摘要：2015年以来,寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)感染被报告和小头症之间存有关联,已有多个国家和地区报告ZIKV感染证据,我国持续面对ZIKV输入风险。为发展适用于现场的快速高效的ZIKV核酸检测方法,选取ZIKV NS1片段保守区设计特异性引物探针,经优化建立了多种功能蛋白介导的ZIKV RNA恒温快速扩增检测方法。利用所制备的ZIKV NS1片段体外转录RNA作为参考品,并与实时荧光定量RT-PCR检测结果进行比较。同时利用ZIKV细胞培养物中加入健康人血清制备的模拟临床标本进行初步验证。结果显示,建立的RNA恒温快速扩增检测方法可100%检出100拷贝/μL体外转录RNA,可在15 min以内判读,大大低于PCR的常规检测时间;用该方法检测其他相关病毒,无交叉反应。病毒滴度在(104~107 PFU/mL)之间的模拟临床病人标本可达到100%检出。本研究建立的ZIKV RNA恒温扩增快速检测方法快速、灵敏、特异,适用于ZIKV现场应急检测,为ZIKV的防控提供了重要的技术支撑。

摘要：建立可检测琉球病毒(Ryukyu virus,RYKV),索尔韦齐病毒(Solwezi virus,SOLV)以及苏里斯病毒(Souris virus,SOUV)等三种沙粒病毒的实时荧光定量RT-PCR检测方法。分析三种病毒流行病学分布特征,从国际公共数据库搜索下载基因组序列,进行比对分析,确定检测靶标,借助primer premier 6.0生物信息学软件,设计引物和探针,建立实时荧光定量RT-PCR检测方法,利用化学合成和体外转录方法制备模拟样本,比较评价三种方法的检测限、特异性、重复性特征。所建实时荧光定量RT-PCR检测方法均可有效扩增检测病毒RNA靶标,检测限分别为40拷贝/μL、7拷贝/μL和15拷贝/μL,检测汉城病毒、汉滩病毒、登革病毒Ⅰ~Ⅳ型分离株、发热伴血小板减少综合病毒及30份健康人血清样本无非特异性扩增,三种病毒相互间以及其他8种出血热相关沙粒病毒RNA间无交叉反应,重复性比较分析显示变异系数均在2%以内。本研究建立的检测RYKV、SOLV和SOUV三种沙粒病毒的实时荧光RT-PCR方法具备用于相关疑似感染者临床样本、宿主动物标本以及进出口物品的筛查检测的潜力,但因未经基于实际病毒感染样本的比较评价,检测结果的解释仍具有一定的局限性。

摘要：目的建立可检测杜贝病毒(dugbe virus,DUGV)、盖勒尤卜病毒(qalyub virus,QALV)和蒂亚福拉病毒(thiafora virus,TFAV)等三种内罗病毒基因组的实时荧光RT-PCR检测方法。方法收集、整理,比对、分析在公共数据库发布的三种病毒基因组S节段核苷酸序列,确定检测靶标,利用生物信息软件设计特异性引物、探针,优化检测程序,建立实时荧光定量RT-PCR检测方法,利用体外转录技术制备的模拟样本、其他病毒感染标本、病毒株和正常人血标本比较评价所建方法的检测限、特异性、重复性特征。结果所建实时荧光定量RT-PCR检测方法均可有效扩增检测病毒靶标RNA,检测限分别为160 copies/μL,20 copies/μL和10 copies/μL,检测科萨努尔森林病病毒、乙型流感病毒BV和BY型、甲型流感病毒H3N2、黄热病毒、乙型脑炎病毒、克里米亚-刚果出血热病毒和塔西那病毒样本无非特异性扩增,三种内罗病毒相互间无交叉反应,重复性分析显示变异系数均在2%以内。结论本研究建立的检测DUGV、QALV和TFAV的实时荧光RT-PCR方法,可用于相关临床样本、媒介、宿主动物标本以及进出口物品筛查检测。