摘要：目的:利用pEGFP质粒载体构建介导结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)表达的质粒.方法:分别设计3对有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至带有U6启动子的质粒载体pEGFP中,构建重组体,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析.结果:CTGF的sRNA片段被成功克隆到pEGFP质粒载体中,3个重组质粒shRNA编码序列与设计的片段完全一致,经酶切与测序证实构建成功.结论:成功构建了能表达CTGFshRNA的重组体,为下一步探索肝纤维化基因治疗的新途径打好基础.

摘要：目的:利用pEGFP质粒载体构建介导结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA表达的质粒,筛选有效的抑制序列后,研究其对HSC-T6中TGF-β1、CTGF及细胞外基质表达的影响。方法:1.分别设计3对针对CTGF的有小发夹结构的两条DNA序列及1对非特异对照序列,构建重组体成功后转染HSC-T6,24h后通过RT-PCR及Western blotting分析HSC-T6 CTGFmRNA及蛋白表达水平,筛选出有效抑制CTGF表达的序列。2.将已构建并筛选出有最高抑制效率的pEGFP-CTGFshRNA转染HSC-T6,培养24、48h后用RT-PCR和/或Westernblotting检测各组细胞中TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因的表达;放免法分析细胞上清液中Ⅲ型前胶原、IV型胶原、透明质酸和层黏连蛋白的含量。结果:将构建成功的3组pEGFP-CTGFshRNA转染肝星状细胞后,筛选出两组能高效抑制CTGF表达的序列;pEGFP-CTGFshRNA能明显抑制HSC-T6CTGF、Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白的表达,降低上清液中Ⅲ型前胶原、IV型胶原、透明质酸和层黏连蛋白的含量(P<0.01或P<0.05),而对TGF-β1的基因表达则无影响。结论:pEGFP-CTGFshRNA能高效抑制肝星状细胞中CTGF及细胞外基质的表达;CTG-FshRNA介导的RNA干扰有望对慢性肝病所致肝纤维化具有治疗潜力。

摘要：器官培养法保存角膜是角膜供体材料保存的主要方法之一,已在欧美国家许多眼库广泛应用[1-3].传统的保存方法是利用缝线连接角膜片和硅胶瓶盖,使角膜片悬垂在100 ml输液玻璃瓶中[4](图1).此法存在操作复杂、易污染及保存期间不能动态观察角膜质量等缺点.本研究采用新设计的角膜培养瓶,对角膜进行培养保存,取得了良好的效果。

摘要：目的构建靶向人多药耐药基因mdr1的microRNA(miRNA)干扰表达载体并进行鉴定。方法设计并合成4对编码mdr1 pre-miRNA的单链寡核苷酸,退火成双链后将其连接入miRNA干扰载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR,构建成重组质粒,酶切并测序鉴定其正确性。结果获得的重组质粒经酶切测序证实其插入片段大小与预期相符,序列完全正确。结论成功构建了4个靶向mdr1的miRNA干扰载体。

摘要：文章探讨Fisher合并P值法在两阶段自适应设计样本量调整中对Ⅰ型错误和检验效能的影响。利用蒙特-卡罗(Monte Carlo)法模拟不同样本量时的两阶段自适应设计过程,分别采用合并P值法和方差分析法分析最后数据并比较了二者对Ⅰ型错误、检验效能值的影响。

摘要：目的 :观察缺氧对培养的兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响及其可能的机制。方法 :采用析因实验设计 ,测定在正常或缺氧环境下 ,不同浓度的胎牛血清对培养的血管平滑肌细胞数量、[3 H]-TdR掺入量、MTT比色以及细胞cGMP水平的影响 ;透射电镜观察细胞超微结构。结果 :缺氧组平滑肌细胞的数量、[3 H]-TdR掺入量以及MTT比色显著多于常氧组 (P <0 .0 1) ;电镜下可见缺氧组较正常组细胞器发达 ,可见大量分泌胞 ,少量髓样变线粒体 ;缺氧组平滑肌细胞内的cGMP浓度明显高于常氧组。结论 :缺氧可促进血管平滑肌细胞DNA合成 ,促进细胞增殖 。

