摘要：为建立一种快速、敏感检测牛巴贝斯虫的方法,本研究根据GenBank中登录的牛巴贝斯虫rap-1基因保守区设计2对特异性引物,经反应条件的优化,建立了牛巴贝斯虫套式PCR检测方法。结果显示,该方法可以特异地检测牛巴贝斯虫,而对双芽巴贝斯虫、牛环形泰勒虫和弓形虫的检测均为阴性;该方法的灵敏度可达1.3×10~1拷贝/μL,是牛巴贝斯虫荧光定量PCR检测试剂盒的10倍,是常规PCR的1 000倍。对50只扇头蜱和微小牛蜱DNA进行检测,套式PCR、牛巴贝斯虫荧光定量PCR检测试剂盒和常规PCR的阳性检出率分别为100.0%、72.0%和0。本实验建立的套式PCR检测方法适用于牛巴贝斯虫病的早期诊断和分子流行病学调查,为蜱传牛巴贝斯虫病的防控提供技术支持。

摘要：根据扇棘单睾吸虫核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列,应用Primer premier 5.0软件自行设计一对可同时应用于real-time PCR和常规PCR的特异引物,建立real-time PCR与常规PCR鉴定扇棘单睾吸虫的方法,评估其特异性及灵敏性。应用建立的方法鉴定犬猫内脏中收集的吸虫,并用测序进行验证,检验方法的准确性和实用性。结果表明,建立的两种方法均只能特异性扩增扇棘单睾吸虫目的片段,不与横川后殖吸虫、钩棘单睾吸虫、华支睾吸虫、瓦氏瓦特松吸虫、棘口属吸虫、背孔属吸虫、心形咽口吸虫、野牛平腹盘吸虫、东方次睾吸虫、卫氏并殖吸虫、异尖属线虫、宫脂属线虫发生交叉扩增;敏感性试验表明,real-time PCR和常规PCR检测扇棘单睾吸虫质粒的最低检测限分别为43拷贝和86拷贝。建立的realtime PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(R2=0.998)。鉴定来自犬猫的吸虫17条,结果显示两种方法均能准确鉴定出扇棘单睾吸虫。

摘要：为建立一种快速、敏感检测牛环形泰勒虫的方法,本研究根据GenBank中登录的牛环形泰勒虫Tams1基因序列,设计合成1对特异性引物,通过优化反应条件,建立了检测牛环形泰勒虫SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。研究结果显示,该方法可以特异地检测牛环形泰勒虫,而对牛巴贝斯虫、反刍动物艾立希体和弓形虫检测均为阴性;该方法的灵敏度可达到180拷贝/μL,比常规PCR敏感10倍;组内和组间变异系数均小于1.0%。对15份临床血液样品和20只璃眼蜱进行检测,SYBR Green I荧光定量PCR和常规PCR的阳性检出率分别为42.86%和28.57%。本研究建立的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法具有特异性强、敏感性高的特点,可准确、高效检测牛环形泰勒虫,为牛环形泰勒虫病防控提供技术支持。

摘要：为探讨来自南非不同蜱种的系统进化关系,建立南非截获蜱虫的套式PCR鉴定方法。根据GenBank中蜱虫的18SrRNA基因序列,设计2对特异性引物,通过优化条件建立蜱虫套式PCR鉴定方法。从南非进口生牛皮上截获寄生蜱,经过形态学初步鉴定后,应用所建立的套式PCR扩增获得10种南非蜱虫(T1-T10)的18S rRNA基因序列,测序后与NCBI中已公布的蜱虫18S rRNA基因序列进行同源性分析。应用MEGA5.0软件进行系统进化分析发现,T1、T2、T3、T4、T7、T8是花蜱属的亚种,T5和T6分别是牛蜱属的不同种或亚种;T9和T10是扇头蜱属的不同种或亚种。说明建立的套式PCR检测方法能够在传统形态学分类的基础上,准确鉴定不同形态的蜱种。

摘要：在分析现有运输车所用止推片统计过程控制(SPC)局限性的基础上,提出将专家系统理论引入到运输车所用止推片的质量控制中。分析了运输车所用止推片的检测和质量控制要求,论述了整体系统设计中SPC专家系统的结构、知识的获取和推理机的设计,构建了质量监测与诊断的整体框架,研制了止推片自动检测分选装置,实现了数据的自动采集、存储和分析,控制图的绘制以及异常报警和专家诊断分析等。系统的开发与应用表明,该方法很好地解决了运输车所用止推片的质量控制问题。

