摘要：目的构建靶向过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)基因的小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)载体,转染骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)后观察其对PPARγmRNA的抑制作用。方法根据siRNA设计原则,在PPARγmRNA序列中选择2个特异性靶序列(677-695和497-515)及同时设计1条无关对照序列；体外合成对应发卡样DNA片段,经退火后,将其定向克隆入siRNA载体pR- NAT-U6．2,将重组siRNA载体pRNAT-U6．2-PPARγ用脂质体包裹转染入MSCs后,采用RT-PCR检测PPARγ基因mR- NA表达水平的变化。结果得到阳性重组克隆pRNAT-U6．2-SPPARγ,经过PCR鉴定与测序,结果正确；RT-PCR检测转染MSCs显示,PPARγ基因的表达水平明显降低。结论成功构建靶向PPARγ基因的siRNA载体pRNAT- U6．2-SPPARγ,转染MSCs可以有效抑制PPARγmRNA的表达,这为预防酒精性股骨头坏死发生的研究奠定了可靠基础。

摘要：目的构建、鉴定靶向过氧化物酶体增殖子活化受体-γ（PPAR-γ）基因的siRNA腺病毒载体。方法遵循siRNA片段的设计原则，依据GenBank中PPAR吖基因（AF013266）的序列，设计3个特异性靶序列（36～54位、73～91位和404～422位）；体外合成对应发卡样DNA片段，经退火后，将其克隆入***载体，通过PCR和I-CeuI和PI-SceI酶切鉴定后，再亚克隆入pAdeno-X腺病毒载体。对插入序列进行DNA序列分析。结果发卡样siRNA单链DNA寡核苷酸退火后，电泳可见明亮靶条带；PCR扩增和酶切鉴定得到阳性克隆pSIREN-Shuttle—siPPAR-γ1、pSIREN-Shuttle—siPPARγ-2和pSIREN-Shuttle—siPPARγ-3。亚克隆重组腺病毒载体pAdeno—***^t-1、pAdeno—X-siPPARγ-2和pAdenc-X—siPPARγ-3，经测序鉴定证实插入DNA序列与设计完全一致。结论成功构建3个靶向PPARγ基因的siRNA重组腺病毒载体，为进一步的基因治疗研究奠定了实验基础。

摘要：目的:构建针对过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)基因的siRNA腺病毒载体。方法:依据siR-NA设计原则,在PPARγmRNA(AF013266)序列中设计2个特异性靶序列(36-54、73-91),体外合成对应发卡样DNAs,退火后先将其克隆入pSIREN-Shuttle载体,再亚克隆入pAdeno腺病毒载体,对插入序列进行DNA序列分析。结果:发卡样siRNA单链DNA寡核苷酸退火后,电泳可见明亮靶条带。连接退火寡核苷酸和pSIREN-Shuttle载体得到阳性克隆pSIREN-Shuttle-siPPARγ-36、pSIREN-Shuttle-siPPARγ-73。同源重组后得到亚克隆pAdeno-siPPARγ-36、pAdeno-siPPARγ-73,测序证实插入序列与设计序列完全一致。结论:成功构建2个靶向PPARγ基因的siRNA载体pAdeno-siPPARγ-36和pAdeno-siPPARγ-73。