摘要：目的通过脂质体转染siRNA方法沉默人肺鳞癌细胞NCI-H226中UbcH10基因,观察基因沉默后细胞增殖活性的变化及其对细胞周期的影响。方法设计3条针对UbcH10基因CDS区不同位点的siRNA序列并构建shRNA重组质粒,脂质体法转染重组质粒至NCI-H226细胞。转染后48 h,RT-PCR和蛋白质免疫印迹法检测细胞内UbcH10 mRNA及蛋白含量。使用有效siRNA序列转染细胞,转染后24、48 h CCK-8检测细胞活性。使用有效siRNA序列转染细胞,转染后48 h收集细胞,流式细胞术检测细胞周期。结果成功构建shRNA重组质粒并转染NCI-H226细胞。转染siRNA 48 h后,3组NCI-H226细胞中UbcH10基因的mRNA及蛋白含量均明显下降;其中2号siRNA序列(pshRNA2)的沉默效果最好,UbcH10基因剩余表达量为对照组的14%。使用pshRNA2转染NCI-H226细胞24、48 h,细胞增殖活性降低,与基因未干预组比较差异有统计学意义(P<0.05)。使用pshRNA2转染NCI-H226细胞48 h,细胞明显阻滞于G2期,与基因未干预组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 UbcH10基因沉默可显著抑制NCI-H226细胞增殖活性,并使肺癌细胞阻滞于细胞G2期。

摘要：目的 研究通过测量腹壁张力（abdominal wall tension,AWT）无创监测腹内压（intra-abdominal pressure,IAP）在重症监护室（intensive care unit,ICU）中应用的可行性分析.方法 本研究为前瞻性设计,纳入2011年4月至2013年3月入住上海市第十人民医院急诊ICU留置导尿管的患者为研究对象.排除标准：使用肌松药;3个月内腹部手术史、急性腹膜炎、腹肌肿块;急性膀胱损伤、急性膀胱炎症、神经源性膀胱;盆腔血肿、盆腔骨折.分别测量和记录患者AWT （N/mm）和膀胱压（urinary bladder pressure,UBP）.使用SPSS 13.0软件利用线性回归方法分析AWT和UBP的相关性.同时采用配对t检验,观察呼吸、体位对AWT的影响;并运用单因素方差分析方法,观察性别和体质量指数（body mass index,BMI）对AWT基础值（IAP＜ 12 mm Hg患者的AWT）的影响.结果 研究共纳入51例患者,患者AWT和UBP之间差异具有统计学意义（R =0.986,P＜0.01）,线性回归方程为Y=-1.369 ＋9.57X （P＜0.01）.平卧位吸气末和呼气末AWT值分别为（1.65＆#177;0.52） N/mm和（1.45＆#177;0.54） N/mm;30＆#176;仰卧位吸气末和呼气末分别为（1.25＆#177;0.30） N/mm和（1.07＆#177;0.35） N/mm.不同呼吸时相和体位AWT之间差异具有统计学意义（P＜0.01）.男性和女性AWT基础值分别为（1.09＆#177;0.29） N/mm和（1.01 ＆#177;0.34） N/***＜ 18.5,18.5≤BMI≤25以及BMI＞25患者AWT基础值分别为（0.91＆#177;0.30） N/mm,（1.02＆#177;0.35） N/mm以及（1.16＆#177;0.28） N/mm,但性别和BMI对AWT基础值差异无统计学意义（P值分别为0.457和0.313）.结论 AWT与差异具有统计学意义,且呼吸及体位对AWT有显著影响,但性别及BMI对AWT基础值并无显著影响,AWT可以作为监测重症患者IAP的简便、快速、准确的重要方法.

摘要：目的自行设计并研制辅助股骨干骨折闭合复位及髓内钉进针的器械，探讨其I临床应用效果。方法采用前瞻性随机对照研究方法，将2011年12月至2013年1月收治且符合病例纳入标准的44例股骨干骨折患者随机分为2组：试验组22例，男16例，女6例；平均年龄为（33．1±8．O）岁；术中使用自行设计并研制的股骨干骨折闭合复位器及髓内钉进针瞄准器。对照组22例，男13例，女9例；平均年龄为（34．0±9．1）岁；术中不使用复位器及瞄准器。所有患者均行闭合复位顺行交锁髓内钉内固定术。比较两组患者的手术时间、术中出血量、进针点穿针次数、导针进入骨折远端的穿针次数、需要小切口辅助复位的患者例数及骨折愈合时间等。结果44例患者术后获8-20个月（平均l1．8个月）随访。除对照组1例发生骨不连行再次手术植骨外，其余患者无感染等其他并发症发生。试验组患者的手术时间[（71．7±5．5）min]短于对照组[（81．0±4．7）rain]，进针点穿针次数（1次）、导针进入骨折远端的穿针次数（1次）、需要小切口辅助复位的患者例数（0）均少于对照组（3次、4次、8例），两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。两组患者的术中出血量及骨折愈合时间比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论股骨干骨折闭合复位器及髓内钉进针瞄准器操作方便，对常规闭合复位困难的股骨干骨折能很好地辅助复位，且能有效辅助髓内钉进针，临床应用价值较高。

