摘要：目的探讨神经纤毛蛋白1(Neuropilin 1,NRP1)基因小干扰RNA(siRNA)质粒对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用。方法设计靶向人NRP1基因的siRNA序列,合成一对互补的寡核苷酸,退火后克隆至质粒pGenesil-1.1上,构建重组质粒siRNA-NRP1;将人胃癌细胞SGC7901注入裸鼠右臀部皮下,构建移植瘤模型,成瘤后将重组质粒siRNA-NRP1注入瘤内,观察裸鼠临床表现,并测定裸鼠移植瘤的体积及重量;病理切片观察肿瘤组织及血管生长情况;免疫组化方法观察裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度。结果酶切分析及测序鉴定证实目的寡核苷酸片段已克隆至质粒pGenesil-1.1中;siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤的体积及重量均小于对照组(P<0.01);病理切片显示siRNA-NRP1组肿瘤细胞坏死较对照组明显;免疫组化显示siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度均低于对照组(P<0.01)。结论通过siRNA-NRP1抑制裸鼠胃癌移植瘤中NRP1的表达,可影响裸鼠移植瘤中血管的生成,最终抑制肿瘤的生长。

摘要：背景:研究证实,参附注射液对各种休克、心力衰竭、心肌缺血以及室上性/室性心律失常均有改善治疗作用,对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有良好的保护作用。目的:观察参附注射液对急性缺血再灌注损伤大鼠心肌凋亡相关基因Bcl-2,Bax和c-Fos蛋白表达的影响。设计:完全随机分组设计,对照实验。单位:重庆医科大学附属第二医院麻醉科。材料:实验于2004-04/12在重庆医科大学附属第二医院麻醉教研室完成。选用健康成年Wistar大鼠35只,由解放军第三军医大学大坪医院实验动物中心提供。参附注射液是中医“回阳救逆”参附汤的中药配方,其主要成分是人参皂甙及乌头类生物碱(雅安三九药业有限公司出品,规格10mL/支,批号:030110)。方法:采用在体心脏缺血再灌注模型,35只大鼠按随机数字表法分为5组,每组7只。①假手术组:只穿线不结扎,静脉注射生理盐水8mL/kg,观察120min。②参附注射液30min组:结扎前15min静脉注射参附注射液8mL/kg,结扎左冠状动脉前降支40min,再灌注30min。③参附注射液120min组:再灌注120min,余同参附注射液30min组。④生理盐水30min对照组:结扎左冠状动脉前降支前15min静脉注射生理盐水8mL/kg,结扎左冠状动脉前降支40min,再灌注30min。⑤生理盐水120min对照组:再灌注120min,余同生理盐水30min组。应用免疫组化法检测各组大鼠心肌凋亡相关基因Bcl-2,Bax和c-Fos蛋白的表达量。主要观察指标:各组大鼠心肌凋亡相关基因Bcl-2,Bax和c-Fos蛋白的表达量。结果:35只大鼠全部进入结果分析,无脱失。①与假手术组比较,生理盐水30min组和120min组大鼠心肌Bcl-2,Bax和c-Fos蛋白表达水平显著升高(P<0.01),Bcl-2/Bax比率显著降低(P<0.01)。②与相应生理盐水组比较,参附注射液30min组和120minBcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.01),Bax和c-Fos蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Bcl-2/Bax比率显著升高(P<0.01)。结论:参附注射液对缺血再灌注心肌保护效应可能与其促进Bcl-2蛋白高表达、抑制Bax与c-Fos蛋白表达、增加Bcl-2/Bax比率,从而抑制心肌细胞凋亡有关。

