摘要：目的:设计、合成Foxp3 siRNA序列,并体外干扰肝癌患者调节性T细胞(regulatory T cells,Treg),评价Foxp3 siRNA干扰后对Treg表型及抑制功能的影响以及是否能上调肝癌患者抗肿瘤免疫应答的能力。方法:设计并化学合成Foxp3 siRNA,将Foxp3 siRNA通过脂质体转染的方式体外转染Treg。通过实时定量PCR以及流式细胞术分析Foxp3 siRNA对Treg中Foxp3表达的抑制效能,并通过流式细胞术评价Foxp3 siRNA干扰后对Treg表面分子CD127、CTLA-4、GITR的表达以及对CD4+CD25-T细胞的抑制作用。通过酶联免疫斑点法(enzyme-linked im-munospot assay,Elispot)以及五聚体(pentamer)分析法评价Foxp3 siRNA干扰肝癌患者Treg后对经肿瘤特异性抗原NY-ESO-1b诱导的肿瘤特异性免疫应答的影响。结果:通过Foxp3 siRNA的转染可实现对Treg Foxp3表达的部分沉默,并且上调Treg表面CD127分子的表达,下调CTLA-4和GITR的表达。肝癌患者Treg Foxp3表达的沉默可下调Foxp3+Treg对CD4+CD25-T效应性细胞增殖抑制的能力。通过五聚体法及Elispot法检测发现,Foxp3 siRNA以及siRNA-control转染组NY-ESO-1157-165特异性的细胞毒T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)的数量分别为0.21%±0.17%和0.57%±0.39%(P<0.05),与siRNA-control进行干扰的肝癌患者组相比,Foxp3 siRNA干扰后的Treg与特异性CTL共培养后,肿瘤特异性CTL数量及分泌的干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的数量显著上调(132±55vs27±11,P<0.05)。结论:通过Foxp3 siRNA对于肝癌患者Treg中Foxp3表达的沉默,可在体外干扰肝癌患者Treg免疫抑制功能,继而增强肝癌患者经肿瘤抗原诱导的CTL抗肿瘤免疫应答。

摘要：目的克隆结核分枝杆菌Rv3803c和Rv3846基因,并在大肠埃希菌(***)中进行表达和纯化。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增出Rv3803c和Rv3846基因片段,克隆至pGEX-6P-1表达载体中,测序正确后,在*** Rosetta中诱导表达,GST标签亲和层析法纯化蛋白,考马斯亮蓝染色及Western-blot分析鉴定。结果重组质粒pGEX-Rv3803c、pGEX-Rv3846测序表明核苷酸序列与设计完全一致。其在*** Rosetta中的存在形式均为可溶部分约50%、包涵体约50%,相对分子质量约为56 000和45 000,纯化的GST-Rv3803c、GST-Rv3846样品纯度90%以上。完整的GST-Rv3803c的浓度大约为0.1mg/ml,完整的GST-Rv3846的浓度大约为0.5mg/ml。即相当于每升*** Rosetta培养物中,GST-Rv3803c产量为:0.25mg/L、GST-Rv3846产量为1.25mg/L。结论成功获得了纯化蛋白Rv3803c(MPT51)和Rv3846(SodA),为进一步研究MPT-51和SodA蛋白的辅助诊断价值、构建保护性疫苗提供了实验依据。

摘要：目的了解天津市轮状病毒(RV)腹泻发病状况,以及临床及流行病学特征。方法在天津市不同区域设立5所医院,对就诊的感染性腹泻患者按设计的调查内容做现场调查、采集粪便标本,采用ELISA方法检测RV抗原,并以RT-PCR方法做型别分析。结果 1 085例患者中207例检出RV抗原,阳性率为19.08%,其中≤5岁患者的阳性率达32.20%。基因型以G3、G1及P[8]为主,分别占31.88%、17.87%和25.12%。感染存在区域间的聚集性,秋冬季高发。散居儿童患者的阳性率达31.85%。患者发病到初诊平均为(1.63±5.03)d,39.65%在发病当天就诊。RV腹泻患者每日腹泻的次数明显多于非RV腹泻患者,且多为水样便。便常规检测RV腹泻患者的白细胞数均≤10/HPF。患者的年龄、性别、饮食等卫生习惯经Logistic逐步回归分析,变量均无统计学意义。结论天津市感染性腹泻患者19.08%为RV所致,≤5岁患者更是多达32.20%,已经成为公共卫生问题。RV感染的危险因素与非RV腹泻患者类似。

