摘要：针对目前国产实时荧光定量PCR温控系统升降温速度慢和精度低的问题,提出了一种改进的模糊自适应PID算法。首先根据热力学公式,建立了实时荧光定量PCR温控系统的数学模型,在模糊自适应PID算法的基础上加了一个在线调整量化因子和比例因子的智能调整器,根据设定的模糊控制规则实时优化PID参数、量化因子和比例因子,由PID控制器和智能调整器控制实时荧光定量PCR的温度。采用Simulink对PCR温控系统进行仿真,结果表明:设计的模糊自适应PID控制器控制精度达到0.1℃,快速稳定以后,能达到0.01℃,升降温速度大于等于7.0℃/s,完全能够满足实时荧光定量PCR温控系统对温度精度和升降温速度的要求。

摘要：为了研究花粉致死基因ZmAA1的功能,进而创制转ZmAA1基因玉米不育新材料。在Gen Bank中找到花粉致死基因ZmAA1及启动子Pg47,并在目的片段的上下游设计増加酶切位点,基因合成构建到克隆载体puc57上,采用传统酶切连接的方法构建了植物表达载体pCAMBIA3300-Pg47-ZmAA1-35S-bar,并利用农杆菌介导法转化优良玉米自交系郑58萌动胚。成功构建植物表达载体pCAMBIA3300-Pg47-ZmAA1-35S-bar;共获得94株除草剂抗性植株,其中47株目的片段PCR呈阳性反应,对温室中表现为花粉败育的PCR阳性植株进行目的片段及筛选标记bar基因RT-PCR与蛋白免疫学试纸条检测,结果表明,花粉致死基因ZmAA1及启动子Pg47已经整合到玉米基因组并表达。

摘要：为了研究延边黄牛体外瘤胃发酵特性,试验采用单因素试验设计,用发酵花生壳和苜蓿草粗饲料、玉米-豆粕型精饲料进行组合,A组玉米-豆粕与苜蓿草之比为7∶3,B组玉米-豆粕与苜蓿草之比为3∶7,C组玉米-豆粕与发酵花生壳之比为7∶3,D组玉米-豆粕与发酵花生壳之比为3∶7,分别测定瘤胃微生物发酵指标。结果表明:在饲料中添加发酵花生壳的C、D组延边黄牛体外瘤胃发酵指标较优,更有利于微生物利用,发酵花生壳抑制了产气量,能显著降低气体排放量。说明添加发酵花生壳饲料更适合延边黄牛瘤胃体外发酵。

摘要：本研究通过简单检测DsRed2基因的表型就能快速筛出含有目的基因的成熟籽粒。DsRed2是一种在激发光下呈红色的荧光蛋白,根据在GenBank中获得的DsRed2及其特异性启动子Ltp2的基因序列,设计特异性引物,并构建筛选标记为Bar基因的植物表达载体pCAMBIA3300-Ltp2-DsRed2,通过农杆菌介导法转入玉米品种郑单958中。经除草剂筛选获得210株抗性植株,PCR检测得到阳性植株80株,对PCR检测呈阳性的植株进行试纸条检测,结果表明红色荧光蛋白基因DsRed2已成功整合到玉米基因组中。通过标记基因的快速检测,从而减少后代筛选的工作量和降低制种成本,为转基因玉米新品种的筛选提供直观有效的筛选标记。

摘要：为建立一种特异、灵敏、快速检测牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的分子检测方法,本研究利用金纳米颗粒材料与传统PCR技术相结合,针对BVDV 5′UTR保守序列设计引物,建立了BVDV Nano-PCR新型分子检测方法,并与RT-PCR及商品化IDEXX试剂盒BVDV抗原检测方法分别对临床样品进行对比研究。特异性与敏感性试验结果显示,建立的Nano-PCR只对BVDV特异,而对牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）、牛副流感3型病毒（BPIV3）均无交叉反应;Nano-PCR敏感性是普通PCR的10倍,最低核酸检测量为6.84×10~2copies/L。临床检测结果显示,建立的Nano-PCR方法对38份临床样品的阳性检出率为34.21%,是RT-PCR的2.6倍,是IDEXX试剂盒的1.5倍。本研究结果表明,建立的BVDV Nano-PCR方法可以用来对临床样品进行快速诊断和鉴定,具有特异性高、灵敏度好、快速稳定的优点。

摘要：为了筛选到有效干扰牛叉头框M1(forkhead box M1,FOXM1)基因特异性siRNA,试验设计并合成3个靶向干扰牛FOXM1的5-羧基荧光素(FAM)标记siRNA,对siRNA转染剂量进行优化,筛选出干扰效果较好的siRNA,并检测干扰FOXM1后MDBK细胞中LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白的表达水平。结果表明:siRNA的最佳转染剂量为1.5μL(20μmol/L),3个特异性siRNA的干扰效率分别为34.2%、52.0%及72.5%,干扰牛FOXM1基因效果最好的siRNA是siRNA-929,它能够阻止细胞中LC3-Ⅰ型向LC3-Ⅱ型的转化,使自噬过程受到抑制。说明试验成功筛选到干扰牛FOXM1基因的特异性siRNA。

摘要：本研究在GenBank中找到花粉育性恢复基因MS45、花粉致死基因ZmAA1、颜色筛选标记基因DsRed2及其特异性启动子和终止子序列,并在目的基因和植物表达载体pCAMBIA3300设计带有限制性内切酶位点的特异性引物,扩增基因片段,双酶切目的片段及载体,回收后连接,构建表达载体pCAMBIA3300-MS45-DsRed2-ZmAAI,通过农杆菌介导的萌动胚遗传转化法将构建的表达载体转化到优良玉米自交系吉A001中,通过喷洒含5mg/L除草剂筛选得到397株草胺膦抗性植株,用PCR检测得到119株含有目的基因的阳性植株。结果表明,MS45-DsRed2-ZmAAI基因在玉米中得到表达。

摘要：在Genebank中搜索花粉致死基因Zm AA1、花粉育性恢复基因Ms45、粉质胚乳突变基因Mucronate及各基因特异调控因子和终止子序列,并在目的片段的上下游设计增加同尾酶Spe I(Nhe I、Xba I)和酶切后具有各种类型的DNA片段的Esp3I酶切位点,基因合成构建到克隆载体puc57上,命名为puc-Zm AA1、puc-Ms45、puc-Mc。采用传统酶切连接的方法将目的片段构建到植物表达载体p CAMBIA3300上,并用热击法将重组质粒导入农杆菌LBA4404及EHA105中,酶切、PCR检测及核苷酸序列测定证明,植物表达载体构建成功。