摘要：目的基于嘉兴市临床实验室现状设计适合此地区的肌酸激酶（CK）／乳酸脱氢酶（LDH）检测的标准化方案并实施，以减小检测结果的室问变异，保证检测结果的正确性及溯源性。方法基于临床检验结果溯源性要求，于2012年10月至2013年2月期间，在嘉兴市6家医院，以国家一级标准物质GBW09167、GBW09168以及新鲜血清作为样本在嘉兴33家医院的临床实验室进行正确度验证以及室内不精密度调查；筛取其中6家室内不精密度（CV）小于2％的实验室，以血清基质标准物质GBW（E）091361作为校准品，GBW（E）091360作为正确度质量控制品，比较实施标准化前后检测结果的差异。结果33家实验室中，31家实验室室内CV小于2％，肌酸激酶偏移为-7％～12％，乳酸脱氢酶偏移为-22％～15％。6家CV小于2％的实验室，标准化实施过程中，具统计意义的5家实验室血清样本检测结果如下：肌酸激酶室间变异由校准前的4．95％～6．55％降低到校准后的1．81％～2．33％，乳酸脱氢酶则由5．75％～11．68％降低到1．39％～1．80％；肌酸激酶的偏倚由校准前的-0．84％～6．23％降到-0．15％～2．44％；乳酸脱氢酶的偏倚由-10．18％-0．34％降低到校准后的-3．07％～0．58％。结论基于实验室全面质量管理，以统一的校准方案，统一的具有互通性的标准物质作为校准品，可降低不同实验室室问检测结果的差异，提高检测准确性。（中华检验医学杂志，2014．37：947-950）

摘要：目的:建立食品中脊髓灰质炎病毒Taqman-MGB探针实时荧光RT-PCR检测方法。方法:在脊髓灰质炎病毒基因组2A区设计引物和探针,对3种血清型脊髓灰质炎病毒进行单独和同时检测。通过参照分子建立标准曲线,对人工接种病毒的牡蛎、蓝莓、生菜和水食品样品进行检测。结果:建立的检测体系分别高度特异于相应血清型病毒检测,对3种血清型脊髓灰质炎病毒进行单独和同时检测的下限均为2拷贝参照分子DNA。基于参照分子建立的4条标准曲线具有很好线性关系(R2=0.999)和较高反应效率(1.01～1.04)。对4种食品样品的分析表明,建立的实时荧光RT-PCR方法可稳定检测到各添加浓度脊髓灰质炎病毒。结论:建立的Taqman-MGB探针实时荧光RT-PCR检测体系适于食品中脊髓灰质炎病毒的检测。

摘要：为了建立快速、灵敏、可靠的鉴别颚口线虫虫种的方法,根据GenBank中发表的棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫ITS-2序列,设计了3对特异引物,建立了这3种颚口线虫的单一PCR和多重PCR检测方法,并分别对单一PCR和多重PCR方法的特异性和敏感性进行了鉴定。结果显示单一PCR和多重PCR均能特异扩增出棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫,其片段大小分别为282、358、183 bp,单一PCR对棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫虫体DNA最小检出量分别为0.2、0.01、0.01 ng/μL。对宫脂线虫、异尖线虫、棘口吸虫以及迭宫绦虫均不能进行扩增。用建立的多重PCR方法对菲律宾、印度尼西亚、黑龙江颚口线虫等12条颚口线虫DNA模板进行扩增,经鉴定菲律宾与印度尼西亚的颚口线虫为棘颚口线虫,黑龙江的颚口线虫为日本颚口线虫。鉴定结果与原虫体样本的形态鉴定和测序分析结果一致。研究显示建立的多重PCR方法具有很强的特异性和较高的敏感性,可用于棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫虫种的鉴定和流行病学调查。

摘要：本研究以建立解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法为目的,选择三种超级细菌NDM-1基因(metallo-beta-lactamase 1 gene)为目的基因,设计并合成特异性引物,建立和优化了可快速检测该种基因的HDA检测方法。特异性和灵敏度检测结果表明:该方法对NDM-1基因检测具有特异性,最低检测限可达10fg/μL,灵敏度高于普通PCR。提示HDA是一种针对NDM-1的快速、灵敏、便捷的非PCR核酸扩增技术。

摘要：以副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus,VP）toxR基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了DPO-PCR快速检测VP的方法.结果显示,退火温度在49～69℃都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物仅与VP的扩增反应呈阳性,而与其他菌株无非特异性扩增反应,表明该方法特异性强;该方法的灵敏度为121 CFU/mL.利用该检测方法对采集的550份样品进行检测,共计检出19份VP阳性样品,与行标法（SN/T 1870-2007）检测结果一致,实用性良好.该DPO-PCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性.