摘要：目的:建立一种快速、特异、灵敏的幽门螺杆菌检测方法,并对方法进行评价,为快速、准确、有效检测幽门螺杆菌方法的建立提供依据。方法:以尿素酶基因序列为靶位点,用Primer Express 3.0软件设计引物及探针,经Blast软件对相似序列搜索后,筛选出一套最优与常见致病菌无交叉反应的引物;分别用食品中常见致病菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、沙门菌和空肠弯曲菌DNA进行特异性实验;将计数过的幽门螺杆菌菌悬液与牛奶样品混合液,梯度稀释后分别提取DNA进行荧光PCR扩增,确定检测方法的灵敏度;对人工污染幽门螺杆菌的生奶及生肉样品进行检测验证方法的可行性。结果:利用尿素酶基因设计的引物及探针仅对幽门螺杆菌有扩增曲线,而其他对照以及阴性对照均未有明显扩增曲线;能够对生奶及生肉中污染的幽门螺杆菌进行有效扩增;设计的引物对幽门螺杆菌的检测敏感性可达到***-1,检测可以在4d内完成。结论:荧光PCR方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测食品中污染的幽门螺杆菌。

摘要：柑桔溃疡病是由柑桔溃疡病菌 Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac)引起的重要的国际国内检疫性病害. 柑桔溃疡病菌属黄单胞菌属, 由于该属的种类及变种繁多, 对Xac的生化鉴定十分繁杂和困难. 目前, 国内外已有针对Xac的PCR和实时荧光PCR检测技术的研究报道, Coletta-Filho等 [1] 设计了常规PCR检测Xac的特异性引物, 殷幼平等 [2] 采用实时荧光PCR法进行了Xac的检测与应用研究. 有关PCR结合变性高效液相色谱技术(Polymerase chain reaction-denatured high performance liquid chromatography, PCR-DHPLC)检测Xac的技术尚未见报道. 作者采用PCR-DHPLC和双重PCR-DHPLC技术对Xac进行了检测和鉴定

摘要：烟草环斑病毒(Tobacco ringspotvirus,TRSV)是我国公布的二类检疫危险性有害生物,对农业生产危害较大。受该病毒侵染的一些寄主植物出现隐症,并伴随病毒浓度降低,给检测工作造成困难。根据TRSV外壳蛋白基因序列设计合成了一对引物及一条MGB探针,优化了反应条件,建立了TRSV实时荧光RT-PCR检测方法。该方法与常规的DAS-ELISA方法和RT-PCR方法相比,灵敏度分别提高了200倍和4倍,并且对不同寄主上的TRSV均有较好的检测效果。

摘要：伪狂犬病病毒(PRV)是严重影响养猪业发展的重要病毒,病毒粒子具有较强的抵抗力.SYBR Green是结合于双链DNA 的荧光染料,可在定量PCR反应时与双链PCR产物结合放出荧光信号,被仪器系统实时监控并检测.目前SYBR Green 荧光定量PCR方法在遗传性疾病的诊断等方面有重要的应用价值[2～7].本研究根据编码PRV最保守的基因之一的gB基因和PRV的主要毒力基因,即标志性疫苗缺失的gE基因[1]核酸序列设计引物,以含有gE基因的重组质粒ppgE[8]作外部参照,建立了gB和gE SYBR Green PCR方法,研究了该方法的灵敏度、特异性以及重复性,现将结果报告如下.

摘要：根据虎线粒体细胞色素b核苷酸保守序列设计引物和探针,建立了一种快速鉴定虎制品的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,5.0×105～5.0×101拷贝/μL范围内定量PCR均有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为50拷贝/μL。对豹、狮子、猫等7种非虎哺乳动物DNA样本的检测结果均为阴性。本研究建立的实时荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性和重复性好、方便经济的特性,在虎制品的检测与鉴定中具有良好的应用前景。

摘要：根据黄瓜绿斑驳花叶病毒运动蛋白基因序列,设计并合成了特异性PCR检测引物,建立该病毒的快速检测方法。该方法可以从带毒叶片中扩增到约591 bp的片段,而TMV属其他9种病毒均无特异性扩增。本方法也适用于带毒种子的检测,具有准确、灵敏及时效性强等特点,为进出境植物检疫和农业安全生产提供可靠的技术支持。

摘要：在针对我国松脂行业生产实际和现状调查分析的基础上,结合松脂掺杂评估方法国家标准的研究与制定任务,设计和研制了一种在松脂生产、收购过程中能有效进行快速评估松脂含量的测定装置,并应用该装置完成了松脂含量快速评估模型的建模工作。为适应我国主要松脂产地和采脂季节的气候特点,分别建立了在25和30℃气温条件下可正常使用的松脂质量分数(%)与松脂液体积(m L)之间的定量评估模型,其数学方程式分别为:y_(25)=4.248x-216.3和y_(30)=4.211x-215.3。应用所得的松脂含量简单快速评估模型及测定方法,制定了国家标准《松脂掺杂评估方法》,为规范松脂行业生产秩序、打击假冒伪劣产品和现场评判松脂品质等提供了技术支撑。

摘要：建立了柑橘溃疡病菌的双重PCR检测方法.根据柑橘溃疡病菌的基因片段OPM-12SCAR fragment(AF312370),设计特异性PCR检测引物,并结合rpf基因设计的引物对柑橘溃疡病菌和其近缘菌株、植物原性细菌的DNA进行了双重PCR检测方法的研究.该方法特异性强,菌液浓度检测灵敏度达到102CFU/mL,能够满足快速、准确诊断柑橘溃疡病菌的要求.

摘要：匍匐翦股颖(Agrostis stolonifera)和细弱翦股颖(***)是优良的牧草和草坪草。寄生于翦股颖上的腥黑粉菌共有3种,即小麦网腥黑穗菌(Tilletia caries,TCT)、翦股颖腥黑穗菌(***)和苍白腥黑粉菌(***)。在形态、自发荧光和萌发生理3方面比较研究的基础上,选取冬孢子形态非常相似的2种腥黑粉菌TCT和***为研究对象,依据序列特点设计4套引物,成功建立了TCT和***菌丝基因组DNA的特异双重PCR检测方法和冬孢子的特异套式双重PCR检测方法。

摘要：建立用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测食品中荧光假单胞菌的方法。分别针对16～23S rRNA基因间隔区序列、gyrB基因以及通过生物信息学方法发掘到的4个种特异性基因设计6对检测引物,通过初步特异性实验,筛选出一对种特异性最佳的引物。最终建立以gyrB基因为检测靶点的PCR扩增体系,并对体系进行系统评价。结果表明:该方法可特异检测荧光假单胞菌的存在,纯DNA检测灵敏度为14.9fg/μL(2～3拷贝/μL),纯培养物检测灵敏度为2.8×102CFU/mL。豆奶样品经15h充分增菌可提高检测灵敏度至0.28CFU/25g。