摘要：背景:胶原酶消化方法是胰岛细胞分离技术中关键的第1步,其成败关系到胰岛细胞移植的存活与功能。目的:针对不同质量浓度和同一质量浓度条件下不同时间点胶原酶分离纯化所获得胰岛细胞的效果进行对比,以确定理想的胶原酶分离胰岛细胞的标准化方案。设计、时间及地点:单一样本观察,细胞学体外观察,于2006-09/2007-05在解放军总医院第二附属医院全军器官移植实验室完成。材料:胰岛细胞供体为SD大鼠。将32只大鼠按随机数字表法分为4组,即胶原酶0.5g/L,1.0g/L,1.5g/L及2.0g/L组,每组8只。方法:每组前4只动物,采用0.5,1.0,1.5,2.0g/L4种质量浓度的胶原酶对胰腺进行分离,消化过程中每隔10min为1个时间点,双硫腙染色观察分离情况,分析结果并确定最适合获取胰岛量最多的时间点。随后每组另外4只动物按照确定时间点停止消化,应用间断密度梯度离心法纯化胰岛,双硫腙和丫啶橙-碘丙啶荧光染色分析移植物形态和存活率,确定分离所需胶原酶的最佳浓度。主要观察指标:调整胶原酶的质量浓度与消化时间,荧光显微镜下胰岛细胞计数,评估胶原酶最佳质量浓度及消化时间。结果:分析后确定各组胰岛细胞最佳获取时间,胶原酶0.5g/L组50min,胶原酶1.0g/L组40min,胶原酶1.5g/L及2.0g/L组均为30min。胶原酶0.5g/L组分离并纯化后胰岛细胞收获量显著低于其他3组(P0.05)。胶原酶2.0g/L组胰岛细胞平均存活率显著低于其他3组(P0.05)。结论:在胰腺灌注良好情况下,胶原酶消化条件控制在质量浓度1.5g/L,时间30min进行水浴振荡可获得很好的分离效果。

摘要：背景:2003年Banff移植病理会议正式将C4d在肾小管周围毛细血管中的特异性沉积列入体液性排斥反应的Banff诊断标准,体视学测定是一种重要的分析手段。目的:检测C4d在难治性排斥反应移植肾组织中的表达情况,对C4d阳性细胞进行体视学定量测定,分析其体视学指标与移植肾存活时间的关系。设计、时间及地点:回顾性病例分析,2006-12/2007-06在解放军总医院第二附属医院器官移植完成。对象:选择难治性排斥反应导致移植肾切除患者40例,所有移植肾标本石蜡切片均由解放军总医院第二附属医院病理科提供,移植肾存活时间大于5年者17例,小于5年者23例。方法:应用C4d多克隆抗体对移植肾组织石蜡切片行免疫组织化学染色,检测C4d在切除移植肾中的表达情况,运用图像分析系统在显微镜下测量C4d阳性细胞的体视学参数。主要观察指标:患者性别、年龄、冷缺血时间、热缺血时间、免疫抑制方案、移植后高血压以及是否为2次移植,C4d细胞群在移植肾标本中的分布情况,体视学分析结果。结果:40例切除移植肾中C4d阳性17例(42.5%),移植肾存活时间小于5年者的C4d细胞阳性率明显大于存活时间大于5年者(70.6%,29.4%)。移植肾组织中C4d阳性沉积与移植供受者的年龄、性别、免疫抑制方案、冷、热缺血时间以及是否为2次移植无关。存活时间大于5年的移植肾组织中C4d阳性细胞体视学参数核体密度、核表面积密度均小于存活时间小于5年者(F=12.7415,9.7337,P<0.01)。结论:C4d阳性沉积预示着移植肾功能预后较差,移植肾组织中C4d阳性细胞的核体密度、核表面积密度是影响其存活时间的重要指标。

摘要：背景:肾移植是治疗肾功能衰竭最有效的手段,如何提高移植物及受者的长期生存率和生存质量仍然是肾移植的重要课题。B细胞群的浸润与移植肾失功间的关系尚处于争论阶段。目的:分析CD20+B细胞浸润与移植肾存活时间的相关性,探讨浸润B细胞在移植肾排斥反应病变中的作用。设计、时间及地点:回顾性病例分析,于1989-01/2006-12在解放军总医院第二附属医院器官移植研究室完成。对象:纳入40例难治性排斥反应导致移植肾失功并行移植肾切除的患者。方法:切除的移植肾组织经石蜡包埋、切片后行免疫组化染色,检测肾组织中CD20的表达情况,CD20+B细胞群在肾间质呈弥漫性浸润者视为阳性。计算移植肾的存活时间。主要观察指标:统计分析CD20表达对移植肾存活时间的影响及其与移植肾排斥反应导致失功的相关性。同时统计分析性别、年龄、冷缺血时间、热缺血时间、免疫抑制方案、术后高血压以及是否为二次移植对CD20表达的影响。结果:①40例切除的移植肾组织免疫组化染色结果中,CD20+19例(48%)。②失功的移植肾中CD20的表达与其性别、年龄、冷缺血时间、热缺血时间、免疫抑制方案、术后高血压以及是否为二次移植不相关。③40例移植肾的存活时间最长为110个月,最短为2周,平均为35个月。CD20+组移植肾存活时间明显短于CD20-组[(34.9±5.4),(45.8±5.9)个月(P﹤0.05)]。结论:CD20+的B细胞群浸润可使移植肾的存活时间减少,导致移植肾预后较差。