摘要：目的:评价计算机辅助设计在单侧完全性唇腭裂患儿术前矫治中的应用价值。方法:对10例单侧完全性唇腭裂新生儿取模,通过三维激光扫描仪对模型进行扫描并实现三维重建,三维诊断设计软件模拟整个错位上颌骨各骨段的矫正过程,并输出用于矫治器加工的数字模型。快速激光成型技术恢复矫治过程的模型并制作一系列矫治器,临床应用于单侧完全性唇腭裂患儿的术前矫正治疗。结果:经过3～4个月的术前矫正,错位牙槽骨排列成较为规则的弧形;唇部裂隙宽度减小,鼻翼塌陷畸形得到改善,鼻小柱偏斜得到纠正。结论:计算机辅助设计的单侧完全性唇腭裂患儿术前矫治能实现精确、量化的矫治目标,同时减少复诊次数,是一种高效、简洁的术前矫治方法。

摘要：目的:在社区开展娱乐康复预防老人跌倒的活动中,观察平衡操和传球游戏对社区老人注意力和平衡能力提高的效果。方法:A、B、C、D四社区128位老人参与研究,A社区进行功能第1次评定后进行娱乐康复锻炼2月,B社区功能第1次评定后不进行锻炼,2个月后A和B社区进行功能第2次评定。随后B社区锻炼,2个月后再次进行功能第3次评定。C、D社区和A、B社区研究设计相同。功能评定包括注意力评定和平衡能力评定。娱乐康复锻炼方法为坐和站位平衡操、传球活动,均每周5次,每次约20min。结果:共87位老人完成锻炼和功能评定,锻炼后A、C、D社区老人听跟踪有显著提高;B、C社区老人注意广度有显著提高:A、B、D社区老人注意持久性有显著提高。4组社区老人左右摆幅值均明显减少;A、B社区老人右前后摆幅减少,B、C、D社区老人左内外摆幅值减少;D社区老人右内外摆幅值减少,A、B、D社区老人轨迹长值明显减少。结论:娱乐康复中的平衡操、传球活动能提高社区老人的视、听追踪、注意持久性、注意广度能力和站位平衡能力。

摘要：目的探讨烟酰胺核苷酸转氢酶（NNT）基因突变对于C57BL/6小鼠糖代谢稳态的影响。方法将无NNT突变的野生型C57BL/6N与携带NNT突变C57BL/6J小鼠交配，F1代杂合小鼠继续交配，得到NNT纯合野生型，NNT纯合突变型，及NNT突变杂合子3种不同NNT基因型的F2代。小鼠4周龄起分别给予高脂饮食或对照饮食4周，每周监测小鼠体重。在小鼠8周时称重，并通过经腹糖耐量试验（IPGTT）检测小鼠糖代谢水平，通过经腹胰岛素耐量试验（ITT）检测小鼠胰岛素敏感性。结果正常饮食或高脂饮食喂养4周后，不同F2代小鼠基因型三者体重并无差异，但是NNT突变小鼠糖耐量显著受损，并且在高脂饮食诱导下NNT突变小鼠胰岛素敏感性相对NNT野生型显著下降。而NNT杂合子小鼠糖代谢及胰岛素敏感性异常不显著。结论NNT基因突变对C57BL/6小鼠的糖代谢表型具有重要影响，杂合突变和纯合突变表型迥异。C57BL/6J和C57BL/6N小鼠不同遗传背景对高脂饮食有不同反应，这是在进行实验设计时需要充分考虑的因素，可能与不同NNT基因型有关。在研究代谢的实验中尽量保持受试小鼠遗传背景的一致，将对实验结果的解释具有重要作用。

