摘要：目的建立一种快速、特异、灵敏、准确定量的单核细胞增生（单增）李斯特菌（Listeria monocytogenes）与志贺菌（Shigella）同步检测方法。方法分别根据单增李斯特菌溶血素O基因hly与志贺菌侵袭性质粒抗原H基因ipaH设计合成引物和探针。构建重组质粒pGEM—T—hly与pGEM—T—ipaH，并以EcoRⅠ单酶切使环状重组质粒线性化作为标准品。优化反应体系，分析特异性。双重荧光定量PCR对人工污染的脱脂灭菌乳进行检测。结果成功构建了重组质粒标准品，并运用5’、3’端分别标记FAM、TAMRA的hly基因探针和5’、3’端分别标记HEX、TAMRA的ipaH基因探针成功建立了单增李斯特菌与志贺菌同步荧光定量PCR检测方法。结论建立的方法有较强的特异性，线性范围好（10^5～10^1 copies／ul，R^2≥0．998），灵敏度为10copies／PCR，同步检测人工污染脱脂灭菌乳的灵敏度为10^2CFU／ml。

摘要：[目的]黑白轮枝菌(Verticillium albo-atrum)能够危害苜蓿等多种作物,是我国重要的检疫性病原真菌。我们基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),建立基于颜色判定的简单、快速和灵敏的黑白轮枝菌检测方法。[方法]基于LAMP技术,通过比对分析黑白轮枝菌与其相似种不同靶标序列间的差异,选取Tub(β-tublin,编码β-微管蛋白)基因作为靶标基因,设计并筛选了4条特异性强、灵敏度高的LAMP引物和1条环引物,在此基础上建立了检测黑白轮枝菌的LAMP体系,并进行特异性、灵敏度试验及田间发病组织的检测。该方法在62℃等温条件下进行核酸扩增反应70 min,扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝),反应后根据染料颜色变化判定扩增结果。[结果]特异性试验中,仅黑白轮枝菌菌株DNA扩增后呈天蓝色的阳性反应,而在其他真菌的供试菌株中均呈紫色的阴性反应。该方法的最低检测限为1 pg·μL^(-1)。Tub-LAMP技术能够检测出发病苜蓿植物组织中的目标菌,在采自新疆的7份疑似样本中检测到3份阳性。在土壤中人工添加孢子的试验中,Tub-LAMP技术能够从每0.25 g土壤含有10个孢子和每10 g苜蓿种子含有50个孢子中检测出该病菌。[结论]该方法的建立为黑白轮枝菌的检疫及其所致病害的诊断提供了新的技术。

摘要：在针对我国松脂行业生产实际和现状调查分析的基础上,结合松脂掺杂评估方法国家标准的研究与制定任务,设计和研制了一种在松脂生产、收购过程中能有效进行快速评估松脂含量的测定装置,并应用该装置完成了松脂含量快速评估模型的建模工作。为适应我国主要松脂产地和采脂季节的气候特点,分别建立了在25和30℃气温条件下可正常使用的松脂质量分数(%)与松脂液体积(m L)之间的定量评估模型,其数学方程式分别为:y_(25)=4.248x-216.3和y_(30)=4.211x-215.3。应用所得的松脂含量简单快速评估模型及测定方法,制定了国家标准《松脂掺杂评估方法》,为规范松脂行业生产秩序、打击假冒伪劣产品和现场评判松脂品质等提供了技术支撑。

摘要：针对倾斜圆面的空间几何特征,提出将三维激光扫描技术与虚拟环境引导定位结合的快速圆面直径测量系统。该系统通过圆面边缘端点来约束移动激光扫描仪的扫描视角与深度,并在虚拟环境下实时跟随扫描仪轨迹构建虚拟测量基准面,进而参考已标识的端点与基准面相对位移变化,来逐步规划扫描仪的轴向运动路径,以此实现边缘轮廓的自动高质量采样;依据高度特征变化识别定位圆面边缘端点,并结合空间投影和最小二乘原理拟合出圆面直径。为验证系统的精度和可靠性,对处于不同倾斜状态的圆台工件(55±5mm)进行直径检测。结果显示,系统可在3s内完成直径测量,检测分辨率为5μm、检测精度为20μm。实际运行结果表明,该设计系统具有高自动性和高效性,能很好满足在线生产中对倾斜圆面直径的检测要求。

