摘要：miRNA是在许多生物过程中都起着至关重要作用的一类内源性非编码的小RNA,与癌症、肿瘤的发生有关。现发现很多miRNA在黑色素生成中都有重要的调控作用,但miR-146a是否对黑色素的生成具有影响未见报道。本研究发现miR-146a通过靶向抑制酪氨酸酶相关蛋白1(tyrosinase related protein 1,TYRP1)的表达而使黑色素生成降低。在小鼠黑色素细胞中分别转染miR-146a mimic和miR-146a抑制剂,通过qRT-PCR与Western印迹分析比较各实验组中TYRP1基因与酪氨酸家族相关基因酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)、酪氨酸酶相关蛋白2(tyrosinase related protein 2,TYRP2)的表达差异。双荧光报告实验验证TYRP1与miR-146a的靶向关系,双荧光酶活性结果显示,实验组相比对照组,荧光素酶活性明显降低,说明TYRP1是miR-146a的靶基因之一;qRT-PCR和Western印迹结果显示实验组TYR、TYRP1及TYRP2在mRNA水平和蛋白质水平表达均显著降低;紫外分光光度法检测黑色素含量,结果显示miR-146a mimic转染组黑色素含量明显下降,而抑制组的黑色素含量呈上升趋势。综上所述,miR-146a通过靶向抑制TYRP1基因的表达,而影响TYR家族成员的表达,调控黑色素的生物合成。

摘要：旨在探索非转移性黑色素瘤糖蛋白B(GPNMB)在不同毛色小鼠皮肤是否存在差异性表达,确定其对黑色素生成的影响。随机选取C57BL/6J品系出生12d的黑、棕、灰小鼠各3只,背部剪毛后,每只小鼠各取3块皮肤组织,采用免疫组织化学检测,结果表明,GPNMB在不同毛色小鼠皮肤的毛基质、内外毛根鞘、毛乳头等区域均有表达。利用Western blot和qRT-PCR方法分析,结果显示,灰色小鼠皮肤中GPNMB表达量最低。过表达GPNMB后,与空载体组相比,MC1R、β-catenin和SLC45A2相对表达量显著升高;用紫外线B(UVB)处理黑色素细胞,同时检测GPNMB和MC1R的表达量变化。结果表明,UVB对GPNMB和MC1R有影响,并且不同剂量UVB辐射对GPNMB影响不同。综上表明,GPNMB在不同毛色小鼠皮肤存在差异性表达,并且通过影响黑色素细胞色素的生成进而参与毛色的生成。

摘要：本实验旨在探究Nkx2—5基因在小鼠黑色素细胞中是否表达，同时通过生物信息学的方法预测其是否与调控黑色素生成的基因有相互作用。结果表明：转录因子Nkx2—5在小鼠黑色素细胞中表达，其编码的蛋白作为转录因子与下游基因作用的主要位点在144～196位氨基酸残基处，且其在黑色素生成中的关键基因MITF、TYR、TYRP1、TYRP2的启动子中都有作用位点，同时Nkx2—5蛋白与对神经嵴分化有重要影响的Hand1、Hand2存在相互作用，故可以推测转录因子Nkx2—5在黑色素细胞的黑色素生成中发挥着重要的作用，进而为从分子水平解释动物被毛白化的发病机理提供新的思路。

摘要：小眼畸形转录因子(MITF)不仅是黑色素细胞发育、增殖和存活的必要调节因子,而且对调节相关酶和黑素体蛋白表达来确保黑色素产生具有至关重要的作用。MITF下游色素相关基因在小鼠毛囊生长周期中的表达及相关性仍有待研究。HE染色结果表明不同毛囊时期的小鼠毛囊呈现典型的组织形态学结构;免疫组织化学显示,MITF、GPNMB、OA1、TYR、TYRP2在不同毛囊生长周期中的毛基质及内外毛根鞘均有不同程度的阳性表达。黑色素测定结果表明,在毛囊生长初期和中期,碱性可溶性总黑色素(ASM)、真黑素(EM)以及褐黑素(PM)相对含量高于毛囊生长末期。蛋白免疫印迹结果表明,MITF、GPNMB、OA1、TYR、TYRP2在毛囊生长初期和中期蛋白质相对水平明显高于毛囊生长末期。实时荧光定量PCR结果表明,MITF、GPNMB、OA1、TYR、TYRP2、PMEL在毛囊生长初期和中期,mRNA相对表达量显著高于毛囊生长末期。在不同毛囊生长周期小鼠皮肤的MITF下游色素相关基因表达存在显著差异,表明上述因子在维持黑色素细胞色素生成是不可或缺的因素。

