摘要：非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起家猪和野猪的一种高死亡率的传染性疾病。ASFV具有庞大的基因组,其中非结构蛋白pD1133L被预测为其编码的6个解旋酶之一。本实验室应用免疫沉淀-质谱联用(immunoprecipitation-mass spectrometry,IP-MASS)技术筛选与pD1133L互作的宿主细胞蛋白,发现细胞波形蛋白(vimentin,VIM)为pD1133L互作的宿主蛋白之一,但尚不清楚宿主蛋白VIM对ASFV复制的影响。【目的】探究ASFV与VIM的相互调控作用,揭示VIM促进ASFV复制的机制。【方法】通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)试验验证pD1133L与VIM存在互作关系;外源过表达VIM蛋白以及设计并合成VIM的si RNA探究VIM对ASFV复制的影响;利用Western blotting以及荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)方法检测ASFV对VIM蛋白水平以及转录水平的影响;通过Western blotting、间接免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)探究巨噬细胞感染ASFV后VIM磷酸化水平变化以及亚细胞定位变化情况;CCK-8试剂盒检测VIM磷酸化抑制剂KN-93处理的最佳浓度,并利用Western blotting以及IFA检测KN-93对VIM磷酸化、亚细胞定位以及对ASFV复制影响。【结果】VIM过表达促进ASFV复制,敲低VIM的表达则抑制ASFV复制;ASFV感染抑制VIM蛋白水平以及转录水平表达,且呈时间依赖性;ASFV感染后VIM发生磷酸化修饰且发生亚细胞定位改变,从而促进ASFV复制。【结论】证实了ASFV与宿主蛋白VIM之间的相互调控作用;初步确定ASFV感染后VIM受到ASFV pD1133L调控,亚细胞定位发生重排向核周聚集从而促进ASFV复制的机制。

摘要：本试验旨在研究饲粮组成及抗生素对断奶仔猪生长性能和肠道健康的影响。试验采用2×2双因子试验设计,选择体况相似、胎次接近的24日龄断奶的"杜×长×大"仔猪72头,根据体重相近原则,随机分为4个处理,分别饲喂无抗复杂饲粮、无抗简单饲粮、有抗复杂饲粮和有抗简单饲粮,每个处理6个重复,每个重复3头仔猪。抗生素添加75 mg/kg金霉素和50 mg/kg吉他霉素(按有效成分计)。试验期共21 d。结果表明:1)与简单饲粮相比,复杂饲粮显著降低了试验第1~7天、第1~21天的仔猪料重比(F/G)和腹泻率(P<0.05),显著提高了试验第1~7天仔猪的平均日增重(ADG)(P<0.05),显著提高了仔猪回肠的绒隐比、空肠的杯状细胞数量(P<0.05),显著上调了空肠闭合蛋白(OCLN)mRNA相对表达量(P<0.05),显著提高了空肠白细胞介素-10(IL-10)和转化生子因子-β1(TGF-β1)含量(P<0.05),显著降低了回肠白细胞介素-1β(IL-1β)含量(P<0.05)。2)与无抗饲粮相比,有抗饲粮显著提高了试验第1~7天和第1~21天仔猪的ADG及试验第1~21天仔猪的平均日采食量(ADFI)和第22天的末重(P<0.05),显著降低了试验第1~7天、试验第1~21天仔猪的F/G和腹泻率(P<0.05),显著提高了仔猪回肠的绒隐比(P<0.05),显著提高了空肠和回肠的杯状细胞数量(P<0.05),显著降低了仔猪空肠和回肠Toll样受体2(TLR2) mRNA相对表达量(P<0.05)。综上所述,复杂饲粮可以提高断奶仔猪生长性能,降低腹泻率,增强肠道免疫屏障功能;抗生素能够有效抑制腹泻,但对仔猪肠道屏障功能有不利影响。

