摘要：为解决铜绿假单胞菌(***)对多类抗生素耐药难题,寻找***外排泵抑制剂是一条有效途径。本研究以二肽类外排泵抑制剂PAβN为先导物,通过改变天然氨基酸侧链结构,设计合成15个全新的鸟氨酸拟肽类衍生物,评价了其协同单环β-内酰胺类抗生素氨曲南对抗***活性。其中,化合物12b不仅可增强β-内酰胺类抗生素,包括氨曲南、头孢他啶、美罗培南的抗菌活性,还可显著增强大环内酯类抗生素克拉霉素的抗菌作用,显示出广谱的协同增敏作用。此外,化合物12b还具有良好的安全性。初步机制显示,12b直接靶向外排转运体MexB发挥作用。研究结果为发展一类新型的对抗MDR ***的外排泵抑制剂提供了新先导化合物。

摘要：生物分子凝聚形成生物体内的多种无膜细胞器,其独特的物理化学性质使其具有多样的生物学功能,包括感知外界环境的变化、调节蛋白在细胞内的浓度、调控信号转导途径以及选择性富集特定蛋白质和RNA等。同时,生物分子凝聚相的错误形成与调控会导致多种人类疾病,如神经退行性疾病、癌症和病毒性疾病等。无序蛋白质在生物分子凝聚相的形成和调控中发挥了重要作用。本文通过总结分析无序蛋白在生物分子凝聚相形成中的作用以及化学小分子对生物分子凝聚相的调控,探讨了通过靶向无序蛋白进行配体设计来获得调控生物分子凝聚相化学探针及药物的可能性,并展望了揭示无序蛋白及化学分子调控生物凝聚相机制应重点关注的问题。

摘要：目的 构建人泛素连接酶Cbl-b基因短发卡RNA（shRNA）重组慢病毒载体，探讨其对人黑素瘤A375细胞生物学行为的影响。方法 设计并合成3条沉默Cbl-b 基因的特异性shRNA及1条阴性对照shRNA，构建慢病毒载体。将A375细胞分成5组，即分别用3条特异性shRNA转染的CBLB-shRNA-1组、CBLB-shRNA-2组、CBLB-shRNA-3组，阴性对照组（阴性对照shRNA转染），空白对照组（转染空载体）。应用实时荧光定量PCR和Western印迹检测转染后72 h各组A375细胞沉默效率；CCK8法检测转染后24、48、72及96 h细胞增殖能力；流式细胞仪检测转染后72 h细胞凋亡情况、细胞周期，Transwell法检测转染后72 h细胞侵袭能力。结果 成功构建3条Cbl-b shRNA慢病毒载体，Western印迹示CBLB-shRNA-3蛋白沉默效率最高。CCK8检测表明，CBLB-shRNA-3组A375细胞增殖能力在转染后72 h和96 h较阴性对照组、空白对照组明显降低（均P 〈 0.01）。流式细胞仪检测示，CBLB-shRNA-3组凋亡率［（22.73 ± 6.58）%］明显高于阴性对照组［（6.08 ± 1.35）%］和空白对照组［（6.34 ± 1.07）%，均P 〈 0.01］。CBLB-shRNA-3组G1期细胞比例明显高于阴性对照组和空白对照组（P 〈 0.01），而S期细胞比例明显低于阴性对照组和空白对照组（P 〈 0.01）。Transwell检测示，阴性对照组、空白对照组和CBLB-shRNA-3组转染后72 h时穿膜细胞数分别为76.60 ± 1.82、73.20 ± 3.83、19.60 ± 1.14，差异有统计学意义（F = 794.50，P 〈 0.01）。结论 成功构建能高效沉默Cbl-b蛋白的CBLB-shRNA-3重组shRNA慢病毒载体，其可促进A375细胞凋亡，抑制A375细胞增殖、细胞周期进程和侵袭能力。

摘要：目的 原核表达EV-D68结构蛋白VP1，并对其抗原性进行评价。方法 以肠道病毒68型P1基因为模板，设计引物扩增出目的片段VP1，将其连接至大肠杆菌表达载体pGEX-5X-1上。将重组表达载体pGEX-5X-1-VP1转化大肠杆菌表达菌株Rosetta （DE3）pLysS，对该工程菌进行诱导表达。菌体裂解后用SDS-PAGE电泳、Western-blot鉴定融合蛋白；对表达菌体进行超声破碎和亲和层析纯化；使用酶联免疫吸附试验方法评估目的蛋白与不同种属EV-D68阳性血清的结合能力及亲和力。结果 成功构建融合表达载体pGEX-5X-1-VP1，经过双酶切及测序鉴定均正确；成功表达和纯化出EV-D68 （Enterovirus D68, EV-D68） VP1融合蛋白，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，得到与预期蛋白相对分子质量为61 000大小一致的目的条带；纯化蛋白与不同种属的阳性血清可以特异性结合，与兔血清、恒河猴血清、小鼠血清的亲和力常数分别为1.6×106、3.9×105、3.1×106。结论 成功表达了EV-D68 VP1融合蛋白，为研究EV-D68 VP1蛋白的结构、功能及中和抗体筛选奠定基础。

