摘要：[目的]分析2014—2015年全国有限空间作业中毒与窒息事故发生原因,提出预防同类事故发生的建议。[方法]从国家安全生产监督管理局事故案例库收集2014—2015年有限空间作业较大以上中毒与窒息事故案例47起(含较大事故、重大事故和特别重大事故),查阅事故案例报告,同时通过文献及新闻检索完成对案例的补充。完成典型事故的企业调查,分析事故发生的行业、作业地点及岗位,事故类型及安全管理落实情况,从作业管理流程、危害辨识、危害控制、事故应急救援等方面深入剖析事故发生的直接原因及所存在的问题。[结果]55.3%的事故发生在市政设施管理、化工制造、建筑和电热力供应行业。污水井(污水处理站)、反应池(罐)、基坑和涵洞等工作地点的清理清淤和检查维修等作业过程容易发生事故。事故主要源于硫化氢(53.2%)和一氧化碳(21.3%)等气体中毒,以及甲烷(8.5%)和氮气(6.4%)等富集导致的缺氧窒息。事故单位的有限空间作业管理要求落实情况极差,安全培训、通风换气、气体检测和个体防护用品佩戴率分别为12.8%、8.5%、6.4%和6.4%,作业审批制度执行率为零。其中83.0%事故(39起)存在盲目施救情况,导致事故伤亡人数从初始49人,最后增加到188人,危害扩大3.8倍。[结论]2014—2015年全国有限空间作业较大以上中毒与窒息事故主要源于硫化氢和一氧化碳等气体中毒,盲目施救会导致伤亡扩大。为预防同类事故的发生,企业应严格落实有限空间作业安全管理要求,针对重点行业和重点人群开展教育培训以及应急救援培训,杜绝盲目施救。同时,政府部门应加强监督执法与科普宣传。

摘要：[目的]本研究旨在构建一种对17α-炔雌醇(17α-ethynylestradiol,EE2)敏感的荧光转基因斑马鱼模型,提供一种可直观地监测水中环境雌激素(environmental estrogens,EEs)污染程度的生物检测方法。[方法]构建Tg(ere-vtg:egfp)质粒,显微注射到1~2个细胞期的斑马鱼胚胎中,经10 ng/L EE2暴露发出绿色荧光,建立能稳定遗传的Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼系。将转基因斑马鱼纯合子幼鱼和胚胎暴露于不同浓度的EE2进行敏感性鉴定,并将转基因斑马鱼纯合子幼鱼暴露于多种EEs、雌激素结构类似物中进行特异性鉴定。[结果]经显微注射Tg(ere-vtg:egfp)质粒并进行基因筛选,成功构建Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼。EE2诱导Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)与浓度、时间有关。当EE2质量浓度大于0.1 ng/L(131 hpf)时,可见转基因斑马鱼胚胎表达明显的GFP。当暴露于不同结构的雌激素类化合物时,Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼幼鱼呈现GFP表达,而对于非雌激素类化合物在各浓度下均没有GFP表达。[结论]采用Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼可直观地动态监测环境中EEs污染情况。

摘要：斑马鱼被广泛应用于环境化学物的监测与评价,并得到经济合作发展组织(OECD)、国际标准化组织(ISO)等权威机构的认可。本文简述了斑马鱼应用于环境毒理学研究的诸多优势,综述了斑马鱼作为仅次于小鼠应用广泛的模式生物,被用于环境中许多化学物,包括发育毒性与致畸、致癌毒性、胚胎毒性、心血管毒性、神经和行为毒性、特别是生殖毒性在内的一系列环境毒理学研究中,对环境化学物的危害识别和风险评估具有广泛的应用。由于斑马鱼胚胎和幼鱼体型小,适用于高内涵分析,可结合转基因技术、基因组学和蛋白组学技术,将其应用于环境毒理学机制研究中。

摘要：目的探索并优化适合于斑马鱼成鱼内脏组织的病理学检查技术。方法将斑马鱼整条固定于Dietrich's固定液后,分段切开,取包含内脏组织的胸腹段,剥除斑马鱼鱼皮,梯度乙醇脱水时间优选为30 min、二甲苯透明、石蜡包埋、沿斑马鱼体轴纵向连续切片、HE染色后用温水冲洗切片进行颜色反蓝,正置显微镜下观察效果。结果经过反复的条件摸索和优化,光学显微镜下观察心脏、肝脏、脾脏、胆囊、肾脏、胰腺、消化道、精巢和卵巢等组织切片和染色的效果,可见斑马鱼组织均切片完整,无折叠或断裂,各脏器的解剖学与组织细胞学结构清晰,易于辨认,细胞核与细胞质染色分明。结论优化后的斑马鱼成鱼内脏组织病理学方法效果较为理想,可获得高质量的内脏组织学标本。

摘要：目的构建稳定表达荧光素酶的人乳腺癌MCF-7细胞株。方法采用脂质体转染法将荧光素酶基因导入MCF-7细胞,经潮霉素B筛选建立稳定表达荧光素酶的MCF-7-Luc细胞株;将不同数量MCF-7-Luc细胞分别接种于黑色96孔板(细胞数量59~30000)和裸鼠皮下(细胞数量2.44×10^(3)~5×10^(6)),IVIS LuminaⅢ成像系统体外培养细胞以及裸鼠体内荧光素酶表达效率。结果筛选得到稳定表达荧光素酶的MCF-7-Luc细胞;IVIS LuminaⅢ成像系统检测结果表明,不论是体外培养的细胞或是裸鼠体内,生物发光强度与接种的细胞数量之间均存在明显的线性关系(体外y=129.32x-26409,R^(2)=0.9922,P<0.05;体内y=106.82x+1E+07,R^(2)=0.9404,P<0.05)。结论成功构建了稳定表达荧光素酶的MCF-7-Luc细胞,为研究乳腺癌的发生发展、肿瘤微环境以及抗乳腺癌药物的筛选提供必要条件。