摘要：本研究通过间接测热法结合直接法测定并比较了不同加工工艺玉米在妊娠母猪上的净能值和养分表观消化率。试验选取6头二元(长×大)杂交健康经产妊娠第42天母猪,体重为(244±22)kg,平均胎次为5.9,采用4×6尤丁方试验设计,分为4个组,每组6个重复,每个重复1头猪。饲粮处理包括粉碎玉米饲粮、压片玉米饲粮、膨化玉米饲粮和糯玉米饲粮。试验共开展4期,每期试验期8 d,其中预试验4 d,正试期4 d;正试期将试验猪转入自主研发的猪专用开路式呼吸测热小室,前3 d进行正常测热,最后1 d进行绝食测热。结果表明:1)妊娠母猪对膨化玉米饲粮总能、干物质、粗蛋白质、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的表观消化率显著高于粉碎玉米饲粮(酸性洗涤纤维除外)和糯玉米饲粮(P<0.05)。2)膨化玉米的消化能、代谢能和净能显著高于其他3种玉米(P<0.05),妊娠母猪对不同加工工艺玉米饲粮的总产热量和绝食产热量无显著差异(P<0.05)。3)妊娠母猪对粉碎玉米、压片玉米、膨化玉米和糯玉米的净能值分别为12.79、12.37、13.63、12.88 MJ/kg DM。结果提示,膨化工艺可以显著提高妊娠母猪饲粮中玉米的有效能值和养分表观消化率。

摘要：本研究旨在建立一种快速、准确且易于操作的猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)检测方法。首先以PCV2的ORF2基因作为靶基因,设计4条LAMP与5条CRISPR特异性引物,再分别优化获得LAMP反应体系和CRISPR检测体系中各成分最佳配比浓度,经过特异性、灵敏度、重复性以及符合性验证,最终建立了快速检测PCV2的LAMP-CRISPR/Cas12a方法。结果显示,该方法最小检测量接近1 copy质粒DNA,灵敏度远高于本实验室常用的PCR方法,且在相同条件下只有PCV2呈阳性结果,其他均呈现阴性,表明特异性良好。同时该方法具有良好的重复性,批内变异系数小于5%,批间变异系数小于10%,该方法与qPCR之间的符合率较高,可通过肉眼观察在蓝光下的反应产物判断结果。结果表明,建立的LAMP-CRISPR/Cas12a体系适用于PCV2的快速检测。

摘要：【目的】减少猪场人工测量猪只体尺的工作量,提高测量精度和工作效率。【方法】本研究提出基于关键点检测和多目标跟踪的猪只体尺自动估计方法,该方法使用Yolov8-Pose模型识别各猪只关键点和目标检测框,利用ByteTrack算法对猪群实时跟踪,引入感兴趣区域规避图像畸变,提高识别速度,同时设计姿态和异常检测过滤算法减少因运动模糊、姿态不正等因素造成的误差。【结果】5个猪栏中24头猪只体长、肩宽、臀宽的平均绝对误差均小于3 cm,平均绝对百分比误差分别维持在4%、6%和7%以内。数据处理速度提升为19.3帧/s。【结论】本研究提出的基于关键点检测和多目标跟踪的猪只体尺估计方法为猪场生产场景提供了一个轻量化、易部署的自动体尺测量解决方案。

摘要：【目的】针对猪舍环境控制中场景复杂、多参数控制难以及系统呈现耦合特性的问题,基于无模型自适应控制(Model-free adaptive control,MFAC)算法,设计了适用于猪舍的多参数无模型自适应控制(Multi-parameter model-free adaptive control,MMFAC)算法。【方法】通过将MFAC算法与用于尺度伸缩变换的权值矩阵相融合,设计MMFAC算法。该算法利用紧格式动态线性化(Compact form dynamic linearization,CFDL)技术和最优化数学方法,进行伪雅可比矩阵(Pseudo-jacobian matrix,PJM)的参数辨识和调控装置的控制量计算。【结果】仿真试验结果表明,MMFAC算法具备对多参数进行自适应控制的能力,并可通过调整权重矩阵来降低关键参数的误差。真实猪舍环境控制试验结果表明,该算法可根据实时环境参数测量值计算风机控制量,并根据该控制量驱动风机,以保持环境参数在舒适区间范围内的稳定控制。【结论】MMFAC算法展现出良好的多参数自适应控制能力,能够适应复杂的猪舍环境,有效解决多参数控制难以及系统耦合的问题,在猪舍环境控制中具有较好的应用前景。

摘要：本研究旨在建立一种基于猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S基因便捷、高效和特异的由重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase-aid amplification,RAA)检测方法。通过基因组序列比对,选择TGEV S基因中特定片段为检测靶标,构建重组质粒pUC57-S,设计并筛选RAA引物和探针;建立RAA检测方法;评价该方法灵敏度、特异性和重复性;运用该方法检测腹泻临床样品,与荧光定量PCR方法比较检测结果的符合率。结果确定最佳引物对F2/R1和探针PF2;该方法在40℃恒温条件下,30 min即可完成反应;荧光型RAA法最低检出限可达1.34×10^(1)copies·μL^(-1);与猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、猪呼吸道冠状病毒等常见猪源病毒核酸无交叉反应;采用该方法检测107份临床样本,阳性率为5.61%(6/107),与荧光定量PCR法相比较,检测结果一致。本研究成功建立了一种灵敏、特异、可视化的RAA检测方法,可摆脱对昂贵设备、专业人员和检测技术的依赖,为临床检测TGEV提供良好的技术基础。