摘要：目的了解我国公立医院医生工作本身满意度的现状和人口学特征差异，并识别其内部决定因素，为改善公立医院管理体制提供科学依据。方法自行设计量表．按照多阶段分层抽样的方法，从全国4个省区抽取公立医院医生5677名．对所获样本数据进行实证分析。结果量表信度和效度良好；公立医院医生工作本身满意度的平均得分较高，表示“较满意”及以上的人群占样本总量的78．20％；在是否带教及不同级别医院、年龄、工作年限、职称、科室等变量上，差异有统计学意义；主要受专业兴趣、性格适合、医疗保险自主及工作胜任等因素的影响。结论注意不同医生群体问的差异，积极发挥主要决定因素的内在激励作用，提高公立医院医生对工作本身的满意程度，可有效改善医疗服务质量。

摘要：目的 :在已建立的较简便、敏感的对性连锁遗传病胎儿进行产前性别鉴定方法的基础上探讨高温循环全自动测序中几个因素对测序鉴定ZFY基因结果的影响。方法 :自行设计ZFY引物并建立了富集胎儿细胞结合巢式聚合酶链反应扩增男性特异性ZFY基因并进一步循环测序方法 ,计算机辅助设计的两对寡核苷酸引物位于Y染色体短臂的Ucdo 4 3保守区内 ;同时对DNA纯度、浓度和测序过程中水的质量对DNA自动测序结果的影响进行回顾性分析。结果 :实验表明利用孕妇外周血中微量胎儿细胞扩增男性特异性ZFY基因并进行高温循环全自动测序方法可行 ,结果可靠 ,在DNA纯度、浓度较低以及配制测序胶时所用纯水水质较差时 ,对测序曲线造成不同程度的影响 ,从而影响测序结果。结论 :提示该方法检测胎儿DNA是可行的 ,同时在DNA自动测序鉴定产物特异性时需使用高纯度高浓度的DNA和高质量的纯水 ,要想获得较长的测序片段 ,所用模板浓度不能太低。

摘要：目的　分析不同食物的食用频度或习惯与前列腺癌发生的相关关系。方法　设计饮食频度调查表 ,并采用以医院为基础的频数配比病例对照研究方法 ,对 186例经组织病理学或细胞学检查确诊的前列腺癌患者及按频数配比要求选配的2 36例对照者的饮食情况进行了调查。结果　主食大米、喝牛奶、猪肉、禽肉、蛋类、萝卜、青绿菜及豆类食品等与前列腺癌发病危险性的高低有统计学关联 (P <0 .0 5 ) ;将饮食因素同时引入模型进行多因素逐步非条件Logistic回归分析 ,显示喝牛奶、猪肉、蛋类的食用频度与前列腺癌危险性的增加有关 (P <0 .0 5 ) ;水果、青绿菜、豆类食品的食用频度则与前列腺癌危险性的降低有关联 (P <0 .0 5 ) ;未发现鱼类、动物肝脏、牛羊肉、喜食咸、喜食辛辣食物等食物的食用频度或习惯与前列腺癌有关。

摘要：目的设计制作一种种植手术外科模板,用以解决种植体植入位置、方向和深度准确性的问题。方法本研究借助螺旋CT和计算机图像处理软件,将拟种植区的牙槽骨和基骨的形态准确地转移到石膏模型断面上,然后在石膏模型"牙槽骨和基骨"的范围内设计种植体植入的位置、方向和深度并制作定位模板,应用该模板在1对上颌骨和下颌骨体外模型上共制备27个种植窝,并应用配对t检验比较骨骼和石膏模型种植体的定位情况。结果采用配对t检验比较骨骼和石膏模型种植体定位情况,数据均达到了理想的精确度。结论本模板定位、定向准确,可以最有效地利用植入区的骨量,从而扩大了种植修复的适应证,可有效地避免种植手术的失败。