摘要：食品非转基因标识在中国被广泛使用,信息不对称增加了非转基因标识被滥用的风险,市场机制不足以对其进行调节,且中国对非转基因标识使用的法律规制存在立法规定不细致、司法"不认定"等问题。现有研究也主要针对非转基因广告而不是非转基因标识本身。对比来看,德国、日本、美国均有专门针对食品非转基因标识使用的法律规范,具体规定了可使用非转基因标识的食品范围及要求,通过对非转基因食品进行认证管理以确保使用标识的食品的非转基因身份真实,设置统一的标识形式以确保统一的市场并避免消费者被误导。中国应当借鉴这些共通的经验,食品标识相关的法律法规要专门对非转基因标识的使用设立规范,并细化对非转基因标识的形式要求;构建专门的非转基因食品认证制度,由食品药品监督管理局授权专门认证机构对其进行认证。

摘要：农作物区域试验精确度分析是品种和试验环境科学评价的基础。本研究分析了2000―2014年期间长江流域、黄河流域和西北内陆棉区国家棉花区试的试验精确度分布与演变动态,并分析比较了棉花12个主要性状的精确度差异,旨在全面分析和评价我国棉花品种区域试验精确度的发展水平和演变规律,为全国棉花品种区域试验的合理布局和优化设计提供参考依据。研究结果表明:(1)单年单点棉花区域试验能鉴别出5%、8%、10%、12%、15%和20%品种间差异的比率分别约为20%、50%、70%、83%、92%和98%。(2)单年多点棉花区域试验精确度呈逐年提高的演变趋势,RLSD0.05(RLSD,relative least significant difference)由2000年的11.43%下降到2014年的7.1%,其中长江流域的RLSD0.05已经连续9年、黄河流域棉区的RLSD0.05连续4年稳定在5%以下,可以稳定地鉴别品种间5%的差异;西北内陆棉区的RLSD0.05也呈逐年下降趋势,目前可以可靠鉴别品种间10%的差异。(3)棉花12个主要性状的试验精确度差异显著,其中皮棉产量和结铃数的精确度较低,霜前花率、衣分、纤维长度和生育期的精确度较高,其余性状精确度中等。

摘要：应用水稻种子生物反应器开发口服重组胰岛素原具有重要应用前景。通过分子设计保证重组胰岛素原在人体肠道内的自主加工成熟,根据水稻密码子偏爱性人工合成了霍乱毒素β亚基和人胰岛素原的融合基因(cholera toxin B subunit fused with human proinsulin,CTBIN),并在C末端添加内质网滞留信号KDEL。通过PCR技术从粳稻品种日本晴全基因组中克隆谷蛋白启动子及其信号肽序列pGluB1sig(GluB1promoter and its signal peptide)用于驱动融合基因CTBIN的表达,插入载体pCAMBIA1302,构建了水稻种子蛋白体靶向表达口服重组胰岛素原的载体pCAMBIA1302-pGluB1sig-CTBINNos。采用农杆菌介导法转化日本晴,获得了46株转基因水稻植株,Western杂交检测到CTB-人胰岛素原融合蛋白在水稻种子中表达。

摘要：美国"国家生物工程食品信息披露标准"法案出台的主要目的是统一转基因食品标识立法,避免出现州各自为政、部分州与联邦对立的局面,减少州际食品生产和交易的成本。法案优先于州标识立法,它在要求"强制"的同时,也为经营者提供了多种信息披露方式。披露要求及标准则由农业部在两年内制定规章予以确定。这一法案是美国各方妥协的结果,并未影响原有的生物技术政策和管理原则。在我国,转基因技术相关立法上亦存在矛盾和冲突,转基因食品标识问题尚未有定论。美国立法妥协的艺术值得我国借鉴,各方应当认可国家发展生物技术的目标。我国转基因食品标识立法需要高层次立法的明确授权,设置更多样的标识方式,并进行充分的法律实施评估。

摘要：目的本实验旨在高效表达可溶性的O型口蹄疫病毒VP1蛋白,并形成纳米样颗粒。方法根据O型口蹄疫病毒核酸序列,得到FMDV O/MYA/7/98株的VP1蛋白基因,并进行截短和优化,共73个氨基酸;同时,从肠道沙门菌(Salmonella enterica)中分离得到135个氨基酸铁蛋白(Fn)基因片段,将O型口蹄疫病毒VP1蛋白与铁蛋白串联,设计并合成了口蹄疫病毒VP1蛋白-铁蛋白基因片段,命名为Se Fnt16798。构建了Se Fnt16798融合Grifin、GST、MBP、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、Ars C、Ppi B、Ce HSP17等9种不同可溶性标签的表达重组载体。分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测,筛选高效可溶性表达的Se Fnt16798融合蛋白。重组蛋白通过Ni-NTA Agarose亲和纯化,进行电子显微镜检测。结果实验成功构建9个Se Fnt16798表达载体;9个标签中,MBP与Se Fnt16798蛋白相融合的可溶性表达效果最好,并获得了高纯度的MBP-Se Fnt16798重组蛋白质;电子显微镜结果显示,MBP-Se Fnt16798形成了纳米样颗粒。结论本实验建立了稳定获得Se Fnt16798重组蛋白质的方法。

