摘要：为了快速检测猪德尔塔冠状病毒(PDCoV),针对PDCoV N基因设计特异的引物,建立了猪德尔塔冠状病毒重组聚合酶扩增(RPA)方法。特异性试验中以PPRSV、PEDV、PKV、TGEV和FMDV为模板时均未产生任何条带,特异性较好。该检测方法的灵敏度为103 copies/μL,敏感性较好。用该方法检测194份仔猪腹泻样品,PDCoV阳性率为14.4%,较常规RT-PCR阳性率为11.9%更高。研究所建立的猪德尔塔冠状病毒RPA检测方法具有反应快速、操作简单、结果可靠、设备要求低等优点,可为基层简易实验室提供一种方便适用的快速检测方法。

摘要：【背景】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人兽共患病原菌,有35种血清型,其中以猪链球菌2型(SS2)危害最为严重。研究发现,各种血清型SS分泌的溶血素(Suilysin,SLY)可能具有较好的免疫保护作用,因此,SLY作为SS基因工程亚单位疫苗的成分具有较大优势。【目的】获得SS2安徽强毒株(AH10-8株)溶血素基因(sly)的表达产物,并对其免疫原性进行测定分析。【方法】根据GenBank数据库中登录号为DQ443533.1的全长sly序列,设计合成一对分别带有Bam HI、XhoI酶切位点的特异性引物,利用PCR从AH10-8株中扩增sly基因,构建pET-30a-sly原核表达重组质粒,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,进行IPTG诱导表达和His-Tag镍柱纯化蛋白,SDS-PAGE检测SLY,Western blotting鉴定SLY的反应原性;利用昆明鼠和斑马鱼进行SLY免疫攻毒保护试验,间接ELISA方法检测昆明鼠血清IgG抗体效价,观察比较病理组织变化及其免疫保护率。【结果】重组质粒pET-30a-sly在大肠杆菌中实现高效表达,获得大小为60kD的目的蛋白,与预期大小的SLY分子质量一致,能与SS2阳性血清发生特异性反应。SLY和AH10-8株灭活全菌体3次免疫昆明鼠后的血清IgG抗体效价分别为1:6 400、1:204 800 (以AH10-8株全菌体的超声裂解物为包被抗原)和1:102 400、1:51 200 (以SLY为包被抗原);SLY和AH10-8株灭活全菌体对昆明鼠和斑马鱼的免疫保护率分别为40%、80%和84%、92%;病理组织变化与攻毒对照组之间差异明显。【结论】成功表达的SLY具有良好的反应原性和免疫原性,可诱导机体产生保护性免疫反应,有望成为研制SS2新型疫苗的候选成分。

摘要：为了探讨喷洒微生态制剂对妊娠母猪舍地面和空气病原微生物的影响,试验采用单因子设计,选择结构、布局、朝向、面积、母猪数量完全相同的3栋妊娠母猪舍,随机分为空白对照组、阳性对照组和试验组。空白对照组不做任何处理,阳性对照组用化学消毒剂带猪喷洒消毒,试验组喷洒微生态制剂。结果表明:化学消毒剂对妊娠母猪舍地面和空气中的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌有显著消除作用,微生态制剂的除菌效果虽然前期不及化学消毒剂,但连续喷洒4~5 d后即可达到与化学消毒剂相近的效果,且有逐渐提高的趋势;化学消毒剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌的除菌效果持续作用较弱,而微生态制剂的除菌效果持续作用明显。

摘要：根据GenBank中已公布的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)N基因序列设计并合成特异的引物和TaqMan探针,构建质粒标准品,以标准品为模板建立了检测PDCoV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,并对该方法的敏感性、特异性及重复性进行了评价。结果显示,以猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪库布病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和口蹄疫病毒为模板时均未检测到荧光信号,表明该方法具有良好的特异性;用2.66×10~6、2.66×10~5和2.66×10~4copies/L这3个不同浓度的质粒标准品进重复试验,循环阈值Ct的变异系数均低于2%,表明该方法具有良好的特异性;标准曲线斜率为-3.461,相关系数为R^2=0.998,表明阈值和模板浓度之间具有良好的线性关系。10倍梯度稀释质粒标准品,检测的最低限度为2.66×10~1 copies/L的质粒DNA,表明此方法具有良好的敏感性。利用该方法对194份临床猪粪便样品进行了检测,结果显示PDCoV阳性率为22.1%,明显高于常规RT-PCR的11.9%,表明该方法可应用于PDCoV的临床诊断及定量检测。

摘要：以年出产万头商品猪,设有屠宰分割厂的集合型养殖基地为研究对象,采用无线射频识别(radio frequency identification,RFID)技术、JSP(java server pages)编程技术,构建安全猪肉追溯系统,可以使监督部门迅速反馈确定责任,快速召回。同时也让消费者获得知情权,吃上放心肉。

