摘要：为提高纵隔淋巴结良恶性分类的准确率及效率,本研究利用残差网络(residual network,ResNet)结合迁移学习方法,设计了一种纵膈淋巴结良恶性自动分类算法。实验结果显示,该方法的分类准确率、灵敏度、特异度可达75.1%、78.6%、84.4%,相比传统方法,分别提高了6%、9.9%、15.4%。本研究设计的多纵膈淋巴结自动分类算法相较于传统方法性能有显著提高,可作为临床辅助诊断的重要工具。

摘要：背景:细胞凋亡是脑缺氧缺血神经细胞死亡的一种方式,体外试验表明神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)缺乏可诱导神经细胞凋亡。目的:探讨新生儿缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemicbraindamageHIBD)与细胞凋亡之间的关系,研究NGF对HIBD的保护作用,为用NGF治疗新生儿HIBD提供理论依据。设计:完全随机设计,对照实验研究。地点与材料:7dSD大鼠40只来源于南京医科大学实验动物中心,体质量约14～18g,雌雄不拘,饲养于屏障环境的SPF级实验动物。干预:40只大鼠制成HIBD动物模型,随机分成两组:HIBD模型对照组20只,NGF治疗组在大鼠缺氧缺血后即刻腹腔注射NGF。主要观察指标:观察NGF对HIBD模型的新生大鼠体质量增长情况、死亡率、左右脑质量影响,并用原位缺口末梢标记(insitunickendlabeling,TUNEL)法检测NGF对缺氧缺血后脑细胞凋亡的影响。结果:HIBD模型NGF治疗组体质量增长明显高于对照组(P<0.01);治疗组实验过程中死亡率明显低于对照组;HIBD模型NGF治疗组与对照组健侧(右侧)脑质量相近,但治疗组患侧(左侧)脑质量犤(0.57±0.02)g犦明显重与对照组犤(0.42±0.1)g,P<0.01犦;治疗组左右脑质量无显著差异,而对照组左右脑质量差异有显著性意义(P<0.01);TUNEL染色所见阳性凋亡细胞,其凋亡特征为胞体缩小、核固缩。

摘要：目的靶向人DNMT1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)构建RNA干扰载体,研究其对乳腺癌细胞周期、增殖及凋亡的影响。方法靶向DNMT1基因设计三条短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的寡核苷酸片段,构建重组体pGCsi-DNMT1,转染至乳腺癌细胞株MCF-7,定量PCR法检测DNMT1mRNA表达水平;流式细胞技术分析细胞周期的变化;MTT法检测细胞生长情况;Annexin V/PI双染法观察细胞凋亡情况;定量PCR法分析沉默DNMT1基因后对RASSF1A、p16、p21、p27及ERβ基因表达的影响。结果在构建的靶向DNMT1的shRNA重组质粒pGCsi-DNMT1中,成功筛选到pGCsi-T3能显著下调DNMT1的表达。实时定量PCR检测结果证实重组质粒pGCsi-DNMT1对乳腺癌MCF-7细胞中DNMT1基因的转录有明显的抑制作用。MCF-7细胞转染后,pGCsi-DNMT1可明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖;大量细胞发生凋亡;细胞周期分析可见S期明显减少,而G1/G0期细胞显著增加;定量PCR检测到乳腺癌细胞中RASSF1A、p16、p21及ERβ基因mRNA表达水平明显升高,而p27基因表达水平未见明显变化。结论重组质粒pGCsi-DNMT1能特异有效地抑制MCF-7细胞内DNMT1的表达、抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,并可通过抑制DNMT1的活性来解除相关基因启动子区的高度甲基化状态,从而促进肿瘤相关基因的表达,提示DNMT1可作为乳腺癌基因治疗的新靶标。

摘要：目的:探讨交叉设计多中心临床试验中事件数资料的分析。方法:采用多水平Poisson回归模型,以重复测量作为第一水平,试验阶段作为第二水平,受试者作为第三水平,建立多水平Poisson回归模型。结果:多水平Poisson模型分析交叉设计数据,不但可以解决层次结构的问题,使用也较重复测量资料的方差分析更为灵活。结论:在交叉设计临床试验中,对于事件数资料,可以采用多水平Poisson回归模型。

