用做出了展望。

摘要：【背景】对抗生素生物合成途径的阐明有助于提高目标化合物的产量并开发具有更高活性的新化合物。基因的同框缺失是天然产物生物合成研究的常规手段,通过分析突变菌株积累的中间产物,可以帮助推导天然产物的合成途径及相关基因的功能。天然产物生物合成基因簇的大小一般在20 kb以上,对每个基因进行同框缺失耗时耗力,因此,优化链霉菌来源的基因同框缺失的方法有重要的意义。【目的】基于PCR-targeting重新设计了一套在链霉菌柯斯文库质粒上进行基因同框缺失的方法,实现链霉菌基因在大肠杆菌中快速、高效的基因同框缺失的技术体系。【方法】使用氨苄青霉素抗性基因bla作为PCR-targeting DNA片段的筛选标记,同时使用体外的Pac I酶切和酶连系统代替体内的Flp/FRT系统来介导同框缺失的构建。【结果】利用这种方法,在6 d内完成了米多霉素生物合成基因簇中14个基因的同框缺失。【结论】此方法与传统的PCR-targeting方法相比,构建同框缺失载体的效率明显提高;Pac I识别序列在链霉菌基因组上的稀有性使得此方法在构建抗生素生物合成基因簇必需基因的同框缺失载体上具有普适性。

摘要：安慰策略是指说话人为安慰听话人而实施的安慰计划,选择合适的安慰策略可以更好地消除他人的消极情绪。本文选取“儿童情绪管理与性格培养绘本”丛书中的安慰语为语料,以面子理论、礼貌原则和言语行为理论为理论基础,对实施安慰语的策略进行了分类:第一类,针对听话人A的安慰策略;第二类,针对事件B的安慰策略;第三类,针对消极情绪C及其产生的消极影响D的安慰策略。实施安慰语策略的特点包括:一是始终遵循得体准则,灵活运用礼貌原则;二是多种策略相互作用,实施鼓励和回避策略的频率较高;三是遵循儿童情绪发展的规律,实施否决策略的频率较低。

摘要：微生物天然产物一直都是新型生物药物创新的主要源泉,是目前开发临床抗菌、抗肿瘤、免疫抑制剂等药物的重要资源。随着临床耐药菌的日益增多,新型病原菌和病毒的不断出现,以及新骨架天然产物挖掘难度的增加,新型微生物药物的开发正面临着巨大挑战。作为21世纪生命医学领域催动原创突破和学科交叉融合的前沿学科,合成生物学的崛起为解决药物研发困境提供了新的思路和方法,它可以突破天然药物发现的瓶颈,设计新的生物合成途径,产生更多天然药物及类似物。本文综述了近五年来合成生物学在微生物药物研究领域的技术革新,及其在氨基糖苷类抗生素、核苷类抗生素、核糖体肽、萜类以及聚酮类化合物等5大类微生物天然药物的发掘、生物合成以及新结构创制等方面的应用。

摘要：分析了ZigBee无线通信技术和家庭网络的特点,介绍了一种利用ZigBee技术无线组网的智能家居系统,重点阐述了ZigBee的组网方式、节点之间自动控制的实现、数据的采集和传输。

摘要：为了提高超声波测距精度,分析了超声波测距的原理,针对影响超声波测距精度的主要因素——环境温度,回波时间,从软件和硬件上提出了解决方法;软件上通过修正不同温度下的传播速度消除温度对测距精度的影响;硬件上设计升压驱动发射电路、由仪表放大器组成的信号幅度补偿电路和双比较器构成的回波检测电路以改善提高超声波质量和更好地确定传播时间;0.5～5m的障碍物试验显示该系统的测距误差可限制在10 mm范围内;应用表明该系统稳定可靠,测距精度高,所以该系统具有一定实用价值.

摘要：在红外遥控设备的使用中,设备的稳定性和调节平滑性是最基本而最重要的指标。根据NEC红外协议,设计了一种基于STM32F103C8单片机的红外可调的功放系统。此系统通过STM32F103C8的输入端口捕获红外遥控器发射的脉冲信号,用其强大的定时器对遥控编码进行解码,判断出哪个功能键被按下,根据所按下的功能键驱动单片机的GPIO口输出控制信号来调节数控电位器X9313,实现功放输入电压的调节,从而平滑地调节音量的增加和减少。通过测试,功放系统可通过红外遥控器进行有效的、平滑稳定的音量调节。