摘要：鉴于丙型肝炎病毒(HCV)危害着人类健康,本研究拟用反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)建立一种简易检测方法。收集并用FQ-PCR(金标准)检测临床样本。根据HCV保守5'非编码区设计4条通用引物,然后用Taq DNA聚合酶优化传统RT-LAMP体系,通过酶切和交叉实验以评价RT-LAMP的特异性,通过和反转录PCR(RT-PCR)同时检测倍比稀释的模板以评价RT-LAMP的灵敏度。同时判断钙黄绿素和羟基萘芬蓝(HNB)染色法是否与电泳法的结果相同。结果显示,Taq DNA聚合酶可提高扩增效率,RT-LAMP的特异性好,酶切片段与预期相一致(216bp)且只有HCV被扩增,灵敏度为10IU/tube,比RT-PCR高10倍。另外,两种染料和电泳法的检测结果相同。RT-LAMP和RT-PCR检测75例临床样本的一致性差(P0.05,Kappa=0.762)。综上所述,RT-LAMP简易、特异、灵敏,适用于基层医疗机构。

摘要：为实现患者体内金属异物的准确定位及术前术后手术器械的快速排查,设计了基于磁通门梯度测量方式的便携式装置.提出基于剩磁效应的铁磁性金属定位方法和基于电涡流效应的非铁磁性金属定位模式,用以解决传统磁通门无法感应非铁磁性金属的问题.采用改进的跑道型磁芯结构,选择钴基非晶合金Metglas2705M作为磁芯材料,以数字信号处理器为核心进行谐波提取和互相关滤波处理,提高了磁通门性能.通过建立信息数据库使该装置具有一定深度分析能力.15例异物患者临床实验证明,该技术便捷有效,有良好的临床应用前景.

摘要：目的采用Ⅰ型胶原凝胶悬浮包埋兔脂肪干细胞并复合PLGA-β-TCP支架修复自体桡骨缺损。方法使用Ⅰ型胶原凝胶悬浮兔脂肪干细胞并与PLGA-β-TCP复合构建脂肪干细胞一Ⅰ型胶原凝胶／PLGA-β-TCP复合体（ASCs—COL／PLGA-β-TCP）（A组），同时设立单纯细胞／PLGA-β-TCP材料复合体（ASCs／PLGA-β-TCP）（B组）、单纯Ⅰ型胶原凝胶／PLGA-β-TCP复合体（COIMPLGA-β-TCP）（C组）、单纯PLGA-β-TCP支架材料（D组）以及空白缺损（E组）作为对照，体外成骨诱导培养2周后植入桡骨1．5cm缺损部位。30只兔（60侧）采用两因素随机区组设计每只兔两侧骨缺损植入组别。分别于术后8、16、24周处死兔，取材，进行相关分析。结果术后8周，大体观察、放射学、组织学检测示A组桡骨断端连续性基本恢复。术后16周，A组骨断端连续性完全恢复，髓腔未通。术后24周，A组髓腔再通，改建塑形趋于完成，材料基本降解。自术后16～24周，A组残存材料比例低于其他3组（P〈0．05，n=4）；与A组比较，在整个观察周期内，B、C、D组均无明显成骨现象，E组保持骨缺损状态（P〈0．05，n=4）。结论通过应用Ⅰ型胶原凝胶悬浮包埋脂肪于细胞进而与PLGA-β-TCP多孔支架材料复合构建新型仿生骨组织工程复合体，可修复兔桡骨1．5cm缺损。