摘要：目的研究沉默血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)基因对于亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)分泌细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响。方法设计合成针对TSP-1基因4个靶点的小发夹RNA(small hair RNA,shRNA),并构建相应的表达质粒,筛选沉默效率最佳的TSP-1shRNA(shTSP-1)后,将shTSP-1转染体外培养的大鼠GMC,再给予sublytic C5b-9刺激。以Westernblot检查TSP-1、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ)的表达情况。另用ELISA法测定培养上清中总转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和活化TGF-β1的含量。结果核酸序列分析证明,4种TSP-1shRNA重组质粒均构建成功。Western blot实验证实,构建的shTSP-1-3(Thbs1-3)具有最佳的沉默效率。将shTSP-1-3转染大鼠GMC后,在沉默TSP-1基因表达的同时,能明显抑制由sublytic C5b-9诱导的TGF-β1活化及细胞外基质(FN和collagenⅣ)的合成。结论 TSP-1基因表达在sublytic C5b-9刺激大鼠GMC诱导TGF-β1活化及ECM分泌的过程中,发挥了重要的促进作用。

摘要：目的比较病例-同胞对照设计三种统计方法的检验效能。方法应用Monte-Carlo模拟方法,使用Slink软件产生的模拟家系资料,比较同胞-传递不平衡检验(s-TDT)、同胞组不平衡检验(SDT)和同胞对关联检验法(SAT)三种统计方法的检验效能。结果(1)SDT方法的I型误差最接近检验水准α=0.05;(2)在三种遗传模式中,s-TDT方法的效能最高,SAT方法的效能最低。结论病例-同胞对照设计使用患者的同胞作为对照,避免了人群分层现象,可以用来评价遗传因素与疾病之间的关联。

摘要：目的:构建大鼠野生型肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)基因及其特异性短发卡状小干涉RNA(shRNA)真核表达质粒,并观察其在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中过表达和沉默TRAF6基因的情况。方法:用DNA重组技术将针对大鼠TRAF6基因的CDS区序列(加HA标签)和针对其不同位点所设计的3种shRNA序列分别克隆到pcDNA3.1及pGenesil-1/GFP真核表达质粒中。在酶切鉴定及序列测定正确后,用NeonTM电转仪,将上述质粒分别转染入培养的大鼠GMC中,然后用Western blot检查HA-TRAF6融合蛋白的表达情况,同时筛选最有效的TRAF6shRNA。结果:限制性酶切及核酸序列分析确证,上述TRAF6基因过表达和shRNA表达质粒均构建成功。Western blot显示,构建的pcDNA3.1-HA-TRAF6质粒能在大鼠GMC中表达,且TRAF6 shRNA-1具有最佳的沉默效率。结论:本实验成功构建了大鼠野生型TRAF6真核表达质粒及其特异性的shRNA表达载体,这为今后进一步研究TRAF6基因的生物学功能提供了实验基础。

摘要：以乙酰乙酸乙酯和苯甲醛为原料,经5步反应得到14个2-取代肉桂酰胺基-4-甲基噻唑-5-羧酸化合物,其结构经1H-NMR,13C-NMR和MS确证。经初步体外黄嘌呤氧化酶抑制活性评价,化合物5l表现出对黄嘌呤氧化酶有一定的抑制作用,抑制率为64.91%。

摘要：目的评价MIIGX3(minimally-invasive injectable graft X3)对动力髋螺钉(DHS)固定骨质疏松性股骨粗隆间骨折的强化作用。方法采用配对设计,将10对股骨标本随机分为骨折模型抗扭和抗压2组。在2组制成EvansⅣ型的不稳定粗隆间骨折模型的一侧直接置入DHS内固定为对照组,另一侧注入MIIGX3后再置入DHS内固定为强化组。并分别进行扭转加载试验及轴向压缩试验,比较强化组与对照组的生物力学性能。结果表明强化组在抗扭转和抗压方面均比对照组更具有优势,经统计显示有显著性差异(P<0.05)。结论MIIGX3能够加强DHS对骨质疏松性股骨粗隆间骨折的固定作用。

摘要：目的:将人疱疹病毒8型(HHV-8)K12基因在大肠杆菌中进行融合表达。方法:设计一对PCR引物,在引物的5'端分别引入EcoRI和XhoI酶切位点,用此引物从质粒pCR-K12中扩增出HHV-8的K12基因,PCR产物经双酶切后按正确阅读框连接到原核表达载体pGEX-6p-1上相应酶切位点,并转化BL21感受态细胞。结果:重组菌经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后,菌体SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)显示有一个大小为33ku的融合表达蛋白产生。结论:初步表明K12基因在大肠杆菌中获得正确表达。