摘要：目的构建含趋化因子受体5(CCR5)-短发夹状RNA(shRNA)的重组慢病毒,观察其对小鼠外周血CD34+造血干细胞(CD34+细胞)CCR5 mRNA表达的影响。方法使用Ambion RNAi靶序列及参考相关文献设计并确定RNA干扰(RNAi)靶序列。将靶序列转入克隆载体pBShH1扩增,再转入含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的FG12慢病毒载体,酶切、测序鉴定。包装CCR5-shRNA慢病毒并测定滴度,转染小鼠外周血CD34+细胞,检测转染效率。将CCR5-shRNA慢病毒转染的CD34+细胞回输小鼠体内,1周后采用Real-Time PCR检测细胞CCR5 mRNA的表达。结果相关鉴定结果显示:目的片段插入了FG12载体,并带入pBSHH1上的H1 RNA polymeraseⅢ启动子,CCR5-shRNA慢病毒载体构建完成;病毒感染滴度为5×107 TU/mL;CCR5-shRNA慢病毒对小鼠外周血CD34+细胞的转染效率为97.9%;Real-Time PCR检测结果显示:转染CCR5-shRNA慢病毒的CD34+细胞回输后,小鼠外周血CD34+细胞CCR5 mRNA表达显著下降。结论成功制备高滴度的CCR5-shRNA重组慢病毒,该病毒在体内能有效下调小鼠外周血CD34+细胞CCR5 mRNA的表达,为治疗器官移植后排斥反应的研究奠定了基础。

摘要：目的　探讨颅外先天性动静脉畸形的临床分类方法及相应的治疗选择。方法　通过对 6年内 83个病例的临床表现、影像诊断、介入治疗、外科手术治疗结果的系统随访和分析 ,探讨该疾病的临床分期 ,解剖区域分布规律、各分期的治疗选择、不同介入材料对复发率的影响、进行未痊愈病例原因分析。结果　根据临床表现可将先天性动静脉畸形分为静止期、扩张期和失代偿期 ,前者以单纯介入治疗为主 ,后者以手术治疗为主 ,介入治疗的方法与材料选择对复发率等有重要影响 ,未栓塞病例的手术治疗要求依据DSA和CTA完整切除和具有丰富血供的组织移植重建。结论　对先天性动静脉畸形的临床分期和合理的治疗方案设计将使此类疑难病例的治疗大大易化。

摘要：目的 建立一种新的、简便的HBV表型耐药分析方法,通过置换完整的反转录酶（RT）区研究药物敏感性.方法 首先全基因扩增未经核苷（酸）类似物治疗患者的HBV DNA,构建含HBV野毒株全基因组表达质粒PHY536207（B基因型）及PHY97（C基因型）,继而在RT区上、下游设计限制酶切位点,改造后的质粒分别命名为mPHY536207及mPHY97.以CHB患者血清中分离到的拉米夫定（LAM）耐药变异株和阿德福韦酯（ADV）耐药变异株为骨架,分别构建LAM耐药株质粒PHY634和ADV耐药株质粒PHY6923,再用耐药株的RT区段取代mPHY536207中的RT区构建重组质粒,命名为RT634（LAM耐药）及RT6923（ADV耐药）.分别用RT区置换前、后的质粒转染Huh7细胞,用ELISA法检测分泌到细胞上清液中的HBsAg水平,用实时PCR和Southern印迹法检测细胞内HBVDNA水平.结果 成功构建B型和C型野毒株表达质粒PHY536207和PHY97,经转染Huh7细胞证实有HBV复制能力,6孔细胞培养板中每孔细胞所抽提的HBV DNA均＞1＆#215;107拷贝/mL;在RT区上游设计的Pst Ⅰ酶切位点不影响HBV的表型（HBsAg的表达及HBV DNA的复制）.在PHY634及RT634转染实验中,HBV DNA水平却并未随LAM浓度的升高而明显下降,50％抑制浓度（IC50）＞100 μmol/L,mPHY536207仅为0.18 μmol/L;PHY6923及RT6923转染实验中,HBV DNA对外加的ADV不敏感,IC50＞100 μmol/L,明显高于mPHY536207（1.2 μmol/L）.结论 本研究建立了一种新的HBV表型耐药分析方法,可通过RT区置换来研究RT区变异对药物敏感性的影响.

摘要：目的设计应用节段性兔股薄肌肌皮瓣构建再造阴茎、重建勃起功能的动物模型。方法依据肌亚部原则，近似二等分纵向完全劈开兔股薄肌，以前部肌束作为功能单位和皮瓣血供来源，植入硅胶假体作为支撑，构建阴茎再造的动物模型。应用多道生理信号采集处理系统刺激再造阴茎活动，并同步检测复合肌肉动作电位。结果通过电刺激兔再造阴茎根部的神经，可使前部肌束收缩，引起阴茎形态的相应改变，当肌束发生强直收缩时，再造阴茎上翘幅度最大，并可维持翘起状态数秒，较满意地模拟了阴茎的勃起动作。结论应用节段性兔股薄肌肌皮瓣构建的再造阴茎动物模型，较满意地重建了阴茎勃起功能，达到了兼顾改善阴茎外观与保留肌肉收缩功能的要求，具有较好的临床应用前景。