摘要：为了建立同步检测奶牛布鲁菌、鹦鹉热衣原体和贝纳氏柯克斯氏体感染的多重PCR方法,根据GenBank上具有属间特异性的布鲁菌.Bp26基因、鹦鹉热衣原体23S rRNA基因和贝纳氏柯克斯氏体IS1111a基因,利用Primer premier 5.0软件各设计1对特异性引物。通过优化PCR反应体系和扩增条件,建立了能够同时检测奶牛布鲁菌、鹦鹉热衣原体和贝纳氏柯克斯氏体的多重PCR方法。该方法具有较好的特异性和可重复性,对3种基因单重PCR检测敏感性均达到3.1×10~2拷贝·反应^-1,对3种病原基因同步检测的敏感性能达到3.1×10~3拷贝·反应^-1。利用该方法对采自不同流产牛的抗凝全血、血清、流产胎儿及奶液等172份临床样品进行检测,检测到布鲁菌感染阳性样品53份,鹦鹉热衣原体感染阳性样品2份,贝纳氏柯克斯氏体感染阳性样品10份,且检测到布鲁菌和鹦鹉衣原体混合感染阳性样品2份,布鲁菌和贝纳氏柯克斯氏体混合感染阳性样品2份,尚未检测到3种病原混合感染的阳性样品。结果表明,建立的多重PCR方法可以用来对奶牛布鲁菌、鹦鹉热衣原体和贝纳氏柯克斯氏体进行同步、快速、灵敏的检测。

摘要：验证不同浓度黄色葡萄球菌DNA与特殊设计的分子信标探针杂交,观察荧光强度的变化,并验证该探针对于金黄色葡萄球菌DNA的特异性。利用特殊ATMND染料特异性嵌入缺失DNA位点的独特分子信标设计,并巧妙利用了能与DNA茎环结构杂交互补金黄色葡萄球菌特异DNA序列,导致茎环结构构相改变,而使ATMND染料离开缺失位点被重新激发荧光。将不同浓度黄色葡萄球菌DNA与分子信标探针杂交,观察荧光强度的变化,并选择标准菌株DNA对该探针进行特异性验证。证实了这种探针能够特异性的选择杂交金黄色葡萄球菌目标序列,随着金黄色葡萄球菌DNA浓度的增强,荧光信号也随之增强,与其它沙门氏菌、大肠杆菌、阪崎肠杆菌、单核细胞增生李斯特菌和铜绿假单胞菌DNA相比,具有更为明显的荧光恢复功能。荧光信号随着金黄色葡萄球菌DNA浓度的增高而增强,该探针在金黄色葡萄球菌DNA的识别上具有一定的特异性。

摘要：为建立一种快速、敏感检测迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）的方法,本研究根据***的促旋酶B亚单位基因（gyr B）保守区设计特异性引物和Taq Man探针,并优化检测反应条件,建立了***的Taq Man实时荧光PCR检测方法。结果显示,该方法仅对***的靶基因扩增呈阳性,而对创伤弧菌、福氏志贺氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、单核增生性李斯特菌、肠炎沙门菌、溶藻弧菌、阪崎肠杆菌、大肠杆菌O157、温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、霍乱弧菌等相关致病菌检测结果均为阴性,特异性良好;该方法对***检测的灵敏度为20 CFU/m L;重复性试验表明,该方法的变异系数在0.95%~2.44%之间,具有良好的重复性。本研究结果表明,建立的*** Taq Man实时荧光PCR方法灵敏、快速、特异性强、重复性好,适用于***检疫、疫情监测及流行病学调查。

摘要：采用实时荧光PCR技术建立了瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)的检测方法。根据瓜炭疽病菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因和谷氨酰胺合成酶(GS)基因序列,设计了该病菌特异性引物和TaqMan探针,并对所设计的引物和探针的反应条件进行了优化。采用本试验建立的实时荧光PCR方法对瓜上的其他菌株及近似菌株进行检测,可将瓜炭疽病菌与其他病原菌区分开。灵敏度试验表明,25μL体系中只要有39.6pg的核酸量就可以被检测到,检测灵敏度达到1.584pg/μL,比普通PCR检测灵敏度高100倍。同时对田间采集的病株和未知样品进行的检测证明了引物和TaqMan探针的特异性。

摘要：为建立鱼类传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的快速检测方法,根据IHNV的G基因保守序列设计特异性引物,建立了基于重组酶聚合酶扩增(RPA)的IHNV检测方法。该方法在30℃20min即可完成,对IHNV具有良好的特异性和敏感性,最低检出限为156ng/mL;用建立的RPA和RT-PCR对实验室保存的50份样品进行检测,结果显示,RPA的阳性检出率为14.00%,RT-PCR的阳性检出率为12.00%,说明RPA比RT-PCR具有更高的灵敏度。建立的RPA方法为IHNV的实验室检测提供了更多选择。

摘要：分析确定追尾事故中碰撞相容性的影响因素,对某商用货车的后防护装置进行碰撞性能仿真分析,通过TOSCA拓扑优化软件设计新型后下部防护装置。通过CAE仿真分析和实车试验表明,改进后的后下部防护装置满足GB 11567.2-2001的动态试验要求,其阻挡及吸能功能有显著提高。