摘要：目的 通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)与核酸试纸条相结合的方法,实现鹿茸真伪的可视化检测。方法 采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate, SDS)碱变性法提取正品及伪品鹿茸样品基因组DNA,通过查找细胞色素C氧化酶亚基I(COI)特异性位点,应用Primer 3.0软件设计鹿茸特异引物,摸索PCR最佳反应体系及条件,建立PCR-核酸试纸条及琼脂糖凝胶电泳鉴定鹿茸真伪的最优条件。同时,通过克隆测序,验证鹿茸真伪鉴定的准确性。结果 本实验中正品鹿茸在PCR-核酸试纸条上均出现两条带,阴性对照及伪品出现一条带,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合,且试纸条检测的灵敏度可达1 ng·μL^(-1)。对9个市售鹿茸样品检测,正品鹿茸5个,合格率为45%。结论 自主构建的PCR-核酸试纸条检测方法简单、快速、特异性较好,可在较短时间内实现鹿茸真伪的可视化检测,检测结果稳定,为中药材鉴定提供又一新的方法。

摘要：目的建立一种应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)鉴别梅花鹿鞭与马鹿鞭的方法。方法根据梅花鹿与马鹿的细胞色素b基因序列的差异,设计并选取DNA限制性内切酶MseI来区分梅花鹿鞭和马鹿鞭。采用改良SDS法提取样本基因组DNA,经PCR扩增后进行RFLP分析,并优化PCR-RFLP反应体系及反应条件,用优化的PCR-RFLP体系对市售鹿鞭样本进行鉴定。结果经PCR-RFLP分析,MseI可切割梅花鹿与马鹿Cyt b片段,前者被切成2个片段,后者被切成3个片段,从而将两者进行鉴别。结论本实验建立的PCR-RFLP方法可准确鉴别梅花鹿鞭与马鹿鞭。

摘要：目的研究肉类线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的提取方法,对8种生肉中貂源性成分进行检测,建立生肉中貂源性成分PCR检测方法.方法应用改良SDS碱变性法和盐析法提取肉类mtDNA,设计貂肉细胞色素b(cytochromeb,cytb)特异性引物,应用PCR对8种生肉中貂源性成分进行鉴别.结果两种方法提取肉类mtDNA的浓度和纯度均能保证PCR要求,改良SDS碱变性法提取的貂DNA样品纯度和产率较高;貂引物可以从8种生肉中鉴别出貂源性成分;经过多次重复试验证明了貂肉引物的特异性.结论该方法快速简便,为肉制品质量监控提供了实验基础.