摘要：非转移性黑色素瘤糖蛋白b(glycoprotein non-metastatic melanoma protein b,GPNMB)及其同系物色素细胞特异性黑色素细胞蛋白(pigment cell-specific melanocyte protein,PMEL)对黑素体的形成和黑色素的生成具有重要的作用,而GPNMB和PMEL的功能还有待深入研究。本文旨在探索GPNMB和PMEL在不同毛色绵羊皮肤表达是否存在差异,确定紫外线b(UVB)对GPNMB和PMEL是否有影响。免疫组织化学结果表明,GPNMB在不同毛色绵羊皮肤的毛基质、内外毛根鞘、毛乳头等区域均有表达。Western印迹和qRT-PCR结果显示,黑色绵羊皮肤中GPNMB和PMEL表达量,高于白色绵羊皮肤。黑色素细胞经UVB照射后,GPNMB和PMEL的表达增高。UVB照射剂量为100 m J/cm2时,黑色素细胞活性最高;单次UVB辐射后,GPNMB和PMEL mRNA表达量在72h达到顶峰,两者的曲线变化趋势大致相同。UVB连续辐射后,GPNMB mRNA表达量在4 d达到顶峰,而PMEL mRNA表达量虽然在3 d升高,但且对GPNMB作用更明显。上述结果提示,GPNMB和PMEL在不同毛色绵羊皮肤存在差异性表达。UVB单次或者连续照射,均促进GPNMB和PMEL表达,且对GPNMB影响更显著。GPNMB和PMEL可能通过影响黑素体的成熟进而调节黑色素的生成。

摘要：应用Andersen 6级空气生物采样器和AGI-30液体采样器于冬季分别采集晋北、晋中、晋南3个地区的9栋半封闭式羊舍内、外环境的空气样本,测定并分析气载真菌浓度、组成和粒径分布差异,鉴定优势菌属,并应用ERIC-PCR技术对羊场空气、饲料、粪土中真菌菌群多样性进行分析,以期为羊场真菌气溶胶危害评估和环境控制提供依据。结果显示,羊舍外环境气载真菌浓度由北向南逐渐升高,舍内气载真菌浓度为外环境的2.1~9.4倍,但南北差异不显著(P>0.05)。舍内、外真菌粒子均集中分布在采样器Ⅲ~Ⅴ级(1.1~4.7μm),所占比例为63.4%~81.5%,峰值均出现在Ⅳ级(2.1~3.3μm),由北向南逐渐增高;带菌粒子中值直径(CMD)由北向南逐渐减小;共鉴定出25个菌属,其中晋北优势菌属为Cladosporium、Trichophyton、Penicillium和Aspergillus,晋中优势菌属为Penicillium、Aspergillus和Alternaria,晋南优势菌属为Penicillium和Aspergillus;ERIC-PCR图谱分析结果显示,3个地区羊舍内、外环境中气载真菌、粪土中真菌菌群的Shannon-wiener指数均由北向南增大,Simpson优势度指数由北向南逐渐减小,饲草中则呈现相反规律;各舍内气载真菌种类与该舍内粪土相似度最高。

摘要：以5%绵羊血琼脂平板为采样基质,应用Andersen-6级空气微生物采样器,分别于春季、夏季、秋季和冬季采集牛场、羊场、牛运动场及养殖场外环境空气中的葡萄球菌,并分析葡萄球菌气溶胶的空气动力学特性,为反刍动物养殖场的环境控制提供依据。结果显示,牛、羊场环境气载葡萄球菌浓度随季节变化波动较大,夏、冬两季较高,春季最低;牛、羊场环境气载葡萄球菌浓度在养殖场下风向均随与场区距离增大而逐渐减小,下风向100 m处浓度均高于上风向10 m处。牛场和羊场环境葡萄球菌气溶胶颗粒在采样器Ⅲ~Ⅵ级占比为53.33%~84.73%,牛场葡萄球菌气溶胶颗粒的峰值分布在采样器第Ⅳ级,羊场峰值分布在采样器第Ⅰ级;羊场及外环境葡萄球菌气溶胶粒子中值直径(CMD)大于牛场,细菌粒径分布的离散度(GSD)值小于牛场。

