摘要：针对传统海上搜索研究中搜索平台与行为单一、缺乏协同的问题,建立多平台海上协同搜索路径优化模型,研究协同搜索与路径优化对策.在协同搜索策略方面,给出同构协同与异构协同搜索策略的定义,并设计不同规模的协同仿真场景;在路径优化策略方面,根据海上搜索平台的搜索特点,设计基于行为和基于智能算法的路径优化策略.在此基础上,对比研究不同规模的海上协同搜索策略与路径优化策略效果.结果表明:基于混合智能算法的路径优化效果普遍优于基于行为的搜索策略与单一算法,异构协同搜索策略能够充分发挥各平台优势、取长补短,取得了优于单平台和同构协同搜索的收益效果.

摘要：【目的】讨论带有资金约束和服务能力约束的高速公路快速充电站选址与定容规划问题。【方法】应用效用理论分析了电动汽车驾驶员在高速公路上选择充电站的策略,给出了充电设施不充足情况下的车流平衡状态迭代计算方法。建立了充电站选址定容问题的数学优化模型,并设计了一种改进遗传算法对问题进行求解。最后,提出了模拟实际高速公路网的随机网络生成方法,并通过实例对算法进行验证。【结果】测试结果表明:充电桩充电能力的提高可以有效增加高速路网上服务的车流量。【结论】改进后的遗传算法在求解不同规模网络下的选址与定容问题时,都能给出较为稳定的结果。随着网络规模扩大,算法求解的稳定性越好。

摘要：从深圳地区采集粉尘螨纯培养,提取总RNA,根据香港中文大学合成的尘螨基因序列并设计的引物,RT-PCR扩增出Der f4基因,克隆到pUC57载体后测序和进行生物信息学分析.将该目的基因克隆到pET-28a表达载体上得到重组质粒pET-28a-Der f4.用生物软件分析尘螨变应原Der f4序列.RT-PCR获得目的基因Der f4 cDNA全长为1 593 bp.推测编码蛋白由526个氨基酸组成,生物信息学分析表明,Der f4具有多种磷酸化位点,含有信号肽,为疏水性蛋白,包含淀粉酶抑制剂功能结构域.获得Der f4基因全长,其编码的细胞外疏水性蛋白可能具有淀粉酶抑制剂活性.

摘要：目的为了获得粉尘螨铁蛋白(ferritin)蛋白,并对该蛋白特征进行分析。方法根据铁蛋白基因已知序列,设计出相应的引物,提取粉尘螨总RNA,采用RT-PCR方法扩增出铁蛋白基因,PCR产物克隆入pET32a载体,构建的重组质粒pET32a-ferritin,经酶切和测序鉴定后,再转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其表达效果,用Ni+离子亲和层析柱纯化其重组蛋白。用生物信息学方法对粉尘螨铁蛋白的特征进行分析。结果成功克隆粉尘螨铁蛋白基因并构建了pET32a-ferritin重组质粒;粉尘螨铁蛋白基因开放阅读框为543bp,编码179个氨基酸,PI 5.35;SDS-PAGE结果表明铁蛋白基因在大肠杆菌Bl21(DE3)中获得良好的表达,经亲和层析纯化后,表达产物分子质量约为20kD。经生物信息学分析,粉尘螨铁蛋白含有8个丝氨酸激酶、7个苏氨酸激酶、7个酪氨酸激酶、0组氨酸激酶磷酸化位点,亲水区域大于疏水区域,属不稳定蛋白。结论克隆、表达了尘螨铁蛋白,经纯化后获得较高纯度的重组蛋白,并对其三级结构进行分析,为进一步研究尘螨过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。

摘要：目的克隆表达反枝苋花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin),并鉴定其免疫学活性。方法利用RT-PCR结合RACE技术克隆反枝苋花粉泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个反枝苋花粉profilin的开放阅读框,将其与p ET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,采用Western-blot检测其Ig E结合活性。结果 c DNA核苷酸测序表明反枝苋花粉profilin的全长基因由675个碱基组成,开放阅读框为399 bp,编码131个氨基酸。重组反枝苋花粉profilin在大肠杆菌中可溶性表达,进一步经Western-blot检测具有良好的Ig E结合活性。结论成功地克隆和表达了反枝苋花粉profilin,并具有良好的Ig E应答免疫活性。

