摘要：利用实验设计(design of experiment,DoE)方法建立抗CD38单抗(monoclonal antibody,mAb)的抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)生物学活性检测方法。以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,Daudi细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BrightGlo^(TM)Lucifer‐ase Assay system)检测抗CD38单抗的ADCP生物学活性,并运用DoE方法进行实验参数优化。结果显示,抗CD38单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,方法经统计学实验设计对多个实验参数进行筛选和优化,确定抗体工作浓度为800~20.81 ng·mL^(-1),靶细胞和效应细胞的接种量分别为每孔7.5×10^(4)和2.5×10^(4)个,诱导时间为6 h。该方法具有良好的专属性;5个不同组回收率样本经3次检测,相对效价分别为(59.97±4.74)%、(82.44±5.15)%、(110.69±11.71)%、(129.23±5.22)%和(162.15±3.66)%;回收率在103%~120%,RSD均小于11%,线性检测范围为50%~150%。本研究利用DoE设计成功筛选、优化和建立基于报告基因的抗CD38单抗ADCP生物学活性测定方法,该方法具有良好的专属性、重复性和准确性,可作为抗CD38单抗ADCP生物学活性的评价方法。

摘要：目的利用报告基因法建立抗人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单抗的抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)生物学活性检测方法。方法以Jurkat/NFAT/CD32a-FcεRIγ转基因细胞系作为效应细胞,SKBR3细胞系为靶细胞,通过荧光素酶检测系统建立抗HER2单抗的ADCP测活方法,并运用实验设计(design of experiment,DOE)方法进行实验优化和方法学验证。结果该方法量效关系符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D,方法优化确定量效范围为400~3.959 ng·mL(-1),靶细胞接种密度为每孔1.5×10^(4)个,效靶比为5∶1,诱导时间为7 h。该方法具有良好的专属性;不同稀释组样本百分相对效价分别为(55.04±1.35)%、(78.10±6.33)%、(102.69±5.21)%、(133.32±2.58)%和(152.87±8.11)%;回收率在101%~110%,相对标准偏差(RSD)均小于10%。结论本研究成功建立抗HER2单抗ADCP生物学活性方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗HER2单抗ADCP生物学活性的评价方法。

摘要：中药滋味特征是中药开发及生产过程控制的质量属性。研究针对中药大品种小儿感冒口服液用药依从性亟待改进的问题,建立了电子舌传感器信号值与人真实感官评价得分值的关联模型,并采用统计试验设计关键技术,设计了小儿感冒口服液口感改进方案。基于上述关联模型优选得到最优口感配方:阿斯巴甜添加量为1~2 mg·mL^(-1);安赛蜜添加量为1.5~3 mg·mL^(-1);甜菊糖苷添加量为1~2 mg·mL^(-1)。进一步,通过人真实感官评价方法对最优口感配方进行验证,成功实现了小儿感冒口服液口感改进。该文以小儿感冒口服液为例,建立了基于电子舌与人真实感官关联的口感配方优化方法,为其他中药口服液体制剂口感改进提供重要参考。

摘要：目的:确定指标权重,优选景红颗粒提取工艺,为其工业化生产提供参考。方法:以芍药苷、红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量和出膏率为评价指标,采用层次分析法(AHP)、基于指标相关性的权重确定方法(CRITIC)及AHP-CRITIC混合加权法确定各指标权重系数,结合正交实验结果优化景红颗粒提取工艺参数。结果:芍药苷、红景天苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷分别在33. 14～198. 8,27. 26～163. 5,9. 265～55. 59μg·mL^(^(-1))内呈良好的线性关系,相关系数分别为0. 999 8,0. 999 7和0. 999 8; AHP-CRITIC混合加权法较AHP法和CRITIC法科学、合理、稳定,按照其确定的权重系数进行综合评价确定景红颗粒的最佳提取工艺条件为:加10倍量60%乙醇,提取2次,每次1. 5 h。结论:AHP-CRITIC混合加权法确定的权重系数客观、真实,可以反映处方配伍信息,优选后得到的工艺稳定可行,重复性好,可用于工业化生产。

摘要：目的:制备三七总皂苷脂质体微丸。方法:以包封率为考察指标,大豆磷脂-胆固醇、水相-有机相,药物质量浓度,脂类用量为考察因素,通过正交设计优选三七总皂苷脂质体冻干粉的处方工艺,采用塑制法制备三七总皂苷脂质体微丸。结果:三七总皂苷脂质体冻干粉的最佳处方工艺为大豆磷脂-胆固醇(6∶1),水相-有机相(1∶4),药物质量浓度20 g·L-1,磷脂用量150 mg。制备的脂质体微丸溶解后脂质体的平均粒径220.5 nm,Zeta电位-71.21 mV,1 h内溶出度达81.41%。结论:制备的三七总皂苷脂质体微丸体外溶出度较高,脂质体的粒径分布较好、质量稳定。

