摘要：分子生物学诊断技术是用于检测伤寒沙门菌的重要辅助手段,但由于需要较好的实验设备和条件使其应用与发展受到限制,所以建立简捷的检测平台显得尤为重要.逆转录-环介导等温核酸扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)方法目前用于病原微生物的检测发展迅速,此方法相对简单、快速.本研究针对伤寒沙门菌STY3671基因设计6条特异性引物,通过优化反应条件,建立了检测该靶基因的RT-LAMP方法.利用伤寒标准菌株CT-18及其血模拟标本,研究了该方法的特异性及灵敏性,并与rRT-PCR(real-time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction)方法的敏感性进行比较.结果显示:等温65℃条件下,30～60 min内可完成RT-LAMP检测反应,利用该方法检测134株伤寒沙门菌均为阳性,其余47种检测菌株均扩增阴性.在以全血模拟样品提取核酸为模板的检测中,敏感性达7 cfu/mL,比rRT-PCR检测低限高10倍.本研究结果表明:我们建立的敏感性高、特异性好的RT-LAMP检测血液中伤寒沙门菌的方法,为伤寒沙门菌感染的快速诊断提供了简便的手段,可用于对伤寒的早期诊断、预防控制及临床治疗.

摘要：目的建立实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)方法检测伤寒沙门菌。方法针对伤寒沙门菌STY1631基因设计特异性引物,通过优化反应条件,建立检测该靶基因的rRT-PCR方法,利用51个血清型的纯培养伤寒和非伤寒沙门菌菌株、常见非沙门致腹泻病原菌以及发热为主要症状的8种常见病原菌核糖核酸(RNA)评价该方法的特异性及敏感性,同时对伤寒沙门菌全血模拟标本进行敏感性检测。结果利用该方法检测48株伤寒沙门菌均阳性,其余33种非伤寒沙门菌血清型、致腹泻的其他5种肠道致病菌以及发热为主要症状的8种常见非沙门菌也均扩增阴性。在对纯菌总RNA检测中,rRT-PCR的最低检测限为1 pg/反应,即194个拷贝/反应。以全血模拟样品提取核酸为模板的检测中,敏感性达1×102cfu/ml。结论建立了敏感性高、特异性好的rRT-PCR检测血液中伤寒沙门菌的方法,为伤寒沙门菌感染的快速诊断及不明原因发热症状的病原初步鉴别提供了简便的手段,可用于对伤寒的早期诊断、预防控制及临床治疗。