摘要：目的探讨散发性原发性局灶节段性肾小球硬化（FSGS）患者中ACTN4和SYNPO基因启动子区突变的致病作用。方法盐析法提取82例FSGS患者外周血基因组DNA，经引物设计及PCR扩增后测序。突变位点经转录因子结合模拟软件筛选，pGL3-Basic构建表达载体与pRL—SV40质粒瞬时共转染PCI2细胞，双荧光素酶法检测基因表达。检测患者父母头发DNA。免疫荧光检测患者肾组织α-actinin-4和synaptopodin蛋白表达。结果3例ACTN4基因突变分别为1—34C〉T、1～590delA和（1—1044delT）＋（1—797T〉C）＋（1—769A〉G）。2例SYNPO基因突变分别为1—24G〉A和1—851C〉T。1例患者分别接受父母1—1044delT和1—797T〉C变异。除1—1044delT组外，变异组荧光素酶表达强度比正常组有不同程度下降，与突变患者肾组织α-actinin-4和synaptopodin免疫荧光强度下降基本相符。结论ACTN4和SYNPO基因启动子区顺式作用元件区的变异影响基因的转录，可能在散发性FSGS发病中起作用。

摘要：目的:通过对Gordon综合征(PHA2)患者的WNK4和WNK1基因外显子扩增测序,研究我国PHA2患者WNK基因的突变特点。方法:通过查阅住院病史,收集不明原因高血压伴高血钾而肾功能正常的患者,进行临床和实验室检查,确诊PHA2。采集患病者及患病/非患病亲属的外周血,抽提DNA,设计17对引物扩增WNK4的19个外显子,27对引物扩增WNK1的28个外显子,纯化后送测序,测序结果进行序列比对。结果:发现PHA2患者4例,其中2例表现为家族遗传性,另2例为散发。先证者及所有患病家系成员共8人,年龄6～79岁,均表现为不明原因的高血压、高血钾,肾功能正常。8例中的5例伴有肾小管酸中毒,6例伴有高氯血症。DNA扩增后测序比对发现,其中1例散发患者为WNK4基因的杂合错义突变,位于17号外显子,造成氨基酸序列的改变,赖氨酸突变为谷氨酸(K1169E)。对其2个非患病女儿以及200个正常对照的WNK4基因检测均未发现该突变。其它2个患病家系及1个散发患者未发现WNK4基因突变,所有患者和健康者均未发现WNK1外显子突变。结论:PHA2是一种少见的单基因遗传疾病,漏误诊率很高。已报道的WNK4致病位点均位于螺旋-螺旋结构域附近。我们发现的K1169E为HGMD未收录的新突变,也位于螺旋-螺旋结构域,该位点氨基酸在不同物种高度保守,而且该位点氨基酸的变化伴有电荷的改变,可能导致蛋白质构象的改变。

摘要：目的探讨子宫内膜癌组织中钙激活性中电导钾离子通道(IKCal)的表达变化及其在子宫内膜癌细胞增殖中的作用。方法应用蛋白印迹(western blot)法、RT-PCR 技术来研究13份正常子宫内膜及25份子宫内膜癌组织中 IKCal mRNA 和蛋白的表达;利用 IKCal 的阻断剂——克霉唑(clotrimazole),使用小分子干扰 RNA(siRNA)的 RNA 干扰技术和氚胸腺嘧啶核苷掺入试验等观察子宫内膜癌 HEC-1A 细胞增殖的变化。结果子宫内膜癌组织中 IKCal mRNA 的阳性表达率及表达水平(分别为84%、0.89±0.52)明显高于正常子宫内膜组织(分别为8%、0.14±0.12,P 均0.05),但与病理分级有关(P<0.05)。克霉唑呈剂量和时间依赖性方式阻滞 HEC-1A 细胞的增殖。与转染阴性对照 siRNA 的细胞比较,转染 IKCal siRNA 的 HEC-1A细胞 IKCal 蛋白的表达水平降低,为转染阴性对照 siRNA 的细胞的(48.27±9.07)%。与转染阴性对照 siRNA 的 HEC-1A 细胞比较,转染 IKCal siRNA 能减少细胞的增殖(P<0.05)。结论 IKCal 的异常表达与子宫内膜癌的发展密切相关,降低其表达可减少子宫内膜癌细胞的增殖。

