摘要：目的探索建立一种快速的、简单的检测金黄葡萄球菌的环介导等温基因扩增方法（loop—mediated isothermal amplification，LAMP）。方法针对金黄葡萄球菌clfA基因保守序列，根据LAMP方法的原理，设计LAMP检测反应体系和程序，对方法的特异性、灵敏度、重复性及初始拷贝数的对数值与反应时间（荧光信号值为1×10^4时对应的时间）之间的线性关系进行评估。结果使用LAMP方法可以在0．5h内获得检测结果，LAMP检测技术的灵敏度高出经典PCR技术10倍以上，与其他相关致病菌无交叉反应，平均试验间变异系数小于5％，反应时间与模板浓度有良好的线性关系（r^2=0．9501），LAMP法检测临床样本中金黄葡萄球菌的灵敏度为100％，特异度为94．4％，符合性为96．6％。结论该方法快速、灵敏、特异、操作简单、设备要求低的特点适合基层医疗卫生机构和现场查验机构的广泛应用。

摘要：目的建立志贺菌环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。方法针对志贺菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)特征性保守序列设计1套4条引物,应用LAMP技术对21株志贺菌和非志贺菌进行特异性检测以确定其特异性;使用LAMP和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对ipaH基因重组质粒倍比稀释液进行检测以确定其灵敏度;使用重组质粒计算其初始拷贝数与反应时间之间的线性关系以评估定量检测的可能性。结果荧光定量LAMP扩增曲线图显示,LAMP技术可以在1 h内获得结果;有较好的特异性,与其他17种食源性致病菌无交叉反应;LAMP检测技术的灵敏度高出经典PCR技术10倍以上,检测限达到200拷贝/μL;平均变异系数<5%;反应时间与模板初始浓度有良好的线性关系(R2=0.985 5)。结论志贺菌环介导等温扩增检测体系是一种快速、灵敏、特异的核酸筛查方法,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。

摘要：目的建立一种简便、快速和高灵敏度的恶性疟原虫的荧光定量环介导等温扩增检测方法。方法针对恶性疟原虫环子孢子蛋白(CSP)种属特异性基因保守区域8个位点设计3对引物,同时使用PCR法扩增恶性疟原虫219bp保守序列,经克隆后转化入工程菌株JM109感受态细胞中并提取重组质粒作为模板。以探索建立恶性疟原虫荧光定量环介导等温扩增检测技术,并对其试验重复性、灵敏度、特异性及适用性予以评估。结果在重组质粒浓度为1.06×104～109拷贝/反应的范围内,标准曲线循环阈值与模板浓度有良好线性关系(相关系数0.9995),CT值变异系数为6.29%,无非特异性扩增,初步临床试验结果表明,试验的灵敏度为90.00%,特异度为93.33%,准确性为91.67%,试验可在30min内完成。结论荧光定量环介导等温扩增技术检测恶性疟原虫简便、快速、敏感,具有广阔的应用前景。