摘要：猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病毒(porcine pseudorabies virus,PRV)引起的一种急性、热性传染病。自2011年底以来,PRV发生了变异,传统的PRV弱毒疫苗已不能对PRV变异株提供完全保护,这给我国PR防控带来了巨大挑战。为了解安徽省PRV流行特征及其主要毒力基因遗传变异情况。利用PCR技术、细胞接种试验、电子显微镜观察、间接免疫荧光试验及兔体接种试验等方法,对安徽省临诊病例中疑似PRV感染的病猪进行病原检测及PRV分离鉴定,并通过设计6对特异性引物对PRV分离株主要毒力基因(gE、gI、TK、gB、gC、gD)进行克隆及测序分析。2016—2018年安徽省临诊病例中共分离鉴定15株PRV;PRV分离株主要毒力基因序列均与2011年后国内PRV变异株同源性较高;与2011年前国内PRV经典株序列比对,PRV分离株gE、gB、gC及gD基因存在多个位点的一致性替换、插入或缺失,且gE、gC基因多位点突变位于其重要的抗原表位区。本研究分离的15株PRV均为变异株,变异株已成为安徽省主要的流行毒株。15株PRV分离株的gI、TK基因序列较为保守,而gE、gC蛋白抗原表位区域氨基酸的突变可能导致其毒力及抗原性发生改变。部分PRV分离株与邻近地区PRV序列同源性均为100%,可能与频繁跨省调运生猪、跨区引种等原因有关。

摘要：为了快速检测猪德尔塔冠状病毒(PDCoV),针对PDCoV N基因设计特异的引物,建立了猪德尔塔冠状病毒重组聚合酶扩增(RPA)方法。特异性试验中以PPRSV、PEDV、PKV、TGEV和FMDV为模板时均未产生任何条带,特异性较好。该检测方法的灵敏度为103 copies/μL,敏感性较好。用该方法检测194份仔猪腹泻样品,PDCoV阳性率为14.4%,较常规RT-PCR阳性率为11.9%更高。研究所建立的猪德尔塔冠状病毒RPA检测方法具有反应快速、操作简单、结果可靠、设备要求低等优点,可为基层简易实验室提供一种方便适用的快速检测方法。

摘要：为了对规模化和集约化型猪场猪舍环境进行监测与控制,以无线通信模块JN5148为核心,进行了基于无线传感器网络(WSN)技术的开发,设计了环境监测仪。在此基础上组成现场监控网络,对猪舍温度、湿度、氨气(NH3)浓度和硫化氢浓度(H2S)进行动态监测,并设计了对不同猪生长阶段的监控指标,通过手机电脑等智能终端进行预警提示。采用B/S(浏览器/服务器)模式,实现通过浏览器远程实时监控猪舍。经过半年时间在实际生产过程中的应用表明,该系统运行性能稳定可靠,在数据采集、传输及远程监控中均达到实际需求,适合应用于猪舍环境精准的监测。

摘要：Sirt2是组蛋白去乙酰化酶(HDAC III)家族成员之一,对细胞周期、自噬、脂肪细胞分化、神经细胞存活等生物学过程的调节发挥重要作用.目前,Sirt2在肌肉发育过程中的研究尚未见报道.本文通过构建Sirt2慢病毒干扰载体,侵染C2C12成肌细胞,并用细胞免疫荧光化学、real-time PCR和Western印迹方法,检测其对成肌分化标志基因及相关信号通路因子的影响.结果显示,干扰质粒shRNA-663处理C2C12细胞后,Sirt2 mRNA及蛋白质表达水平与对照相比显著下调(P<0.01);C2C12细胞分化第4 d,MyoD,MyoG,MyHC mRNA及蛋白质表达均显著增加(P<0.01);PI3K,AKT,FoxO1磷酸化水平明显升高.结果表明,Sirt2可通过PI3K/AKT/FOXO1信号通路来促进成肌细胞分化,是肌生成的一个潜在调节因子.