摘要：目的本实验旨在表达出高可溶性的A型口蹄疫病毒1D蛋白,并通过电子显微镜检测,以期望形成纳米样颗粒。方法根据A型口蹄疫病毒核酸序列,得到FMDV A/GDMM/CHA/2013株的1D蛋白基因,并进行截短和优化,共132个氨基酸;同时,从结肠弯曲杆菌(Campylobacter coli)中分离得到135个氨基酸的铁蛋白(Fn)基因片段,将A型口蹄疫病毒1D蛋白与铁蛋白串联,设计并合成了口蹄疫病毒1D蛋白-铁蛋白片段,命名为CcFnt166AS。构建了CcFnt166AS融合Grifin、GST、MBP、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、ArsC、PpiB、CeHSP17等9种不同可溶性标签的表达重组载体。分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDSPAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测,筛选出高可溶性表达的CcFnt166AS融合蛋白。重组蛋白通过NiNTA Agarose亲和纯化,进行电子显微镜检测。结果成功构建9种CcFnt166AS表达载体;9个标签中,MBP与CcFnt166AS蛋白相融合的可溶表达效果最好,并获得了高纯度的MBP-CcFnt166AS重组蛋白质;电子显微镜结果显示,MBP-CcFnt166AS形成了纳米样颗粒。结论本实验建立了稳定获得CcFnt166AS重组蛋白质的方法。

摘要：根据GenBank中已发表的Lhx2基因序列设计引物,采用RT-PCR方法,从陕北白绒山羊皮肤组织克隆Lhx2基因编码区cDNA,对其进行生物信息学分析,并构建原核表达载体pET-Lhx2,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。最终获得陕北白绒山羊Lhx2基因,长1 221bp;酶切和测序结果显示,原核表达载体pET-Lhx2构建成功;SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组原核表达载体在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白。

摘要：大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)是引起棉花黄萎病的真菌病害,广泛存在于中国的产棉区,使棉花产量和品质大幅下降。虽然,人们长期以来一直在寻找抗病基因,但很难在陆地棉中发现。为了寻找对棉花黄萎病菌有强抑制作用的抗菌肽或基因,人工设计和合成了20条抗菌肽(简称"人工肽"),通过抑菌圈法从中筛选到3条最有潜力的人工肽(D4E1、D51和D28),并与2条天然抗菌肽(Decoralin和Pseudin,简称"天然肽")进行对比,用于鉴定其对棉花黄萎病菌的抑菌活性。结果表明,D4E1和D51这2条人工肽的抑菌活性最强,在多肽质量浓度为20μg/mL时,几乎能100%地抑制黄萎病菌的菌丝生长和孢子萌发,显示出高抗特性。同时,实验采用生物信息学软件和反相高效液相色谱法测定了抗菌肽疏水活性,结果表明反相高效液相色谱保留时间可以更有效地表示抗菌肽的疏水活性,从而能更准确推测抗菌肽的抑菌活性。上述研究结果说明:1)如果有一个好的人工设计,人工肽对黄萎病菌的抑制效果会比天然肽更佳;2)人工肽的氨基酸序列可推导出核苷酸序列,作为抗棉花黄萎病的候选基因,用转基因育种技术可获得抗病新品种。

摘要：应用基于RNA干扰（ RNA interference，RNAi）原理的大豆转基因技术，能够在转录水平沉默同源靶基因，这为转基因抗病毒作物的培育提供了新的策略。通过比对已报道的能与病毒VPg发生互作的10种植物的eIF4E氨基酸序列，确定出大豆eIF4E的保守区间为62～237位氨基酸序列，克隆出406 bp的干扰片段eIF4Ei（含58 bp特异性重组序列attB），进而采用GATEWAY技术构建了干扰表达载体pB7GWIWG2（Ⅱ）-eIF4Ei。之后通过测序证实干扰片段eIF4Ei在载体构建过程中没有发生变异；酶切试验证实终端质粒的2个ccdB位点均被eIF4Ei置换；用启动子和终止子设计的引物对含有重组质粒的菌液进行PCR扩增，证实2个干扰片段以相反的方向插入到终端质粒中。从而证明反向重复的干扰表达载体构建成功，为应用基于RNAi原理的大豆转基因技术培育对大豆花叶病毒具有抗性的大豆新种质提供了基础材料。

摘要：根据棉花纤维特异表达cDNA文库得到的咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因EST序列设计引物,采用RT-PCR技术从棉花中克隆了一个CCoAOMT基因,命名为GhCCoAOMT2。GhCCoAOMT2基因cDNA(GenBank登录号为FJ376606)具有一个747 bp的开放阅读框,5′非编码区为12 bp,3′非编码区为243 bp,编码248个氨基酸,预测分子量约为28.023 kD,等电点为5.39。GhCCoAOMT2基因组序列长度为1 442 bp,包含4个外显子和3个内含子。氨基酸同源分析发现,GhCCoAOMT2与来自毛白杨、烟草和苎麻的CCoAOMT同源性较高。半定量RT-PCR检测表明,GhCCoAOMT2基因在棉花各个组织中都有表达,其中茎部的表达量最高。原核表达分析表明,最佳诱导表达条件为0.2 mmol/LIPTG在37℃下诱导6 h。