摘要：叉头框转录蛋白家族成员Foxj2(Forkhead Box J2)基因在U87细胞和U251细胞中与上皮-钙黏蛋白(E-cadherin,CDH1)的表达呈正相关,且CDH1参与黑色素的生成具有介导表皮-黑色素单位完整性的作用。为了验证Foxj2基因参与调节羊驼黑素细胞中黑色素的生成,采用PCR方法验证Foxj2基因在羊驼皮肤内的表达情况;采用生物信息学方法分析Foxj2与黑色素生成相关基因TYR以及Foxj2与黑色素的生成相关蛋白的关联性;合成Foxj2的siRNA和空载siRNA,构建沉默siRNA的羊驼黑素细胞模型,观察记录细胞的转染情况;使用Real-time PCR方法检测各组羊驼黑素细胞中Foxj2基因和黑色素生成相关基因TYR的mRNA变化;通过Western blot的方法检测比较各组细胞中Foxj2与TYR的蛋白水平的变化;提纯各组细胞的3种黑色素(总黑素、真黑素、褐黑素),使用酶标仪测各组细胞中3种黑色素的OD值并比较变化。结果表明,羊驼黑素细胞中检测到Foxj2基因表达;生物信息学分析得出,Foxj2基因在细胞内涉及运输氨基酸调控、生长因子等一系列作用,在Foxj2中存在的Forkhead结构域可以与TYR基因启动子存在结合位点;Real-time PCR结果显示,和NC组相比,沉默组中Foxj2的mRNA表达量极显著降低24990%,TYR的表达量显著升高35%;Western blot结果显示,沉默组Foxj2的蛋白相对表达水平极显著降低25%,TYR的蛋白相对表达水平极显著升高25%。酶标仪波长分析显示,与NC组相比,沉默组的总黑素相对表达水平极显著升高88.0%,真黑素相对表达水平极显著升高21.8%,褐黑素相对表达水平极显著升高21.6%。抑制羊驼黑素细胞中Foxj2基因的转录可以升高羊驼黑素细胞中黑色素的生成,并且对黑色素生成的主要调控基因TYR起促进作用,说明Foxj2基因可能在羊驼黑素细胞中对于黑色素的生成起着调控作用。

摘要：为明确黄土高原东部旱塬适宜的播种方式及配套播量,于2017-2018年在闻喜旱地小麦试验基地开展大田试验,以探墒沟播和普通条播2种播种方式为主区,以75、150、225 kg/hm^2等3个播量为副区,研究旱地小麦籽粒产量、蛋白质组分及其含量、籽粒淀粉特性及加工品质对不同播种方式及播量的响应。结果表明,探墒沟播较普通条播提高了旱地小麦产量、蛋白质含量及其产量,提高了除醇溶蛋白外其他籽粒蛋白组分和可溶性糖、蔗糖、淀粉的含量,提高了籽粒淀粉黏度特性和加工品质;采用探墒沟播,籽粒产量、蛋白质含量及其产量以播量150 kg/hm^2最高,分别较其他播量高14.56%~16.49%、2.75%~22.45%和17.73%~42.62%;籽粒蛋白组分含量以播量150 kg/hm^2最高,其中,醇溶蛋白和谷蛋白达显著水平;蛋白质含量和可溶性蛋白含量均以播量150 kg/hm^2最高,且与其他播量间差异显著,以播量75 kg/hm^2最低;可溶性糖和蔗糖含量以播量150 kg/hm^2最高,以播量75 kg/hm^2最低,且不同播量间差异显著;淀粉含量以播量150 kg/hm^2最高,与播量225 kg/hm^2间无显著差异;面筋指数、湿面筋含量、形成时间、稳定时间和弱化度以播量150 kg/hm^2最高,不同处理间吸水率无明显变化。总之,与普通条播相比,探墒沟播在提高旱地小麦籽粒产量的同时,通过提高醇溶蛋白和谷蛋白含量来增加蛋白质含量,还通过优化面粉的面筋指数、湿面筋含量、形成时间、稳定时间和弱化度提升加工品质,且以播量150 kg/hm^2效果最好。