摘要：Ribozyme是一类具有生物催化功能的RNA,它能定点切割RNA靶分子,从而达到有效地阻断基因表达的目的。本文依“锤头结构”原理设计合成了一个38个核苷酸的Ribozyme,能在体外定点切割甲型肝炎病毒的RNA片段(链长为123核苷酸残基,切削点对应于甲肝病毒RNA的559位)。测定了切割反应与温度、Ribozyme浓度和底物浓度的关系,其Km和kcat分别为0.63μmol/L和0.12min^(-1)。Mg^(2+)或Ca^(2+)均可作为参与该催化反应所必需的金属离子。

摘要：目的研究反义核酸的抗病毒作用。方法设计合成了针对鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）前Ｓ（ＰｒｅＳ）基因区第９５１９６８位核苷酸的硫代反义寡脱氧核苷酸（ＡＳＯＤＮ），以２０μｇ／ｇ体重／日剂量对３只腹腔感染ＤＨＢＶ５２毒株后，血清ＤＨＢｓＡｇ及ＤＨＢＶＤＮＡ阳性鸭连续静脉注射１０天，同时以等体积生理盐水注射另３只感染鸭作为对照。结果对照鸭注射生理盐水后，血清ＤＨＢｓＡｇ及ＤＨＢＶＤＮＡ阳性未见明显改变，肝组织ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交在３０与２３ｋｂ左右杂交信号明显。注射ＡＳＯＤＮ鸭在１０天后，２／３鸭血清ＤＨＢｓＡｇ及ＤＨＢＶＤＮＡ量显著降低，３／３鸭肝组织中３０ｋｂ左右的杂交信号显著减弱，２３ｋｂ左右未见杂交信号。结论说明该段ＡＳＯＤＮ在鸭体内能部分抑制ＤＨＢＶ的复制与抗原表达。

摘要：目前我国有1亿乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)携带者,其中大多数系幼龄感染HBV,处于免疫耐受状态,而不能有效地产生免疫应答以清除病毒。我们用鸭乙型肝炎病毒(DHBV)感染1日龄幼鸭,获得DHBV DNA及病毒表面抗原(DHBsAg)持续阳性的动物模型,类似HBV的免疫耐受状态。为探讨逆转免疫耐受状态的途径,本文设计了改变DHBsAg的提呈方式,用固相抗体-抗原(Solid matrix antibody-antigen,SMAA)复合物给耐受动物注射,结果部分耐受鸭DHBsAg转阴,并出现了抗-DHBs。

摘要：增殖细胞核抗原(PCNA)是DNA聚合酶δ的辅助蛋白,它是细胞染色体DNA复制所必需的。人工设计的ribozyme具有可特异地切割PCNA mRNA的性质,将此ribozyme的自修剪体内表达质粒导入HeLa细胞,从细胞总RNA中分离相应部分能在体外切割靶RNA片段,证明此表达质粒在细胞内能表达出有活性的ribozyme分子。与对照相比,导入ribo-zyme表达质粒的HeLa细胞进入S期的时间从12 h推迟到20 h,而突变ribozyme的对照表明反义抑制对细胞进入S期的影响较小(推迟到15 h)。证明该ribozyme能有效抑制He-La细胞DNA复制,同时亦证明PCNA对于细胞DNA复制及细胞周期进程的重要性。