摘要：以弄岗唇柱苣苔为试材,采用正交实验设计研究培养基、生长抑制剂、渗透压、光强等对其离体保存的影响,并在此基础上确定常温下最适弄岗唇柱苣苔离体的保存条件,以期建立弄岗唇柱苣苔种质资源离体保存技术体系。结果表明:温度为25℃时,弄岗唇柱苣苔离体保存的最佳方法为1/2MS+蔗糖60g/L+琼脂4.0g/L+甘露醇5g/L+矮壮素(CCC)1.0mg/L;最佳光照条件为1 600lx,12h/d。试验结果表明,建立的弄岗唇柱苣苔常温离体保存体系,经保存300d,存活率在50%以上,保存材料生长情况良好,可以用于弄岗唇柱苣苔种质资源离体保存。

摘要：目的:构建携带人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)慢病毒表达载体LV3-shRNA-hTERT及其病毒包装鉴定并稳定转染宫颈癌Caski细胞系。方法:使用Designer3.0(Genepharma)软件设计靶向hTERT的小发卡RNA(shRNA)序列,将hTERT-shRNA基因片段插入慢病毒载体pGLV3/H1/GFP+Puro中,构建慢病毒表达质粒LV3-shRNA-hTERT。通过酶切、DNA测序验证hTERT片段的准确性,将LV3-shRNA-hTERT与包装质粒共转染293T细胞,浓缩上清并测定病毒滴度获得重组慢病毒,将该重组慢病毒感染Caski细胞,通过观测绿色荧光蛋白(GFP)的表达判断转染成功与否以及估计转染效率,RTPCR、Western blot分别测定转染后不同时间点的hTERTmRNA水平和hTERT蛋白表达情况,TRAP-ELISA法测定细胞端粒酶活性。结果:LV3-shRNA-hTERT携带正确hTERT基因,重组病毒经PCR证实hTERT-shRNA基因插入。利用重组慢病毒介导将重组质粒LV3-shRNA-hTERT高效转导入宫颈癌Caski细胞并稳定表达,荧光显微镜观察转染后24 h Caski细胞即开始发出绿色荧光,72 h后有大量荧光表达,而在稳定转染空质粒的Caski细胞中不表达。检测转染后的Caski细胞,发现有3条链能明显抑制hTERT mRNA和蛋白水平的表达,并显著降低了细胞端粒酶活性,其中以72H-TERT-1515抑制作用最强,对hTERTmRNA和蛋白的抑制率分别达75.0%和70.3%,端粒酶活性下降74.6%。结论:成功构建携带hTERT-shRNA慢病毒表达载体LV3-shRNA-hTERT,并稳定转染Caski细胞系,实验设计的shRNA能有效抑制宫颈癌Caski细胞hTERT mRNA水平和hTERT蛋白表达,并显著降低细胞端粒酶活性。为端粒酶在宫颈癌发病机制的研究、宫颈癌基因治疗的体外干扰治疗奠定了工作基础。

摘要：[目的]建立白及的无性系,为开发和保护白及提供参考。[方法]以白及种子为外植体,采用0.1%氯化汞作为灭菌剂,研究不同灭菌时间、不同无机盐浓度及有机添加物对白及种子诱导、丛生芽分化增殖及壮苗生根的影响。[结果]采用0.1%氯化汞灭菌12min的效果较好;芽的诱导分化以培养基MS+TDZ 2.0mg/L+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.1mg/L效果较好,以30d为一个培养周期,增殖系数最高为6.17;生根培养基以1/2MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 0.1mg/L激素组合对生根效果最好,生根率为87.50%。[结论]筛选出各个组织培养阶段的最佳激素组合及方法,优化建立白及无性体系。

摘要：目的构建NDY1shRNA真核表达载体,并获得稳定表达shNDY1质粒的卵巢癌A2780细胞。方法根据GenBank数据库提供的NDY1基因核苷酸序列,设计并合成靶向干扰NDY1基因的小发夹RNA(shRNA)序列,插入表达载体获得重组质粒pGPU6/GFP/Neo-shNDY1。重组质粒测序鉴定正确后,脂质体介导转染A2780细胞,经G418筛选及有限稀释法获得稳定转染细胞,采用实时定量聚合酶链反应法(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法分别检测A2780稳定转染细胞NDY1mRNA及蛋白表达。结果重组质粒测序正确,转染shNDY1后,A2780细胞mRNA及蛋白表达水平分别下降(72.89±4.83)%及(55.85±4.84)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建pGPU6/GFP/Neo-shNDY1真核表达质粒,并获得shNDY1稳定转染的卵巢癌A2780细胞,为细胞水平研究NDY1与卵巢癌的关系奠定实验基础。

摘要：利用正交试验考察千斤拔多糖的提取工艺,并比较脱蛋白方法中的Sevag法和三氯乙酸法的纯化效果,总糖含量测定采用苯酚-硫酸法,蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝法;采用DEAE-52纤维柱法来分离多糖,并运用HPLC色谱来分析千斤拔多糖中的单糖成分。结果表明:经正交试验得出千斤拔多糖的最佳提取条件为时间2.5 h,料液比为1∶30,温度80℃,其多糖得率为8.558%。对比两种脱蛋白的方法,Sevage法萃取3次时蛋白的脱除效果最好。经DEAE-52纤维柱来分离多糖共分得7个组分。经HPLC色谱鉴定出有葡萄糖,甘露糖和阿拉伯糖,主要单糖成分为葡萄糖。

摘要：目的：建立马尔尼菲青霉病血清实时荧光定量PCR诊断方法,对马尔尼菲青霉DNA行绝对定量.方法：针对马尔尼菲青霉内转录间隔区设计特异引物和Taqman探针,对马尔尼菲青霉、16种常见致病真菌、2种常见致病细菌和人基因组DNA行实时荧光定量PCR扩增,检测其特异性;以10倍浓度梯度的重组质粒为标准品,检测其敏感性.结果：该PCR方法特异度达100％;该方法最低检测限介于5～10 copies之间.结论：实时荧光定量PCR方法有助于早期、特异地诊断马尔尼菲青霉病.