摘要：设计严谨、操作规范和结果可靠的临床研究结果是临床治疗指南和规范制定的依据,而这些指南和规范则是临床医师为患者提供治疗计划和作出医疗决策的根据。作为临床研究的主要执行者--临床研究医师(clinical research physician,CRP)是研究质量好坏的重要因素。作者参考了国内外培训临床研究医师的现状,论述了培养专业临床研究医师的必要性和可行性,认为中国的临床研究事业正处于逐渐规范、成熟的阶段,临床研究医师的培养迫切、必要;文章还对临床研究医师必备的职责及其培养机制进行了论述。

摘要：根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Tsserpin)基因序列设计1对引物,从旋毛虫肌幼虫提取总RNA,应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,进行限制性酶切后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-Tsserpin,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,经PCR、限制性酶切分析及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行了诱导表达。SDS-PAGE分析表达产物,表达产物纯化后用Western-blotting鉴定Tsserpin重组蛋白的抗原性。PCR与酶切鉴定结果显示,构建的重组表达质粒pET30a-Tsserpin与预期结果一致。测序结果表明,插入片段为1122bp,编码373个氨基酸,与GenBank中旋毛虫Tsserpin基因的相似性为99%。含有pET30a-Tsserpin重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE分析结果显示,表达产物的分子质量约为48.5ku,而且主要以包涵体形式存在。Western-blot分析结果表明Tsserpin重组蛋白可以被旋毛虫感染猪阳性血清特异性识别,提示其具有良好的抗原性,可以作为猪旋毛虫病免疫诊断的候选抗原。

摘要：基于水下管汇的应用特点,对设计的关键技术进行分析,确定了水下管汇设计的一些原则。依托项目和设计原则,设计了一种深水水下管汇,并试制了原理样机。

摘要：针对目前絮凝工艺的动力学控制指标和絮凝体形态学研究的不足,基于分形理论,应用分形维数描述絮凝体的形成和成长,进行了絮凝动力学指标的研究.利用数学分析方法,推求絮凝体的密度和强度的表达式,得出絮凝体的密度和强度是分形维数的函数,同时絮凝体的强度与水体的能耗成反比.通过量纲分析方法,得出絮凝体分形维数是能耗GT与剪切强度Fr的函数,进而确立絮凝动力学控制指标为G、GT和Fr,以期为工艺设计和运行提供了科学依据,为实际工程应用提供了合理的指导.通过形态学和动力学两方面的研究表明,高效的絮凝过程需要控制一定的G、GT和Fr的递减梯度,并保证絮凝体达到一定的分形维数Df.

摘要：目的:建立检测手足口病病原的液相芯片方法。方法:设计、合成并修饰基因特异性引物和寡核苷酸探针,将寡核苷酸探针和荧光编码微球进行偶联,制备液相芯片;将样本核酸多重PCR扩增产物与液相芯片进行杂交,并通过液相芯片检测仪读取检测结果。结果:同时检测多种肠道病毒(EV),肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CAV16)的病毒核酸最低检出量均为1pg,检测特异性高。与参照方法相比,EV、EV71、CAV16的检测灵敏度分别为:91.4%、92.9%、100.0%,检测特异度分别为100.0%、97.1%、98.2%,检测准确度分别为:100.0%、96.3%、87.5%。结论:构建的检测手足口病病原的液相芯片方法,具有高通量、灵敏度高、特异性强和检测时间短等优点,为手足口病的快速诊断奠定了基础。

摘要：现代信息技术被广泛应用于生物灾难事件的应急管理。本文在简要介绍国外相关典型研究成果基础上,阐述利用现代信息技术进行生物灾难事件应急管理的基本思想,继而分析设计了生物灾难事件模拟系统的架构,对系统关键模型,如城市地理模型、人群活动模型、人际交互模型、个体感染模型等进行了探讨,并构建了生物灾难事件模拟原型系统。本研究为构建综合性的生物灾难事件应急管理信息系统打下基础,为事件的应急防控提供计算实验平台。

摘要：为降低采煤机滚筒的截割比能耗,以某型采煤机的截割滚筒为研究对象,对合理选择截齿的截线距和切削厚度的比值进行了研究。利用UG三维CAD软件建立了3种不同截线距的截割滚筒模型,通过ANSYS/LS-DYNA对2组不同切削厚度情况下采煤机滚筒截割煤壁的过程进行了模拟,得到了镐形截齿所受截割力、特定时间内截落煤壁总体积、滚筒所受截割扭矩及截割比能耗等。通过对比这2组采煤机滚筒的截割比能耗和其他相关数据,分析了截线距和切削厚度的比值与截割效率的关系。结果表明,截线距和切削厚度的比值在2左右时,采煤机滚筒的截割比能耗最小。本研究结果对采煤机设计过程中滚筒截线距、滚筒转速和采煤机牵引速度三者之间的最佳匹配有一定的参考价值。