摘要：目的构建基于脂肪于细胞、Ⅰ型胶原凝胶以及聚乳酸聚乙醇酸-β-磷酸三钙支架（PLGA-β-TCP）的骨组织工程复合体并对其异位成骨进行研究。方法设计构建脂肪干细胞-Ⅰ型胶原凝胶／PLGA—β—TCP复合体（A组），同时设立单纯细胞／PLGA—β—TCP材料复合体（B组）、单纯Ⅰ型胶原凝胶／PLGA-β-TCP复合体（C组）以及单纯PLGA-β-TCP支架材料（D组）作为对照。扫描电镜、相差显微镜观察细胞材料复合情况并对脂肪干细胞增殖以及成骨分化进行分析。体外成骨诱导培养2周后移植于自体股部肌袋，8周后取出，依次行放射学、组织学定性及半定量分析。结果（1）体外成骨诱导2周，A组细胞增殖率慢于B组（P〈0．05，n=4），但其细胞总数远高于后者（P〈0．01，n=4）。A组碱性磷酸酶（ALPase）活性、细胞外基质矿化程度均显著高于B组（P〈0．01，n=4）。A组细胞悬浮于Ⅰ型胶原凝胶并均匀分布于材料孔隙中而B组细胞仅见黏附于材料表面。（2）移植8周，X线片示A组高密度钙化影形成，B、C、D组未见有阳性结果。A组材料孔隙中均匀充满新生骨组织，可观察到骨小梁样结构。B组仅在少数孔隙中有类骨组织形成，同时伴有结缔组织长入。A组新生骨面积百分比显著高于B组（P〈0．01，n=4）。结论通过应用Ⅰ型胶原凝胶来实现脂肪干细胞与PLGA-β-TCP多孔支架材料的均匀复合，能够有效促进脂肪干细胞在材料孔隙中的成骨分化及均质骨组织形成。

摘要：背景:孕中期羊水干细胞的分离培养及生物学性状研究已取得了一定进展,但孕足月羊水是否也可作为干细胞来源目前报道不多。目的:探讨从孕足月羊水中分离培养羊水干细胞的可行性。设计、时间及地点:观察性实验,于2007-10/2008-08在解放军总医院妇产科及解放军军事医学科学院干细胞及再生医学研究室完成。材料:孕足月羊水来自在解放军总医院行剖宫产、排除胎儿畸形及母体全身性疾病的孕妇,告知后同意留取羊水标本10例;鼠龄2个月雄性BALB/C裸鼠,体质量15～20g,用于致瘤实验的观察。方法:从10例孕晚期(孕38～40周)羊水中分离扩增羊水干细胞进行传代培养,取第5,10代对数生长期的细胞在酶标仪450nm波长处检测吸光度(A)值,绘制羊水干细胞生长曲线;待细胞70%汇合时换为脂肪诱导培养基用于检测体外分化能力;分别于第4代,第11代行染色体核型分析;取第4～6代羊水干细胞1×107个注射到BALB/C裸鼠皮下,观察8周。主要观察指标:①羊水干细胞的形态学特点及生长曲线。②流式细胞仪及免疫荧光法检测羊水干细胞表面标志的表达。③体外向脂肪细胞分化的能力。④染色体核型及致瘤实验结果。结果:10例孕晚期羊水中有4例分离到梭形可持续传代的细胞群,细胞增殖旺盛;羊水干细胞原代生长较慢,传代后生长迅速,第5代,第10代细胞的生长曲线形态相似;流式细胞仪检测证实孕足月羊水干细胞表达CD44,CD29,CD105等间质来源标志,免疫荧光检测显示表达胚胎来源标志SSEA-4及oct-4;换为脂肪诱导培养基后6d,细胞内出现透明、浑圆的小液滴,表明向脂肪样细胞分化;所有标本的染色体核型均为46XX或46XY,第11代染色体核型保持正常;羊水干细胞注射到裸鼠体内后无肿瘤形成。结论:孕晚期羊水也可分离培养到干细胞,可以作为干细胞的新来源。

