摘要：背景:目前肝纤维化尚没有公认的特效疗法,近年来骨髓间质干细胞应用于肝纤维化的治疗已取得一定效果,但具体机制仍不明确。目的:体外探讨人骨髓间质干细胞对肝星状细胞的调控作用。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-06/12在中山大学干细胞与组织工程研究中心、中山大学第三附属医院中心实验室完成。材料:骨髓来源于青年健康志愿者髂骨,人肝星状细胞购自中山大学实验动物中心,人正常肝细胞系L-O2购自中山大学实验动物中心。方法:将分离提纯的人骨髓间质干细胞与肝星状细胞在6孔Transwell板上建立上下共培养体系,接种密度均为2×104cells/well。另设L-O2代替人骨髓间质干细胞作为阴性对照,单纯培养的肝星状细胞为空白对照,培养72h。主要观察指标:肝星状细胞形态及免疫细胞化学染色结果,流式细胞仪检测肝星状细胞凋亡情况,Westernblot法检测肝星状细胞活化标志α-肌动蛋白的表达。结果:倒置显微镜下活化的肝星状细胞呈扁平状,胞浆内缺乏脂肪滴,α-肌动蛋白位于肝星状细胞胞质内,呈高张力纤维状分布。与L-02+肝星状细胞组、单纯肝星状细胞组比较,骨髓间质干细胞+肝星状细胞共培养组的肝星状细胞凋亡率明显升高(P<0.05),α-肌动蛋白表达水平明显下调。结论:人骨髓间质干细胞可抑制肝星状细胞活化,促进其凋亡,这可能是骨髓间质干细胞抗肝纤维化的作用机制。

摘要：背景:供体细胞的示踪始终是干细胞移植研究中面临的一个重要问题,以往用于干细胞移植的示踪技术主要有核素、5-溴脱氧尿嘧啶核苷、绿色荧光蛋白、Hoechst和荧光原位杂交等。目的:探讨CM-DiI作为骨髓干细胞移植示踪剂的可行性和示踪效果。设计、时间及地点:细胞学体内观察,于2004-10/2007-12在中山大学附属第一医院神经科实验室完成。材料:四五周龄雄性DL小鼠80只为供体,2月龄遗传性肝功能障碍模型TX小鼠40只为受体,均由澳大利亚Dean教授馈赠。CM-DiI为Molecular Probes公司产品。方法:全骨髓法体外分离培养供体鼠骨髓干细胞,加入CM-DiI行荧光标记,无菌条件下经尾静脉注入已放疗的受体鼠体内,注射悬液量为0.2mL/只,细胞数1.2×107个/只,于移植后不同时间取肝脏标本制备切片。主要观察指标:荧光倒置显微镜下观察CM-DiI标记细胞情况,流式细胞仪测定荧光标记率。供体细胞移植后在受体鼠肝脏的示踪。PCR半定量分析供体细胞在受体鼠肝脏中的比例。结果:荧光显微镜下CM-DiI标记的骨髓干细胞呈红色荧光,CM-DiI标记率为99.9%。在受体鼠肝脏组织内,CM-DiI的荧光在移植后第1天即可看到,渐增多,第4周达高峰,后渐下降。移植后第7天可检测到Sry基因,随后其变化趋势同CM-DiI荧光。结论:CM-DiI是良好的骨髓干细胞移植示踪剂,第4周时示踪效果最为显著。

摘要：目的明确肝病模型鼠——TX小鼠的生理特点，为以其为模型的研究提供选择适合月龄动物的理论依据和自然生理情况下的对照值。方法选取7～12个月TX小鼠和同系DL小鼠，每个月龄雌雄各3只，测定肝、脑、肾和血清中的金属铜含量，测定血清铜蓝蛋白及AST等指标，HE染色观察组织病理学改变，电镜下观察超微结构。应用SPSS13．0软件进行统计分析，组间比较采用两组完全随机化设计资料均数的t检验。结果10、11个月龄时AST含量，TX小鼠的分别为（218．3±21．5）U／L和（197．5±38．3）U／L，DL小鼠分别为（171．5±24．1）U／L和（165．0±25．8）U／L，两组小鼠AST含量比较，t值分别为3．335和1．689，P值均〈0．05，差异有统计学意义。其他月龄小鼠AST含量，两组差异无统计学意义。肝、脑、肾的脏器每千克组织铜含量，TX小鼠平均值分别为（750．0±85．5）mg、（39．7±2．2）mg和（29．8±5．0）mg，DL小鼠平均值分别为（11．6±1．5）mg、（16．8±0．9）mg和（14．2±1．0）mg，TX小鼠肝、脑、肾脏器的铜含量均高于DL小鼠，t值分别为21．16，23．60，7．47，P值均〈0．05，差异有统计学意义。结论TX小鼠可作为一个理想的肝损害动物模型，针对实验目的不同应选择相应月龄的TX小鼠；TX小鼠存在自我恢复的趋势，以其为模型的研究应设立生理情况对照组，以便更好地比较出治疗处理的效果。