摘要：为了建立青蒿的SRAP最佳扩增体系,并筛选出SRAP多态性引物,本研究以青蒿叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg^2+、dNTP Mix、Taq DNA聚合酶、引物和DNA模板5种因素5个水平,对青蒿SRAP反应体系进行研究。结果表明,青蒿SRAP-PCR最佳反应体系为:引物0.6μmol/L、Mg^2+2.0 mmol/L、模板DNA 5.1 ng、Taq DNA聚合酶2.0 U、dNTPs 0.25 mmol/L,总体积为25μL。各因素对扩增反应均有不同影响,其中引物浓度的影响最大,dNTPs的影响最小。运用该体系对不同种质资源的青蒿进行验证,证明该体系稳定可靠,并在30个引物组合中筛选出了25对扩增条带清晰,多态性丰富的引物组合。这一结论为今后利用SRAP标记技术进行青蒿分子遗传学研究提供了科学依据。

摘要：阿尔茨海默病是一种以认知功能障碍和记忆减退为主要特征的神经退行性疾病,主要神经病理学表现包括细胞外淀粉样蛋白堆积形成的老年斑、细胞内tau蛋白磷酸化形成的神经原纤维缠结,以及神经元的坏死。淀粉样蛋白级联假说认为,β-淀粉样蛋白的过量生成和积累是阿尔茨海默病致病的始发因素和中心环节。以β-淀粉样蛋白为靶标的主动免疫和被动免疫方法可能是最有希望治疗阿尔茨海默病的策略之一。本综述主要关注以β-淀粉样蛋白为靶标的阿尔茨海默病主动和被动免疫治疗方法,分析目前临床前研究和临床试验结果,探讨该领域的应用前景和发展方向,提出新一代有效疫苗的设计策略。

摘要：通过Plackett-Burman联用Box-Behnken响应面法优化马来酸依那普利非洛地平双层片中非洛地平缓释层的处方。采用Plackett-Burman试验设计筛选对非洛地平累积释放率影响显著的处方因素,再用Box-Behnken响应面法对显著因素进一步优化,并进行二次多元回归拟合,预测最佳处方。结果表明羟丙甲纤维素、乳糖和聚氧乙烯40氢化蓖麻油对非洛地平的累积释放率影响显著,预测最优处方中乳糖用量为55 mg,羟丙甲纤维素(HPMC K4M)用量为96 mg,聚氧乙烯40氢化蓖麻油用量为1 mg,自制样品与参比制剂(Lexxel~?)中的非洛地平在多种介质中的释放曲线相似。该方法用于处方优化操作简便,预测性良好,试验结果符合要求。

摘要：目的设计并鉴定具有负调致病细胞毒性T细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)免疫应答功能的改造肽配体(al-tered peptide ligand,APL),为基于胰岛素自身抗原的I型糖尿病特异性免疫治疗奠定基础。方法利用InSilico技术模拟构建TCR-pMHC(TCR-HLA-A*0201-mInsB5-14)复合物三维结构,根据结构选择改造位点P6;通过保守/不保守单个氨基酸虚拟替换得到若干候选APL;通过自由能变化计算、相对亲和力检测、细胞因子分泌水平检测等体外功能实验,初步鉴定具有拮抗效应的APL。结果筛选得到的APL mInsB5-14H6F(H→F)与天然肽mInsB5-14空间结构相似,能与HLA-A*0201分子结合,其HLA-A*0201分子的相对亲和力与mInsB5-14相近。该APL作用下mInsB5-14刺激CD8+T细胞分泌IFN-γ的水平明显低于天然肽单独刺激下特异性CTL分泌IFN-γ的水平(P<0.05)。结论基于天然自身抗原表位mInsB5-14改造得到的mInsB5-14H6F是HLA-A*0201限制性的APL,该APL通过降低致病CTL特异性分泌IFN-γ的水平,可能诱导HLA-A*0201转基因NOD小鼠的自身耐受,从而为I型糖尿病治疗性疫苗的研发奠定了基础。

摘要：目的探讨视网膜静脉阻塞性黄斑水肿经药物治疗消退后的屈光度改变。设计回顾性病例系列。研究对象46例46眼视网膜静脉阻塞性黄斑水肿患者,初诊时无黄斑脱离组19眼及伴有黄斑脱离组27眼。方法患者经玻璃体腔注射抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)药物(康柏西普或雷珠单抗)或后筋膜下注射曲安奈德(triamcinolone,TA)后,黄斑水肿消退或近乎消退定义为终末随诊点。分析两组基线与终末随诊的等效球镜度(spherical equivalent refraction,SE)差异。主要指标SE。结果基线不伴有黄斑脱离组,基线时SE(0.38±1.71)D,终末随诊点SE(0.32±1.68)D,SE差值绝对值平均值(0.31±0.32)D,SE改变无统计学意义(t=0.577,P=0.571)。基线伴有黄斑脱离组,基线时SE(0.79±1.25)D,终末随诊点SE(0.26±1.15)D,SE差值绝对值平均值(0.88±0.81)D,SE改变有统计学意义(t=2.541,P=0.017)。结论对于不伴有黄斑脱离的视网膜静脉阻塞性黄斑水肿患者不必延迟屈光矫正。