摘要：【背景】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人兽共患病原菌,有35种血清型,其中以猪链球菌2型(SS2)危害最为严重。研究发现,各种血清型SS分泌的溶血素(Suilysin,SLY)可能具有较好的免疫保护作用,因此,SLY作为SS基因工程亚单位疫苗的成分具有较大优势。【目的】获得SS2安徽强毒株(AH10-8株)溶血素基因(sly)的表达产物,并对其免疫原性进行测定分析。【方法】根据GenBank数据库中登录号为DQ443533.1的全长sly序列,设计合成一对分别带有Bam HI、XhoI酶切位点的特异性引物,利用PCR从AH10-8株中扩增sly基因,构建pET-30a-sly原核表达重组质粒,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,进行IPTG诱导表达和His-Tag镍柱纯化蛋白,SDS-PAGE检测SLY,Western blotting鉴定SLY的反应原性;利用昆明鼠和斑马鱼进行SLY免疫攻毒保护试验,间接ELISA方法检测昆明鼠血清IgG抗体效价,观察比较病理组织变化及其免疫保护率。【结果】重组质粒pET-30a-sly在大肠杆菌中实现高效表达,获得大小为60kD的目的蛋白,与预期大小的SLY分子质量一致,能与SS2阳性血清发生特异性反应。SLY和AH10-8株灭活全菌体3次免疫昆明鼠后的血清IgG抗体效价分别为1:6 400、1:204 800 (以AH10-8株全菌体的超声裂解物为包被抗原)和1:102 400、1:51 200 (以SLY为包被抗原);SLY和AH10-8株灭活全菌体对昆明鼠和斑马鱼的免疫保护率分别为40%、80%和84%、92%;病理组织变化与攻毒对照组之间差异明显。【结论】成功表达的SLY具有良好的反应原性和免疫原性,可诱导机体产生保护性免疫反应,有望成为研制SS2新型疫苗的候选成分。

摘要：为了探讨喷洒微生态制剂对妊娠母猪舍地面和空气病原微生物的影响,试验采用单因子设计,选择结构、布局、朝向、面积、母猪数量完全相同的3栋妊娠母猪舍,随机分为空白对照组、阳性对照组和试验组。空白对照组不做任何处理,阳性对照组用化学消毒剂带猪喷洒消毒,试验组喷洒微生态制剂。结果表明:化学消毒剂对妊娠母猪舍地面和空气中的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌有显著消除作用,微生态制剂的除菌效果虽然前期不及化学消毒剂,但连续喷洒4~5 d后即可达到与化学消毒剂相近的效果,且有逐渐提高的趋势;化学消毒剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌的除菌效果持续作用较弱,而微生态制剂的除菌效果持续作用明显。

摘要：根据GenBank中已公布的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)N基因序列设计并合成特异的引物和TaqMan探针,构建质粒标准品,以标准品为模板建立了检测PDCoV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,并对该方法的敏感性、特异性及重复性进行了评价。结果显示,以猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪库布病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和口蹄疫病毒为模板时均未检测到荧光信号,表明该方法具有良好的特异性;用2.66×10~6、2.66×10~5和2.66×10~4copies/L这3个不同浓度的质粒标准品进重复试验,循环阈值Ct的变异系数均低于2%,表明该方法具有良好的特异性;标准曲线斜率为-3.461,相关系数为R^2=0.998,表明阈值和模板浓度之间具有良好的线性关系。10倍梯度稀释质粒标准品,检测的最低限度为2.66×10~1 copies/L的质粒DNA,表明此方法具有良好的敏感性。利用该方法对194份临床猪粪便样品进行了检测,结果显示PDCoV阳性率为22.1%,明显高于常规RT-PCR的11.9%,表明该方法可应用于PDCoV的临床诊断及定量检测。

摘要：以年出产万头商品猪,设有屠宰分割厂的集合型养殖基地为研究对象,采用无线射频识别(radio frequency identification,RFID)技术、JSP(java server pages)编程技术,构建安全猪肉追溯系统,可以使监督部门迅速反馈确定责任,快速召回。同时也让消费者获得知情权,吃上放心肉。