摘要：背景:羊水干细胞是一种新的干细胞来源,具有不同于成体间充质干细胞的生物特性。目前有关羊水干细胞的研究多数以孕中期羊水为基础,对孕足月羊水所知甚少。目的:探讨孕足月羊水干细胞向神经元分化的可能性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-10/2008-08在解放军总医院妇产科及解放军军事医学科学院干细胞及再生医学研究室完成。材料:孕足月羊水来自在解放军总医院行剖宫产、排除胎儿畸形的孕38～40周健康孕妇。方法:贴壁法从羊水中体外分离培养羊水干细胞,胰酶-EDTA消化传代。取第四五代细胞,用含1mmol/Lβ-巯基乙醇、体积分数为20%胎牛血清、10μg/L碱性成纤维生长因子的低糖培养基预诱导24h,去除培养液,洗涤后加入含5mmol/Lβ-巯基乙醇的无血清低糖培养基向神经元方向诱导4.0～5.0h;对照组不加任何诱导剂。主要观察指标:孕足月羊水干细胞的形态及免疫表型,诱导后向神经元样细胞的分化。结果:培养的羊水干细胞呈梭形,漩涡状排列,间质干细胞来源标志CD105,CD29及I类组织相容性抗原HLA-ABC均呈阳性表达,胚胎干细胞标志性基因SSEA-4亦呈阳性表达,不表达造血干细胞标志。诱导后,细胞形态发生明显改变,胞浆回缩,出现类似轴突的细长的两极或多极突起,免疫荧光染色神经元特异性烯醇化酶呈阳性表达。结论:在血清剥夺与β-巯基乙醇联合诱导条件下,孕足月羊水干细胞具有向神经元样细胞分化的潜力。

摘要：设计了一套便携式终端,集GPS/BD2双模卫星定位、生命信息监测和无线传输功能为一体,由士兵随身携带.该终端以ARM作为主控芯片,采集GPS/BD2定位数据和生命体征数据,并进行数据融合,通过军用CDMA网络,以短消息方式发送至后台处理中心实时显示和处理,还可以根据后台处理中心的指令进行状态调整.设计的终端对于抢险救灾、野外搜救等都具有重要的实用意义.

摘要：根据犬瘟热病毒(CDV)O nderstepoort株的核苷酸序列,设计合成引物,通过RT-PCR,从CDV O nderstepoort株RNA中扩增出2 197 bp的CDV全长融合蛋白(F)基因。将其与pGEM-T easy载体连接,通过软件分析其序列中的疏水区后,以pGEM-T/F为模板,PCR扩增出约254 bp和1 017 bp的F蛋白疏水区外编码序列。以2个扩增产物为模板,以OE-PCR(overlap ex tens ion-PCR)扩增出约1 271 bp的缺失疏水区的F基因(dF),测序结果表明,dF的序列除在疏水区以4个甘氨酸序列替代外,其余部分与F基因的同源性为99.2%。这表明,OE-PCR扩增法已成功地使CDV F基因疏水区缺失。

摘要：根据GenBank中发表的西尼罗病毒(WNV)E domainⅢ基因序列设计1对引物,用PCR方法扩增domainⅢ基因片段,回收目的基因片段定向克隆入果蝇表达载体pMT/B/V5,构建重组表达载体pMT-DⅢ。测序验证正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoBlast共转染果蝇S2细胞,通过Blasticidin进行加压筛选,获得了抗性细胞S2-DⅢ。提取S2-DⅢ细胞的基因组DNA,用PCR方法检测目的基因在果蝇S2细胞中的整合与表达。用硫酸铜溶液诱导表达,收集无血清的细胞表达上清,样品浓缩后进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果表明,研究成功构建了重组表达载体pMT-DⅢ,转染细胞经12mg/L的Blasticidin筛选及鉴定后获得了稳定表达WNV E do-mainⅢ蛋白的果蝇S2细胞株。

摘要：基于实时荧光定量PCR技术建立了一种有效地检测牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)核酸的方法。对BVDV基因组进行同源比对,选取5′UTR区作为扩增目的区,经软件分析后设计特异扩增引物,扩增片段长度为203 bp。选用SYBR染料作为扩增时信号指示剂,经扩增曲线分析表明,建立的方法可有效地检测BVDV。检测体系可检测到102copies/μL的样品拷贝数。故本研究建立的BVDV实时定量检测体系可用于易感动物、牛源血液生物制品及其他可能感染或污染BVDV样品的检测。