摘要：目的获得大量具有良好IgE结合活性的粉尘螨第十六类变应原(Der f16)的重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究。方法挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,根据已知Der f16基因序列设计引物,经RT-PCR扩增Der f16基因片段,产物连入pMD32-T载体中。扩增后,利用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切将目的基因片段连接到pET32a表达载体上,转化到大肠杆菌(*** BL21)中经IPTG诱导表达。表达载体经亲和层析纯化,SDS-PAGE检测蛋白纯度,Western bolt检测变应原免疫学活性。结果以粉尘螨总RNA为模板成功克隆出Der f16基因,与数据库中Der f16基因同源性为100%;经IPTG诱导后,大肠杆菌大量表达Der f16蛋白,所获得的重组蛋白分子质量为73ku,上清及沉淀物均有蛋白表达,且上清表达量高于沉淀物。重组Der f16能够与螨过敏患者血清中的IgE反应,而不与健康者血清中的IgE反应。结论成功构建了Der f16的原核表达载体,并高效表达和纯化出具有免疫原性的Der f16重组蛋白。

摘要：目的克隆表达粉尘螨过敏原Der f 13,并鉴定其免疫原性。方法提取粉尘螨总RNA,通过RT-PCR获得Der f 13的cDNA片段。根据已知Der f 13序列设计出表达引物,再通过已获得的cDNA和引物进行PCR扩增,将扩增产物连接到T载体上并转入克隆菌Top 10中,涂板、培养,挑选阳性菌落,LB/AMP培养送测序。将测序正确的基因转入表达载体PET32中,经酶切鉴定测序再转入表达菌BL21中,表达Derf 13蛋白,纯化、鉴定所得蛋白,并通过Western-blot等方法检测其免疫学活性。结果 RT-PCR结果显示,Der f 13基因片段大小为410 bp;同源性分析表明:本实验所克隆的Der f 13基因与NCBI数据库的Der f 13基因的同源性为95%;SDS-PAGE结果显示,重组质粒PET32-Der f 13在BL21(DE3)中高效表达,重组蛋白分子质量为35 ku,表达后的重组蛋白主要以可溶性蛋白形式存在,经与尘螨过敏患者血清反应,检测出重组蛋白有较强免疫学活性。结论克隆出Der f 13基因,表达和纯化出目的蛋白,并具有免疫原性,为过敏性疾病的诊断和免疫治疗奠定理论基础。

摘要：目的克隆表达粉尘螨第5组变应原(dermatophagoides farinae,Der f5)基因,并鉴定纯化蛋白免疫原性。方法根据Der f5基因已知序列,设计出相应的引物,提取粉尘螨总RNA,采用RT-PCR方法扩增出Der f5基因片段,PCR产物克隆入pMD18-T载体,转化大肠埃希菌Top10,经PCR和酶切鉴定并测序。将上述所得阳性克隆菌株扩大培养,碱裂解法提取质粒,所得重组质粒pMD18-T-Der f5和空质粒pET-32a同时用限制性内切酶Bam HⅠ与HindⅢ双酶切,经纯化后连接并转化至大肠埃希菌Top10。构建的重组质粒pET32a-Der f5,经PCR、酶切和测序鉴定后,再转化至大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定其表达效果,用Ni+离子亲和层析柱纯化重组质粒pET32a-Der f5表达产生的组氨酸重组蛋白。结果构建了重组质粒pMD18-T-Der f5和pET32a-Der f5。SDS-PAGE结果表明Der f5基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中获得良好的表达,经亲和层析纯化后,SDS-PAGE结果显示单一条带。该蛋白以尘螨过敏患者血清进行Western blotting,结果表明具有良好的IgE结合活性。结论克隆、表达并纯化了具有良好尘螨致敏患者IgE结合活性的Der f5,为粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断和治疗以及进一步的实验研究奠定了基础。