摘要：为了实现运输过程中对食品环境温度的实时监测与记录,本文设计了一种基于ARM7的温度采集与存储系统。系统采用AT91SAM7S64芯片进行控制和DS18B20温度传感器进行温度采集,将采集到的温度数据存储于芯片内部的FLASH中,最后通过串口通信将采集存储的温度数据传送至PC机。结果表明系统能准确地显示出实际环境温度,并且系统反应迅速、体积小,并且成本低廉,可以应用于很多温度监测领域。

摘要：根据GenBank中公布的猪嵴病毒（porcine kobuvirus，PKV）基因组序列，设计并合成特异性引物,构建阳性质粒标准品，以阳性标准品为模板建立猪嵴病毒的重组酶聚合酶扩增（RPA）快速检测方法，并对此方法的敏感性、特异性及重复性进行了评价。结果显示，以猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪德尔塔冠状病毒、口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒为模板时均未检测到特异性扩增条带，表明该方法具有良好的特异性；用3．36×10^7、3．36×10^6和3．36×10^5copies／μL三个不同浓度的质粒标准品进行重复试验，均能扩增出特异性条带，表明该方法具有良好的重复性。10倍梯度稀释质粒标准品．此方法检测的最低限度为3．36×10^2copies／pL的质粒DNA，表明此方法具有良好的敏感性。利用该方法对208份临床猪粪便样品进行了检测，结果显示，猪嵴病毒阳性率为73．1％，明显高于常规RT-PCR的46．6％，两种方法的符合率为90．2％。上述结果表明，本研究建立的RPA方法可应用于猪嵴病毒的临床诊断及快速检测。

摘要：目的建立检测沙门菌耐药基因的多重PCR方法。方法在已有的单一PCR检测沙门菌耐药基因的基础上,采用正交试验设计法,对Mg2+、dNTPs和引物浓度比例以及退火温度进行优化,确定沙门菌耐药基因多重PCR最佳反应体系和条件,并运用多重和单一PCR同步比较检测细菌耐药基因。结果成功建立了氨基糖苷类药物耐药基因aph(3)-IIa、aadA2、aacC4三重PCR方法、氯霉素类药物耐药基因flor、cmlA和catI三重PCR方法、四环素类药物耐药基因tetA和tetB二重PCR方法,且多重和单一PCR同步检测相关耐药基因结果符合率达100%。结论建立的多重PCR具有特异、快速、简便的特点,可为沙门菌耐药基因的检测以及耐药性的监控提供技术支撑。

摘要：为了解决规模化养猪场管理方式落后和可追溯性差问题,本文提出一套基于无线射频识别(radio frequencyidentification,RFID)、企业资源计划(enterprise resourdes planning,ERP)技术的生猪养殖管理系统的技术方案,给出了系统的目标、总体构架以及生猪养殖企业经济效益的评估等功能。可为企业的发展提供决策依据,同时系统的可追溯功能能够让消费者获得知情权。

摘要：【目的】利用规律成簇的间隔短回文重复序列/Cas9核酸酶(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9 nuclease,CRISPR/Cas9)技术建立USP30基因敲除的人胚胎肾细胞(human embryonic kidney 293T cells,HEK-293T)细胞系,为开展宿主泛素特异性蛋白酶30(ubiquitin-specific protease 30,USP30)蛋白的功能研究建立了细胞模型;同时,初步探究USP30蛋白在病毒感染过程中的作用。【方法】根据Ensemble数据库查询USP30基因序列,定位USP30在基因组中不同转录本重叠区的第一个外显子段,设计并合成2对引导RNA(single guide RNAs,sgRNA),分别构建在pX459载体中;将pX459-USP30-sgRNA质粒转染HEK-293T细胞,并用嘌呤霉素处理,筛选出转染阳性的细胞,然后通过有限稀释法筛选单克隆细胞,通过Western blotting及测序检测USP30基因的敲除。通过Western blotting及实时荧光定量PCR分析比较塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)在野生型和USP30基因敲除HEK-293T细胞中的复制差异。【结果】Western blotting及测序证实USP30基因敲除单克隆细胞系构建成功。进一步实验发现,SVA在USP30基因敲除细胞中的复制水平显著低于野生型细胞。【结论】成功构建USP30基因敲除的HEK-293T细胞系,首次证明USP30对SVA的复制具有促进作用,为进一步揭示USP30相关免疫反应和SVA感染过程的作用机制提供了良好的细胞模型,也为开展宿主USP30蛋白调控病毒复制的机制研究提供了关键工具和一定的理论依据。