摘要：背景:骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)不仅能分化成间质细胞,而且能向实质细胞(如心肌细胞)转化。在体外定向诱导MSCs分化成神经细胞,是目前国内外研究热点,具有重大理论意义。目的:探讨大鼠MSCs体外诱导分化成神经元的能力。设计:随机空白对照实验的研究。地点、材料和干预:实验在吉林大学公共卫生学院毒理教研室完成。实验动物采用Wistar大鼠(吉林大学实验动物中心),6周龄,雌雄不限。将2～4代的rMSCs接种在铺有盖玻片的24孔板中。分为3个实验组,一个对照组。实验组分别加入终浓度为0.25,0.50和1.00mmol/L异丁基甲基黄嘌呤(isobutylmethylxanthine,IBMX)诱导传代的rMSCs,待细胞分化后进行形态学观察,对照组中不加诱导剂,并用免疫细胞化学方法进行细胞鉴定。主要观察指标:培养MSCs的生长情况,诱导后细胞的形态学变化及nestin(小鼠抗大鼠,单克隆),神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)抗体(兔抗鼠,多抗)、微管相关蛋白-2a,b(microtubule-associatedprotein-2a,b,MAP-2a,b)的免疫细胞化学检测。结果:加入IBMX后,0.25mmol/L组分化成神经元样细胞较少。1.0mmol/L组细胞加入IBMX第2天开始可见细胞陆续死亡。0.5mmol/L组2d即可见有神经元样细胞出现,细胞具有典型的神经元形态特征。

摘要：目的:调查了解苯丙酮尿症(PKU)患儿家长对于疾病相关信息来源和使用情况。方法:采用自行设计问卷调查108例PKU患儿家长对疾病相关信息获取来源和使用情况。结果:94.44%家长对于PKU相关知识渴望知道和了解,5.56%家长对PKU相关知识不想知道或者持无所谓态度。绝大多数家长PKU相关知识是通过医务人员和新筛中心的宣传材料获得,通过报纸杂志及广播电视获得的仅占21.30%,通过网络获取知识的家长占51.85%。家长对获取的相关知识信任度显示,医务人员和新筛中心的官方宣传材料获得了家长100.00%的绝对信任,家长对网络获取知识的信任度为58.33%。结论:PKU患儿家长迫切需要疾病的相关知识,医务人员和新筛中心的官方宣传材料获得了家长的绝对信任。健康教育方式和内容的选择是PKU治疗及预防中需要解决的问题之一。为有效地开展PKU的治疗和预防,应注意提高医务人员健康教育意识及职责。

摘要：目的观察RNA干扰（RNAi）体外培养的HeLa细胞端粒酶催化亚单位（hTERT）对HeLa细胞生物学行为的影响，进一步探讨端粒酶活性与肿瘤细胞恶性生物学行为的相关性。方法体外转录法设计合成4条针对hTERT基因的shRNA，脂质体转染HeLa细胞后经免疫荧光染色和端粒重复序列扩增一酶联免疫法（TRAP—ELISA）测定端粒酶活性，筛选出端粒酶沉默效果最佳片段即B链shRNA。以B链shRNA转染HeI。a细胞为实验组，转染无关siRNA的HeLa细胞为对照组，显微镜下观察细胞在纤维黏连蛋白（FN）上的铺展；CCK一8细胞计数试剂盒检测细胞在FN上黏附；划痕实验评价细胞迁移；Boyden小室侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果铺展实验显示细胞接种到FN上30min时，对照组铺展细胞的比率为（31．3±7．9）％，而实验组铺展细胞的比率仅为（5．6±2．3）％，两组差异有统计学意义（P〈0．01）；2h后对照组和实验组铺展细胞的比率分别为（79．4±4．8）％和（26．3±6．1）％，两组差异仍有统计学意义（P〈0．01）；24h后两组所有细胞几乎均呈铺展状态。细胞黏附实验显示细胞在FN上黏附30rain时对照组细胞黏附率为（83．7±5．4）％，而实验组的细胞黏附率为（67．2±2．8）％，明显低于对照组（P〈0．05）。划痕实验检测细胞的迁移能力显示实验组细胞24h迁移率为（27．1±6．2）％，明显低于对照组（58．7±15．0）％。Boyden小室侵袭实验显示在Matrigel胶上培养4h后，实验组和对照组侵袭的细胞数分别为75．7±14．5和165．1±11．0，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论降低体外培养HeLa细胞的端粒酶活性使细胞的生物学特性发生改变，表现为减低了HeLa细胞的恶性生物学行为。

摘要：目的建立一种快捷、灵敏、特异的Ⅱ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus 2,HSV-2)实时荧光定量PCR检测体系。方法设计HSV-2糖蛋白E基因特异性引物,PCR扩增gE基因片段,并与pGEM-T-easy载体连接,构建pGEM-T-easy-gE2重组质粒。以连续10倍稀释的浓度梯度制备PCR体系标准品质粒,应用SYBR Green法建立gE2real-time PCR方法并优化引物浓度、Mg2+浓度、退火温度和循环程序等条件,绘制标准曲线,并验证方法的敏感性、特异性和稳定性;用该方法检测HSV-2感染小鼠生殖道拭子标本。结果 gE2real-time PCR的标准品线性关系良好(r2=0.997),其他妇科常见病原体无特异扩增;方法的最低检测质粒浓度为3.85×101 copy/μl,试验的变异系数<1%,检测30份小鼠HSV-2感染生殖道拭子标本的阳性率为96.7%,高于常规PCR方法(80.0%)。结论gE2real-time PCR法检测HSV-2具有灵敏、特异、重复性好,可用于HSV-2定性分析和病毒载量检测。

摘要：目的探讨诱导PC12细胞分化的神经细胞靶向沉默Smad7基因特性,同时进行沉默效果检测.方法以Smad7基因为靶目标,设计合成3条siRNA序列,进行细胞转染,利用Real time-PCR和Western blot技术检测沉默效果,筛选出最有效的干扰序列,同时检测出最佳的转染浓度和转染时间.结果针对Smad7基因设计合成及筛选出靶向沉默Smad7基因的干扰序列(siRNA1);siRNA1的最佳转染浓度是4μg/mL;siRNA1的最佳转染时间是24 h;siRNA1对Smad7的抑制效果优于其他干扰序列.结论 siRNA1能有效沉默Smad7基因;lipofectamineTM2000可成功将siRNA1转染至神经细胞,转染效率较高;利用siRNA技术能有效抑制神经细胞.

摘要：目的核干细胞因子(nucleostemin,NS)是维持干细胞和癌细胞增殖所必需的蛋白质,可能成为肿瘤基因治疗的潜在靶点.本文旨在构建靶向NS干扰载体p Genesil-1-NS,为后续实验奠定基础.方法基于已发布的NS mRNA序列(NM_206825),选取5'-AAGCCTA GGAAAGACCCAGG-3'(397-416)作为候选靶序列,按shRNA载体设计原则,设计合成两条互补DNA链,退火后插入载体,并以酶切和测序鉴定重组转化子.结果经酶切及测序鉴定证实合成序列正确插入载体.结论成功构建NS特异性干扰载体p Genesil-1-NS,可用于NS在肿瘤中的功能研究.