摘要：研究旨在建立一种快速检测圆圈病毒人源1型(GyH1)的方法。试验通过比对GenBank中GyH1基因组序列,基于序列保守区设计特异性引物和探针,经过筛选和优化,建立GyH1实时荧光重组酶介导核酸等温扩增(RAA)检测方法。结果显示:建立的实时荧光RAA方法可在20 min内鉴定GyH1;该方法特异性强,与圆圈病毒禽源1型(GyVg1)、鸡传染性贫血病毒(CIAV)、血清4型禽腺病毒(FAdV-4)、H9亚型禽流感病毒(H9 AIV)、新城疫病毒(NDV)、禽传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸡细小病毒(ChPV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)、鸡毒支原体(MG)、禽滑液囊支原体(MS)无交叉反应;敏感性高,筛出的引物探针可有效扩增,优化反应条件后检测限可达10~2拷贝/μL;重复性好,批内和批间变异系数均小于4%。采用该方法与荧光定量PCR方法同时对231份样品进行检测,两者检测结果相符。研究表明,成功建立了实时荧光RAA方法,可用于GyH1的鉴别检测,为基层快速检测GyH1提供了新的技术手段。

摘要：为了筛选出具有较强免疫原性的猪圆环病毒3型(Porcine circovirus virus type 3,PCV-3)核衣壳(Cap)蛋白多肽,试验应用生物信息学技术,通过Garnier-Robson和Chou-Fasman两种方法分析PCV-3-Cap蛋白的二级结构,Kyte-Doolittle方法分析亲水性,Karplus-Schulz方法分析柔性,Emini方法分析表面可能性,Jameson-Wolf方法分析抗原性,经对该蛋白生物学特性进行综合分析设计合成PCV-3-Cap蛋白多肽,与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联后作为抗原免疫小鼠,测定免疫后小鼠抗体效价以及血清中免疫球蛋白IgG、IgA和细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-4(IL-4)的含量。结果表明:PCV-3-Cap蛋白的α-螺旋位于1~29,59~72,77~83,133~142,181~189 aa等区域;β-折叠位于1~15,20~33,37~52,62~111,114~123,131~155,161~167,175~193,203~215 aa等区域;转角位于12~15,32~43,137~144,167~170,174~177 aa等区域;无规则卷曲位于10~12,53~75,113~130,156~159,169~178,202~204 aa等区域;0~46,115~145 aa区域的亲水指数较高;柔性结构主要位于9~21,122~133,152~162 aa等区域;7~30,32~45,54~62,119~148 aa这些区域暴露于蛋白质表面的可能性较大;6~46,121~151 aa区域的抗原指数较高,经综合分析筛选出2段抗原性较好的肽段,分别为30~45 aa(16K)和130~145 aa(17K);2条PCV-3-Cap蛋白多肽均在第4次免疫小鼠后抗体效价达到1∶6 400;四免后小鼠的免疫球蛋白IgG、IgA及细胞因子IFN-γ、IL-6、IL-4含量与对照组相比均显著提高(P<0.05)。说明筛选出的2个PCV-3-Cap蛋白多肽具有较好的抗原性。

摘要：为建立一种快速检测圆圈病毒禽源1型(GyVg1)的方法,查询比对GenBank中现有GyVg1基因组序列,基于序列保守区设计特异性引物和探针,经过筛选和优化,建立GyVg1重组酶介导核酸等温扩增(RAA)检测方法。结果显示,建立的实时荧光RAA方法可在20 min内鉴定GyVg1;该方法仅能检测出GyVg1,与圆圈病毒人源1型(GyH1)、鸡传染性贫血病毒(CIAV)、4型禽腺病毒(FAdV4)、H9亚型禽流感病毒(H9-AIV)、新城疫病毒(NDV)、禽传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡传染性法氏囊炎病毒(IBDV)、鸡细小病毒(ChPV)、禽白血病毒(ALV)、鸡毒支原体(MG)、禽滑液囊支原体(MS)无交叉反应;检测下限可达1×10^(2)copies/μL;批内和批间的变异系数均在6%以下。用建立的实时荧光RAA方法与荧光定量PCR方法同时对231份样品进行检测,两者检测结果相符。综上所述,本研究首次成功建立了GyVg1实时荧光RAA方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为准确快速检测GyVg1提供了新的技术手段。