摘要：血小板反应蛋白1(TSP1)是转化生长因子-β1(TGF-β1)体内重要的活化因子,而后者又是致肾小管间质纤维化的关键因素。观察了针对TSP1的小双链干扰RNA(siRNA-TSP1),抑制由血管紧张素II(AngII)诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1过度活化。将根据人TSP1基因序列设计的特异siRNA-TSP1转染人肾小管上皮细胞系(HK-2),利用Western印迹、RT-PCR、流式细胞仪及ELISA等方法,检测了TSP1、TGF-β1及其信号蛋白Smad2与p-Smad2、纤维连接蛋白(FN)和纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)的基因转录水平、蛋白质表达或蛋白质活性。结果显示,siRNA-TSP1能有效转染HK-2细胞,并以剂量依赖方式显著抑制TSP1的基因转录与合成;其对TGF-β1的合成影响较小,但能明显抑制TGF-β1的活化。此外siRNA-TSP1可阻抑TGF-β1依赖的Smad2磷酸化,减少细胞外基质FN以及PAI-1的合成。研究结果提示,由于TSP1是TGF-β1重要的内源性活化因子,故针对TSP1的RNA干扰能在体外有效抑制TSP1表达并相应调抑了TGF-β1的活化。

摘要：背景:骨关节炎的病理改变涉及多种关节构成组织,其中骨骼肌的地位日渐引起研究者关注。目的:通过观察骨关节炎C57小鼠骨骼肌收缩蛋白α-肌动蛋白与肌球蛋白重链基因表达状况,探讨柔肝中药软骨制剂利胶囊对收缩蛋白基因表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2004-09/2007-01在上海市中医药研究院骨伤科研究所完成。材料:选取7周龄清洁级C57小鼠18只,雌雄各半,体质量(20±5)g。软骨利胶囊(柔肝中药制剂),由上海中医药大学中药标准化中心提供。方法:18只C57小鼠按随机数字表随机分为正常组、模型组、软骨利组,每组6只。除正常组外,对小鼠进行运动负荷训练造模。软骨利组给予0.2mL软骨利溶液(约含2mg软骨利)灌胃5周,正常对照组和模型组给予0.2mL生理盐水灌胃5周。主要观察指标:应用反转录-聚合酶链反应检测股四头肌肌α-actin、肌球蛋白重链4种亚型(Ⅰ,Ⅱa,Ⅱd/x,Ⅱb)mRNA表达水平。结果:与空白组比较,模型组α-actin mRNA显著低表达(P<0.05),肌球蛋白重链Ⅱa,肌球蛋白重链Ⅱd/x mRNA低表达(P<0.05)。与模型组比较,软骨利干预组α-actin与多种肌球蛋白重链亚型mRNA表达水平上调(P<0.05)。结论:柔肝中药制剂软骨利能够促进骨骼肌收缩蛋白基因表达,提示其可改善骨关节炎动物骨骼肌肌力。

摘要：目的:探讨特发性局灶节段性肾小球硬化(idiopathic FSGS)中SYNPO基因变异和多态(SNP)特点。方法:以82例特发性FSGS和70例健康人为研究对象。盐析法提取外周血基因组DNA、引物设计、PCR扩增后测序。基因数据库匹配筛选,结合患者肾组织Synaptopodin和患者父母头发DNA检测验证其致病意义。SNP位点H-W平衡检验后行基因频率、基因型和临床表型关联分析。结果:1例5′UTR变异1-24G>A,其父母未发现相同变异,肾组织Synaptopodin较正常和非变异NSFSGS组下降(321.33±18.01比514.00±31.21,PT(Pro146Leu),肾组织Synaptopodin较正常和非变异非NSFSGS组下降(385.67±15.95比635.50±23.95,PC(Thr635Pro),其父母未发现相同变异,肾组织Synaptopodin较正常和非变异NSFSGS组明显下降(160.67±27.68比514.00±31.21,PT(Thr496Thr)和5例同义变异1578C>T(Pro526Pro)。未发现疾病易感SNP位点。结论:散发性FSGS患者中可能存在SYNPO基因致病变异位点,其可能在散发性FSGS发病中起作用。