摘要：目的:探讨顺铂(CDDP)处理肺癌细胞后NSUN 2 pre-mRNA的剪接变化。方法:在NSUN 2基因的pre-mRNA有选择性剪接的外显子两侧的外显子上设计检测引物,选取16例非小细胞肺癌患者的肿瘤组织及其癌旁正常组织,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测组织NSUN 2各mRNA剪接异构体的表达;取人肺癌细胞系A549细胞和H1299细胞分别用不同浓度CDDP处理,A549细胞分为0、8、16、24、32、40、48及56μmol/L组,H1299细胞分为0、12、24、36、48、60、72及84μmol/L组,采用RT-PCR检测各组细胞NSUN 2各mRNA剪接异构体的表达;RT-PCR产物胶回收后进行TA克隆测序并与NCBI网站数据库中NSUN 2的序列进行比对分析。结果:人肺癌细胞系A549细胞和H1299细胞及肺癌临床样本中NSUN 2基因可编码蛋白的mRNA剪接异构体表达量最高,占主导地位;随着CDDP浓度增加,NSUN 2可编码蛋白的异构体在H1299细胞的高浓度组中的表达下降(P<0.01),非编码蛋白的异构体在A549细胞和H1299细胞的高浓度组中表达均上升(P<0.05);检测到2种未见报道的mRNA剪接异构体。结论:CDDP处理后肺癌细胞中NSUN 2 pre-mRNA剪接会发生变化,NSUN 2基因的表达存在pre-mRNA选择性剪接调控。

摘要：目的通过设计合成胆酸二聚体化合物及评价其体外抑制肝细胞凋亡活性,发现新型治疗慢性肝病的候选化合物。方法以熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸和奥贝胆酸为起始原料,经亲电取代、脱水缩合、氢化等反应制备目标化合物。通过测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、7的活性水平评价目标化合物体外抑制肝细胞凋亡的活性。结果合成胆酸二聚体化合物24个,体外活性结果表明部分目标化合物具有较好的抑制肝细胞凋亡活性,12个化合物(1a、1e、1h、2a、2c、2e、2f、2g、3a、3c、3d、5a)在20μmol/L浓度下抑制肝细胞凋亡的活性优于阳性对照物牛磺熊去氧胆酸(40.94%)。化合物1a、1e、2a和5a的抑制率分别为75.60%、88.56%、83.25%和105.24%,是阳性对照的2倍。结论熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸二聚体具有抑制肝细胞凋亡的活性,奥贝胆酸二聚体无抑制肝细胞凋亡的活性;连接胆酸骨架的连接链长度对活性有明显的影响,其中具有较短连接链(N,N’-二甲基乙二胺、四甲基乙二胺、乙二醇二甲醚)的化合物(1a、1e、2a)的活性优于具有较长连接链(N,N’-二甲基-1,8-辛二胺、2,5,8,11,14,17-六氧十八烷)的化合物(1g、3e)的活性。

摘要：目的建立基于磁珠捕获和连接的环介导恒温扩增(CLIP-LAMP)方法体系,以适用于大体积样品处理,为病原体检测提供一种新的技术方法。方法在NCBI数据库搜索免疫缺陷病毒(HIV)的一段保守序列,使用实验室特有软件根据该保守序列设计相应的捕获探针和检测探针。磁珠表面通过亲和作用偶联寡核苷酸来抓取捕获探针;由于特异性捕获探针的存在使得核酸提取步骤被省略,靶标DNA或RNA直接特异地结合捕获探针;检测探针经过连接步骤后作为最终模板参与荧光定量环介导恒温扩增反应。将此方法用于HIV体外转录(IVT)合成的RNA检测,并且评估方法的灵敏度和特异性。结果构建的方法体系成功应用于HIV的IVT检测;现阶段可以检测到32 CPs/μL。该方法有可能处理>1 mL的大体积样本,并且可在2 h内完成检测。结论建立了基于磁珠的CLIP-LAMP技术,为快速、简便地进行大体积病原体检测提供了新的方法和思路。

摘要：目的:观察不同浓度顺铂处理后肺癌细胞中剪接因子(SRSF1)mRNA异构体的变化,并寻找其中发挥主要抗凋亡作用的异构体。方法:使用不同浓度的顺铂处理肺癌细胞系A549和H1299后提取总RNA,设计SRSF1基因不同的引物(F1∶R1、F1∶F2及F2∶R1)进行RT-PCR以检测其mRNA剪接异构体的变化。结果:在A549和H1299细胞中检测到了5种异构体(Isoform-a、Isoform-b、Isoform-d、Isoform-e、Isoform-f),且主要表现为随着顺铂浓度的升高,非编码蛋白的mRNA异构体的比例明显上升,主要是Isoform-d的上升;而编码蛋白的mRNA异构体所占比例明显下降,主要是Isoform-a下降;同时SRSF1的总mRNA水平也是逐渐降低的。结论:在顺铂处理下,肺癌A549和H1299细胞中的SRSF1的转录水平被下调,其mRNA选择性剪接向下调编码蛋白的mRNA异构体的方向转变,造成编码蛋白的mRNA异构体降低的主要原因为Isoform-a,该异构体可能是SRSF1基因发挥抗细胞凋亡作用的主要异构体。

摘要：目的:探讨腹部无辅助切口经阴道取标本的腹腔镜中高位直肠癌根治术的安全性、可行性及近期疗效。方法:回顾分析2015年3月至2018年4月行腹腔镜中高位直肠癌根治术患者的临床资料,采用1:2配对设计,分别获得行腹部无辅助切口经阴道取标本的腹腔镜中高位直肠癌根治术18例及常规腹腔镜辅助中高位直肠癌根治术(对照组) 36例,对比其手术、病理、术后恢复情况、术后盆底功能及围手术期并发症等。结果:两组手术时间、术中出血量、肿瘤大小、远近切缘距离、淋巴结清扫数量、排气时间等差异无统计学意义(P>0.05),但经阴道取标本组下床活动时间、住院时间及术后第1天、第3天、第5天VAS评分低于对照组(P0.05),术后并发症发生率分别为5.6%与8.3%,差异亦无统计学意义(P=0.713)。结论:腹部无辅助切口经阴道取出标本的腹腔镜中高位直肠癌根治术切实可行,安全可靠,不影响患者的盆底功能,且术后疼痛更轻,康复更快,近期疗效满意。