摘要：目的：探究一种小分子量类弹性蛋白标签（elastin-like protein tag,ELP tag）——ELP30-tag在原核表达系统中的蛋白纯化能力。方法：人工合成ELP30-tag基因并将其构建于pET-28a（＋）载体,结合2种内含肽（intein1和intein2）基因和增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,eGFP）基因,构建4个含有不同元件序列的原核表达载体：pET-ELP30、pET-ELP30-eGFP、pET-ELP30-intein1-eGFP和pET-eGFP-intein2-ELP30;将表达载体转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导重组蛋白表达,并通过可逆相变循环（inverse transition cycling,ITC）纯化重组蛋白ELP30、ELP30-eGFP、ELP30-intein1-eGFP和eGFP-intein2-ELP30,随后通过调节溶液pH值或添加二硫苏糖醇（DL-Dithiothreitol,DTT）分别诱导intein1和intein2断裂,最后再经ITC分离获得纯eGFP。结果：利用设计的ELP30-tag成功纯化获得了重组蛋白ELP30、ELP30-eGFP和eGFP-intein2-ELP30;重组蛋白ELP30-intein1-eGFP和eGFP-intein2-ELP30中的内含肽可经诱导发生断裂而释放eGFP,但未能分离获得纯eGFP。由此为小分子量ELP-tag的运用和优化设计奠定了一定基础。

摘要：为解决人工饲料养蚕过程中饲料投料问题,根据家蚕养殖要求和人工饲料特点,模拟手工刀切动作,设计了一种人工饲料养蚕给料装置。该装置采用曲柄滑块、曲柄摇杆及单向传动机构,实现刀具往复切削和单向步进送料动作协同。对该装置的传动机构展开设计与分析,确定影响其工作性能的主要影响因素为饲料含水率、饲料块高度、输送带步进距离。建立虚拟样机并进行运动仿真,获得刀具位移和摇杆摆角曲线。以投料均匀度为评价指标,利用Box-Behnken试验方法,开展3因素3水平正交试验。结果表明,该装置优化参数组合为饲料含水率62%、饲料块高度40 mm、输送带步进距离6 mm,投料均匀度为90.7%。研究结果可为人工饲料养蚕给料设备的研发提供参考。