摘要：目的研究卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)ORFK12基因在大肠杆菌的表达及表达的蛋白在普通人群中检测KSHV的感染情况。方法设计一对特异性引物,以BCBL-1细胞总DNA为模板,采用PCR方法扩增KSHV ORFK12基因。构建含目的基因的重组质粒命名为PQE-80L-K12和诱导蛋白表达。采用ELISA法和Western blot法筛查临床收集的血清标本中感染KSHV的情况。结果异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后的PQE-80L-K12重组菌经十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示有一个约10 ku的融合表达蛋白为ORFK12蛋白。采用ELISA法和Western blot法检测显示ORFK12蛋白能与KSHV阳性血清反应。结论 KSHV ORFK12基因在大肠杆菌中表达,表达的ORFK12蛋白在实验室检测感染KSHV有一定的辅助作用。

摘要：目的选用人巨细胞病毒(HCMV)抗原性强且亲水性较高片段构建融合抗原表达质粒,诱导其表达,纯化目的蛋白;并初步鉴定其免疫反应性。方法通过Protean软件分析了HCMV UL32、UL44、UL83序列,设计合理引物;各基因片段用Overlap方法连接,并引入BglⅡ、BamHⅠ酶切位点,使之可通过酶切与质粒pQE-80L连接。重组质粒转化入感受态BL21(DE3)菌株,经PCR、酶切鉴定目的基因后再诱导、表达、纯化,获得目的蛋白,采用Western blot法检测免疫反应性。结果诱导后的重组菌pQE80-L-UL32-UL44-UL83经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实蛋白表达在包涵体。纯化后获得大小约为52 ku的目的蛋白,采用Western blot法检测证实重组嵌合抗原能与HCMV阳性血清有反应。结论构建了重组嵌合抗原表达质粒,并诱导、表达、纯化获得目的蛋白。Western blot法鉴定嵌合抗原是HCMV特异性抗原且有免疫反应性。