摘要：对苏云金芽孢杆菌C0 0 2菌株cry2Ab基因阳性克隆pHT3 1 5 2Ab进行亚克隆和序列测定 ,在CenBank注册后经国际Bt杀虫蛋白基因委员会正式命名为cry2Ab3。序列分析表明该基因含有芽孢杆菌特异的RBS序列 ,但没有功能性启动子 ,为沉默基因。根据大肠杆菌T7表达载体pET 2 1b克隆位点和cry2Ab3开放阅读框架 (ORF)两端序列 ,设计合成一对特异引物L2ab5和L2ab3 ,高保真PCR扩增获得cry2Ab3完整ORF ,经酶切、连接构建了重组表达质粒pET 2Ab3。表达质粒导入大肠杆菌BL2 1 (DE3 ) ,IPTG诱导后 ,SDS PAGE电泳证实了cry2Ab3的表达。生物测定显示诱导培养物对棉铃虫初孵幼虫和小菜蛾二龄幼虫具有杀虫活性 ,能明显抑制二化螟二龄幼虫生长 ,但对甜菜夜蛾和玉米螟没有明显活性。进一步提取Cry2Ab3蛋白 ,生测结果表明其对棉铃虫LC50 为 3 2 5 5 μg g。

摘要：以实时荧光PCR技术鉴定商业化种植的转基因玉米T14/T25品系。根据转基因玉米T14/T25转入的外源基因质粒图谱,设计转基因引物和探针进行PCR和实时荧光PCR检测,建立了转基因玉米品系鉴定的实时荧光PCR方法。实验结果表明,用TaqMan探针可检测到T14/T25产生的荧光信号,而对其他玉米品系则检测不到荧光信号,为转基因产品的鉴定检测提供了新方法。

摘要：成功建立了实时荧光PCR鉴定检测转基因玉米GA2 1品系的方法。该方法通过GA2 1玉米品系的OTP mEPSPS边界的 2 70bp和 1 33bp靶序列 ,设计品系特异性检测引物和探针 ,同时针对Pactin 1 mEPSPS边界的 430bp靶序列设计品系特异性检测引物 ,应用实时荧光PCR和PCR技术 ,特异性检测GA2 1玉米品系。结果表明 ,应用实时荧光PCR的TaqMan探针技术检测转基因作物边界序列 ,不仅可以达到品系鉴定的目的 ,而且该方法和常规PCR比特异性强 ,简便快速 ,同时实验采用完全闭管检测 ,又降低了污染机会 ,为转基因作物的品系鉴定检测提供了新方法。