摘要：新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是引起新冠肺炎的病原体,其变异快、传播强,导致疫情广泛流行,以疫苗接种为主要防控措施。尽管已有大量新冠肽表位疫苗和黏膜型疫苗的研究,但靶向黏膜的肽表位疫苗和其功能评价的研究鲜有报道。本研究以IEDB数据库预测SARS-CoV-2结构蛋白M肽表位作为抗原靶点,设计含3050及1229信号肽和DCpep优化的MS-3S基因,插入MS2噬菌体衣壳蛋白中,通过PCR和无缝克隆技术构建表达质粒pSIP:MS-3S,转化到植物乳杆菌LP18中获得重组菌LP18:MS-3S。通过对诱导时间、诱导剂质量浓度、转速和初始pH值等表达条件进行优化及鼻内免疫实验,验证重组菌免疫效果。结果显示,获得出916 bp修饰和优化的目的基因MS-3S,并成功构建重组菌LP18:MS-3S,经Western blot、流式细胞术、免疫荧光等检测方法验证,获得重组蛋白表达的最佳条件:诱导时间为4 h,诱导肽质量浓度为100μg/L,培养基初始pH值为7.0,转速为100 r/min。通过ELISA试验验证,在小鼠的血清、肺泡灌洗液和粪便稀释液中,检测出抗肽表位的特异性抗体。本研究成功构建了1株表达新冠M蛋白肽表位抗原的重组菌,并且可诱导机体产生体液和黏膜免疫,为新冠黏膜免疫候选疫苗的研制奠定了基础。

摘要：非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起家猪和野猪的一种高死亡率的传染性疾病。ASFV具有庞大的基因组,其中非结构蛋白pD1133L被预测为其编码的6个解旋酶之一。本实验室应用免疫沉淀-质谱联用(immunoprecipitation-mass spectrometry,IP-MASS)技术筛选与pD1133L互作的宿主细胞蛋白,发现细胞波形蛋白(vimentin,VIM)为pD1133L互作的宿主蛋白之一,但尚不清楚宿主蛋白VIM对ASFV复制的影响。【目的】探究ASFV与VIM的相互调控作用,揭示VIM促进ASFV复制的机制。【方法】通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)试验验证pD1133L与VIM存在互作关系;外源过表达VIM蛋白以及设计并合成VIM的si RNA探究VIM对ASFV复制的影响;利用Western blotting以及荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)方法检测ASFV对VIM蛋白水平以及转录水平的影响;通过Western blotting、间接免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)探究巨噬细胞感染ASFV后VIM磷酸化水平变化以及亚细胞定位变化情况;CCK-8试剂盒检测VIM磷酸化抑制剂KN-93处理的最佳浓度,并利用Western blotting以及IFA检测KN-93对VIM磷酸化、亚细胞定位以及对ASFV复制影响。【结果】VIM过表达促进ASFV复制,敲低VIM的表达则抑制ASFV复制;ASFV感染抑制VIM蛋白水平以及转录水平表达,且呈时间依赖性;ASFV感染后VIM发生磷酸化修饰且发生亚细胞定位改变,从而促进ASFV复制。【结论】证实了ASFV与宿主蛋白VIM之间的相互调控作用;初步确定ASFV感染后VIM受到ASFV pD1133L调控,亚细胞定位发生重排向核周聚集从而促进ASFV复制的机制。

摘要：目的建立实验动物弓形虫TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,并对其进行初步应用。方法通过比对美国国家生物技术信息中心(NCBI)发表的弓形虫各毒株序列,选取其529 bp重复序列保守区域设计引物探针,建立弓形虫的荧光定量PCR方法。随后对方法的特异性和敏感性进行检验;取浓度为10^(6)~10^(2)copies/μL 10倍系列稀释的质粒标准品,每个浓度做3个平行,重复检测3次,计算组内和组间变异系数,评估方法的重复性和稳定性;用建立的荧光定量PCR方法及国标推荐的PCR方法检测14份犬组织样品和66份猪全血样品,以评估此方法在实际应用中的检测能力。结果建立的弓形虫荧光定量PCR方法在10^(8)~10^(1)copies/μL范围Ct值与质粒浓度呈线性关系,标准曲线Slope为-3.285,R^(2)值为1,扩增效率为10^(1).663%。可检测到的弓形虫最低浓度为10^(1)copies/μL;与其他14种实验猪常见病原不发生交叉反应;重复检测10^(6)~10^(2)copies/μL质粒标准品,组内变异系数小于1.21%,组间变异系数小于0.62%。用建立的弓形虫荧光定量PCR方法和国标PCR方法对14份犬组织样品和66份猪全血样品进行检测,结果显示,弓形虫荧光定量PCR方法和国标PCR方法检测的阳性率分别为10%(8/80)和7.5%(6/80),阳性符合率达到100%。结论建立的弓形虫荧光定量PCR方法可以有效地检测弓形虫,为实验动物弓形虫日常监测提供良好的方法。