摘要：背景:KATP通道调节细胞对组织缺血、缺氧的反应,介导并参与细胞或组织器官的保护作用,本课题组前期实验证实参附提取物对大鼠心肌缺血再灌注损伤有良好的保护作用,此保护效应是否与KATP通道有关,目前尚无资料报告(维普、万方数据库、medline数据库,2005-10以前)。目的:观察参附提取物对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,分析其与KATP通道的关系。设计:完全随机分组设计,随机对照实验。单位:大连医科大学附属第二医院麻醉科,重庆医科大学附属第二医院麻醉科。材料:清洁级成年SD大鼠24只,雌雄不拘,体质量240￣320g。参附提取物:商品名参附注射液,雅安三九药业有限公司,批号031002;格列本脲(Glibenclamide):中国药品生物制品检定所。方法:实验于2004-04/12在重庆医科大学附属第二医院麻醉实验室完成。采用在体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,24只大鼠完全随机分组分为4组,各6只。①假手术组:仅穿线不结扎左冠状动脉前降支,穿线后静脉注射生理盐水8mL/kg;②缺血再灌注组:结扎前15min静脉注射生理盐水8mL/kg;③参附提取物组:结扎前15min静脉注射参附提取物8mL/kg;④参附提取物+格列本脲组:结扎前15min静脉注射格列本脲0.33mg/kg和参附提取物8mL/kg。从心尖抽血6mL,取左心室前壁分成3块,分别做匀浆、电镜和免疫组化检测。检测心肌组织中的超氧化物歧化酶活力、丙二醛含量、肿瘤坏死因子α与白细胞介素6表达、血浆中cTnI含量,观察心肌组织超微结构改变。主要观察指标:心肌组织中的超氧化物歧化酶活力、丙二醛含量、肿瘤坏死因子α与白细胞介素6表达、血浆中cTnI含量及心肌组织超微结构改变。结果:实验大鼠24只全部进入结果分析,无脱失。①缺血再灌注各组心肌超氧化物歧化酶活性较假手术组降低,坏死因子α和白细胞介素6表达升高,差异均有统计学意义(P0.05)。②与假手术组比较,缺血再灌注组、参附提取物+格列本脲组cTnI显著升高(P<0.01);与缺血再灌注组比较,参附提取物组cTnI显著降低(P<0.01);参附提取物组和参附提取物+格列本脲组无显著差异。③假手术组心肌细胞超微结构基本正常,线粒体轻度肿胀;缺血再灌注组核溶解,线粒体明显肿胀,大量中性粒细胞浸润;参附提取物组心肌细胞肌丝灶性溶解,线粒体肿胀,核膜完整;参附提取物+格列本脲组线粒体明显肿胀,肌丝灶性溶解,肌浆网轻度扩张,异染色边集。结论:格列本脲抑制大鼠心肌组织的KATP通道,但未消除参附对心肌缺血再灌注损伤的保护作用,KATP通道在参附提取物对心肌缺血再灌注损伤的保护作用中没有发挥重要作用。

摘要：目的:探讨特异性沉默促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liver cell-1,PRL-1)基因表达对舌癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法:设计、合成5条针对PRL-1基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)干扰序列,构建于慢病毒载体质粒中,PCR电泳及基因测序验证。转染293T细胞,Western blot筛选最佳干扰序列,包装产生慢病毒。转染TCA8113细胞,筛选、建立稳定转染细胞株;real-time PCR检测PRL-1基因沉默效率;划痕实验和Transwell实验分别比较慢病毒转染细胞(KD组)、空病毒转染细胞(NC组)及TCA8113细胞(CON组)迁移、侵袭能力变化。结果:PCR电泳及基因测序证实5条sh RNA序列定向插入慢病毒载体质粒中。Western blot筛选出PRL-1-sh RNA-1基因沉默效率最高,包装获得慢病毒滴度为7×108 TU/ml。通过转染、筛选,建立了TCA8113细胞稳定转染细胞株;real-time PCR测得PRL-1基因m RNA表达明显下降(F=809.120,P=0.000);PRL-1基因沉默后细胞迁移能力降低,穿过人工基底膜的细胞数KD组(25.5±0.4)明显少于NC组(81.5±2.0)和CON组(88.5±2.3)(F=1 092.970,P=0.000)。结论:沉默PRL-1基因表达能有效抑制舌癌细胞迁移、侵袭能力。

摘要：目的构建针对人β-连环蛋白（catenin）的腺病毒载体pAdHl-shβ-catenin—GFP，应用RNA干扰（RNAi）的方法，观察其在体内和体外对人大肠癌细胞株HCT116生长的抑制作用。方法设计合成针对B—catenin的shRNA，并克隆至腺病毒表达载体AdH1-GFP上，制备针对β—catenin的腺病毒载体AdH1-GFP—shβ-catenin—GFP，与腺病毒骨架载体共转染293A细胞包装病毒，采用空斑法测定病毒滴度为5×10^9pfu／ml，感染HCT116细胞。应用Westernbolt和报告基因检测HCT116细胞B—catenin表达水平和转录活性，噻唑蓝（MTT）比色法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线，建立软琼脂克隆形成实验观察肿瘤体外成瘤能力，同时建立裸鼠HCT116细胞移植瘤模型，观察肿瘤生长情况。结果成功构建针对β-catenin基因的RNAi腺病毒表达载体，与AdH1-GFP组比较AdH1-shβ、catenin—GFP组在感染24h和48hHCT116细胞β-catenin表达水平和转录活性显著降低，细胞的增殖和克隆形成能力则下降50％（P〈0．01）。体内实验表明重组腺病毒载体介导的β—cateninshRNA明显抑制肿瘤生长（P〈0．01）。结论腺病毒介导的RNAi技术可有效降低β—catenin在大肠癌细胞中的表达水平，抑制肿瘤细胞在体内外的增殖活性。