摘要：目的探讨5-羟色胺转运体基因启动子区域(5-HTTLPR)基因多态性与双相障碍的关联,分析其与双相障碍患者情感气质类型的相关性。方法采用病例—对照研究设计,共纳入305例双相障碍患者和272名正常对照。用情感气质评定量表(TEMPS-A)评估情感气质类型,运用χ2检验、T检验或非参数检验、方差分析等统计学方法评估5-HTTLPR基因多态与双相障碍及其情感气质类型的相关性。结果在女性中,5-HTTLPR L/S多态与双相障碍相关(基因型χ2=6.769,P=0.034;等位基因χ2=6.028,P=0.014);5-HTTLPR L/S多态S等位基因与双相障碍患者的焦虑气质相关(t=8.248,P=0.005);5-HTTLPRrs25531 A/G多态LA等位基因与双相障碍患者的情感旺盛气质相关(Z=-2.205,P=0.027)。结论 5-HTTLPR基因多态性与女性双相障碍的患病情况相关,且能在一定程度上影响患者的某些情感气质。

摘要：目的:构建ATP4B-SV40T-IRES-GFP重组质粒并进行鉴定.方法:根据小鼠ATP4B启动子序列设计引物,获得的小鼠ATP4B基因启动子序列,并加入限制性内切酶酶切位点.将其装入载体IRES-GFP,获得重组载体ATP4B-IRES-GFP并进行酶切鉴定.之后将SV40T基因克隆入ATP4B-IRES-GFP载体,并用限制性内切酶PstI和AseⅠ进行验证.结果:将小鼠ATP4B启动子序列插入IRES-GFP载体,经过酶切验证获得正确的ATP4B-IRES-GFP质粒;将SV40T片段插入ATP4B-IRES-GFP,质粒测序及酶切结果验证获得正确的ATP4B-SV40T-IRES-GFP重组质粒.显微注射入小鼠受精卵可获得阳性小鼠.结论:成功构建ATP4B-SV40T-IRES-GFP重组质粒,可用于下一步构建原发性胃癌转基因小鼠.

摘要：目的深入了解上海市农村常住居民自我药疗的影响因素,为合理自我药疗、降低自我药疗风险干预提供依据。方法采用现象学研究方法,对11名上海市农村常住居民自我药疗现状进行半结构式访谈。结果提取了"自我药疗抉择的影响因素"和"药物选择及使用的影响因素"两大主题。前者包括医疗保险和家庭经济状况、对医务工作者的信任程度、就医程序及耗时情况、家庭备药情况、居民对自我疾病严重程度的认识;后者包括对相同疾病的处理经验、亲友建议以及媒体广告导向等。结论上海市农村常住居民自我药疗不尽合理,受多种因素影响。需政府、卫生机构共同努力,以使居民合理安全自我药疗。

摘要：查阅近几年国内外文献,对中医药抗幽门螺杆菌的实验研究相关文献进行整理并分析。检索万方医学数据库、中国知网(CNKI)和西文生物医学期刊数据库的38篇文献,将中药抗Heticobacter pylori的体外实验、体内实验的研究进展做一总结,并分析其机制。以往的研究从有效成分的筛选、抑菌浓度实验、抗菌机制研究和中医药对幽门螺杆菌感染动物模型的疗效研究,逐步扩展到细胞分子水平的观察。在今后的实验中还应紧密结合中医理论指导,合理选择中药和复方,规范动物模型制作和辨证分型,并严谨实验设计,才能更好的说明问题,以期为中医药防治幽门螺杆菌相关性胃病的更深入研究及临床应用奠定基础。