摘要：目的构建lncRNA LINK-A的特异性RNAi慢病毒载体,并借此敲减人U251胶质瘤细胞株内的LINK-A,探究LINK-A对U251胶质瘤细胞增殖的影响。方法针对人LINK-A设计siRNA序列,构建RNAi慢病毒载体质粒并进行测序鉴定;利用pHelper 1.0、pHelper 2.0以及shRNAi 3种质粒分别转染293T细胞,筛选分离慢病毒并测定滴度;用PBS及构建好的慢病毒感染人U251胶质瘤细胞,实验分3组:空白组(PBS)、NC组(空载病毒)、LINK-A(-)组(LINK-A RNAi慢病毒),72 h后利用RT-PCR检测细胞中LINK-A的表达情况;取病毒感染成功后的U251胶质瘤细胞行平板克隆实验培养10 d,行CCK-8实验分别于24 h、48 h检测。结果RNAi慢病毒载体质粒测序结果与RNAi设计序列一致,提示LINK-A RNAi慢病毒载体构建成功,滴度为3×108 TU/mL;病毒感染U251胶质瘤细胞72h后,细胞生长状态良好,荧光持续稳定表达,LINK-A RNA相对表达量明显降低(P<0.05),表明病毒成功感染U251细胞;10 d后LINK-A(-)组细胞克隆形成数及形成率较空白组及NC组明显减少(P<0.05);与空白组及NC组相比,24 h后LINK-A(-)组OD值减少(P<0.05),72 h明显减少(P<0.05)。结论人LINK-A RNAi慢病毒构建成功;LINK-A表达降低可抑制U251胶质瘤细胞增殖。