摘要：高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的E6基因在宫颈癌的发生中起关键作用,特异siRNA能有效抑制宫颈癌HeLa细胞内HPV18E6基因的表达,诱导肿瘤细胞凋亡.为进一步探讨HPV18E6-siRNA诱导HeLa细胞凋亡的分子机制,针对HPV18E6基因设计siRNA序列,利用人源U6启动子为模板,经PCR表达框架法体外扩增,转染宫颈癌HeLa细胞抑制HPV18E6基因表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡.对转染前后HeLa细胞总RNA样品进行荧光标记后,与Agilent Human1A寡核苷酸芯片杂交、扫描、数据分析及标准化处理,确定表达差异的基因并经荧光定量PCR对部分基因进行验证,结合PANTHER数据分析系统,将这些基因按照生物学功能进行归类,查阅GenBank数据库及相关文献,对其结果进行深入分析及讨论.在检测的18 716个基因和EST中,共筛出差异表达基因359个,其中307个基因表达上调,52个基因表达下调,主要包括细胞周期相关基因CCNG1、p21;凋亡相关基因CASP4、CASP6、IGFBP3、DFFA;泛素蛋白酶解途径相关基因E6-AP、UBE2C;角化细胞分化相关基因KRT4、KRT6E、KRT18;抑癌基因RECK、VHL等.研究结果表明,HPV18E6基因抑制引起的细胞凋亡效应主要是通过P53信号途径和泛素蛋白酶解信号途径调节细胞周期相关基因和凋亡相关基因的表达,从而抑制HeLa细胞增殖、促进细胞凋亡.同时,抑癌基因的激活,角化细胞分化和免疫相关基因的表达上调,都说明了E6抑制后肿瘤细胞恶性转化程度的下降.

摘要：目的制备戊型肝炎病毒诊断基因芯片并进行杂交验证。方法利用Oligo6.0软件针对戊型肝炎病毒诊断基因保守区域设计多对寡核苷酸探针,用芯片点样仪将其按照阵列设计打印在玻片上制备成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术,样品标记后进行杂交,进而在芯片扫描仪中对得到的探针数据进行分析并实验验证。结果芯片杂交后得到的探针荧光强度好,信噪比高,符合临床样品的基因亚型,RT-PCR验证后得到的电泳结果与芯片实验一致。结论实验设计并制备的寡核苷酸戊型肝炎病毒诊断芯片能用于戊肝的检测,为这项疾病的实验室诊断提供了一种快速平行的检测方法。

摘要：利用microRNA数据库,获取3种微RNAmir-181a、mir-124和mir-1的成熟序列信息.基于siRNAdu-plex在形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-inducedsilencingcomplex,RISC)过程中的不对称性的特点,初步设计了针对上述3种微RNA的microRNAduplex.采用生物学软件Oligo6.0分别评价其热动力学特性,并通过改变反义链3'端个别碱基序列使其满足热动力学的需求,从而确定最终的设计序列.结果显示,利用RISC形成过程的不对称性,结合生物学软件Oligo6.0的热动力学分析来设计miRNAduplex,是一种简便可行、准确有效的方法.

摘要：目的研制丙型肝炎病毒(HCV)基因分型寡核苷酸(Oligo)芯片并进行杂交验证。方法分别对BLAST检索所得的HCV 4个亚型型特异序列逐一进行分析,设计长度均一的60mer Oligo探针,用芯片点样仪将设计好的探针打印到玻片上制备成基因芯片。结果杂交结果显示,Oligo芯片检测HCV各基因亚型的效果较佳。结论制备的长链Oligo分型芯片检测敏感性、特异性均为满意,为下一步集合更多种肝炎病毒的联合检测与分型打下基础。