摘要：利用响应面法优化无花果干果中多酚和黄酮物质的提取工艺,并分析其体外抗氧化活性。在单因素实验基础上,根据Box-Behnken试验设计对提取条件(乙醇体积分数、超声温度、超声时间、料液比)进行分析与优化,从而考察其对多酚及黄酮提取量的影响并进一步研究无花果干果提取物的抗氧化活性。结果显示,最佳工艺参数为:乙醇体积分数60%,超声温度51℃,超声时间52 min,料液比1∶45(g/m L)。在此工艺条件下,多酚的提取量为(2.72±0.37)mg/g,总黄酮的提取量为(20.89±0.57)mg/g。与VC进行抗氧化活性比较发现,在多酚质量浓度(2.50 mg/g)相同条件下,无花果干果中多酚提取物的还原能力、清除羟自由基率(最高为95.54%)以及清除DPPH自由基率(最高为66.73%)均高于VC,清除超氧阴离子自由基率(最高为35.15%)低于VC。在黄酮质量浓度(10.60 mg/g)相同条件下,无花果干总果黄酮提取物各抗氧化指标均低于VC。另外,人工模拟胃肠液处理对无花果干果提取物抗氧化活性的影响实验发现,经人工胃液处理后,提取液的还原能力和羟自由基清除能力明显著升高,而DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除能力明显降低,经人工肠液处理后,相应的还原能力和超氧阴离子自由基清除能力明显升高,而DPPH和羟自由基清除能力明显下降。

摘要：α-L-鼠李糖苷酶是特异性切割末端含α-L-鼠李糖的天然化合物的一类糖苷水解酶,该酶在食品、医药、化学等行业都有广泛的应用。本研究旨在利用保守氨基酸基序结合PCR驱动的宏基因组学方法,从提取的健康人体粪便宏基因组DNA中获得新型细菌源α-L-鼠李糖苷酶基因。通过对CAZy数据库GH78家族中193条细菌源α-L-鼠李糖苷酶氨基酸序列进行多重序列比对,首次将α-L-鼠李糖苷酶家族分为3个亚家族,并确定了其中两个亚家族的两对保守氨基酸基序。基于保守基序氨基酸序列设计简并引物,PCR扩增保守基序间基因片段,对PCR产物克隆测序,结果获得12条α-L-鼠李糖苷酶基因片段,对其编码的氨基酸序列在Gen Bank数据库进行Blast序列比对,其中两条基因片段的氨基酸序列一致性仅为52%,一条为73%,其余9条在94%以上。根据Gen Bank数据库中序列一致性94%以上片段对应全长基因序列设计上下游引物,以人体粪便宏基因组DNA为模板,扩增获得3条α-L-鼠李糖苷酶全长基因,并将其克隆于载体p ET-28a,在*** BL21(DE3)内进行异源表达,目的蛋白多以包涵体形式存在于沉淀中,少量以可溶性形式存在于上清中。人体肠道细菌宏基因组为新型α-L-鼠李糖苷酶基因发现提供了潜在的基因资源库,基于保守氨基酸基序驱动的宏基因组学方法,从人体肠道以及环境宏基因组中直接获取新酶基因是可行的。