摘要：目的探讨冠脉内支架置入术后患者健康行为的影响因素,为制定健康行为的干预策略提供依据。方法采用健康促进生活方式量表Ⅱ、自我效能问卷、社会支持评定量表及自行设计的一般资料问卷和知识问卷,对106例冠脉内支架置入术后患者的健康行为、自我效能、社会支持、知识水平等进行调查。结果健康行为总分为130.08±21.25,47.2%的患者健康行为总体水平为一般和差,52.8%的患者为优秀和良好;健康行为与自我效能、胸闷发作次数、社会支持、婚姻状况显著相关(P均<0.01);自我效能对健康行为的预测力最强,解释了81.5%的行为变异。结论医护人员应综合各相关因素,尤其重视自我效能对患者健康行为的促进作用,制定并督导实施相应的干预措施。

摘要：目的 利用三维重建软件Mimics及快速成型技术设计一种寰枢椎椎弓根钉个体化置入技术. 方法用Mimics软件对CT扫描的20例成人寰枢椎标本进行三维重建,并测量重建图像的椎弓根参数.利用快速成型技术制作寰枢椎实物模型,测量模型椎弓根参数.测量寰枢椎标本椎弓根参数.对重建图像、实物模型和寰枢椎标本的椎弓根参数行统计学分析,验证重建图像的精确性.在Mimics中寻找三维重建图像椎弓根最佳钉道,制订个体化置钉参数并模拟置钉,根据这个参数和在实物模型直观指导下在寰枢椎标本上置钉.置钉后行CT扫描,判断置钉准确性. 结果寰枢椎重建图像和实物模型与标本椎弓根参数差异无统计学意义,能准确反映寰枢椎解剖结构.用上述方法,4例寰枢椎标本共16侧椎弓根行置钉术,术后CT扫描显示一侧寰椎椎弓根螺钉稍穿破椎动脉孔内侧骨皮质,其余螺钉均未穿破椎弓根骨皮质. 结论用Mimics软件对寰枢椎进行三维重建,制订个体化置钉参数,同时配合实物模型的直观指导,提供了一种寰枢椎椎弓根钉个体化置钉的方法,利用该法能提高置钉安全性.

摘要：目的构建Foxp3基因的shRNA干扰表达载体,观察Foxp3基因表达对人胃癌细胞株BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人Foxp3序列设计并构建Foxp3基因的shRNA真核表达载体,利用脂质体LipofactamineTM2000转染胃癌细胞株,经G418筛选出稳定转染的阳性细胞,Real-time PCR检测在mRNA水平干扰质粒对Foxp3的抑制效应,MTT法、流式细胞术观察转染后细胞生长特性的变化。结果成功将含靶向Foxp3基因的短发夹双链RNA(shRNA)的重组质粒转染Foxp3表达阳性的胃癌细胞株BGC-823,转染shRNA-Foxp3重组质粒的BGC-823细胞Foxp3mRNA表达明显下降,与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。转染干扰质粒抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,与未转染组和阴性对照组相比,胃癌细胞生长周期出现阻滞在G0/G1期,差异有统计学意义(P<0.05)。结论干扰Foxp3的表达可显著抑制胃癌细胞的增殖和促进细胞凋亡。

摘要：目的:创建新的适合于中国人的多参数回归公式用于胎重估测。方法:750例孕妇,在分娩前3d以内超声检查,记录胎儿双顶径(BPD)、头围(HC)、腹围(HC)和股骨长(FL),出生后记录新生儿体重。其中600例用于公式创建,采用非线性回归设计公式,另150例用于公式的验证。结果:Log10EFW=1.0163+0.0023(HC)+0.0603(AC)+0.2571(FL)+0.0011(BPD)(AC)-0.0074(AC)(FL)(R=0.846)。在验证组,新公式与其他常用公式相比,平均绝对误差及平均绝对百分误差均为最低,准确性较高。结论:新公式更适宜于评估中国胎儿体重。

摘要：目的根据锁骨的解剖学特点，研制一种交锁髓内钉固定锁骨中段骨折，并探讨其优缺点。方法通过对60根成人锁骨及5具成人新鲜尸体标本的测量、实验，测量锁骨长度、外侧段与中段夹角、中段与内侧段夹角、锁骨最窄处直径、锁骨最窄处髓腔内径等数据。设计出交锁髓内钉，其两端结构相同，均可与瞄准器相连接，采用逆行穿钉及两端锁定的方法固定锁骨中段骨折。结果锁骨全长为（14．82±1．15）cm，外侧段与中段夹角、中段与内侧段夹角均为30°左右，锁骨最窄处直径为（1．00±0．16）cm，锁骨最窄处髓腔内径为（0．50±0．18）cm。由锁骨中段骨折端逆行穿导针并扩髓，根据锁骨的形状适度折弯髓内钉，由近端或远端插入髓腔，分别用瞄准器锁定远、近端，固定稳定可靠。结论采用自制交锁髓内钉固定锁骨中段骨折手术创伤小，直视下复位满意而且固定可靠。但相关生物力学数据还有待于进一步研究。