摘要：根据结核分枝杆菌23SrRNA基因序列和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计了2对针对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针,建立了结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重实时荧光定量PCR检测方法,并对建立的方法进行敏感性、特异性测定和临床样品检验。结果显示,该方法特异性好,能区分不同模板浓度组合的结核分枝杆菌和牛分枝杆菌;可检测到10copies模板的结核分枝杆菌和牛分枝杆菌;对保存的50份PPD检测阳性牛的鼻黏液、牛乳和淋巴结进行检测,结果6份结核分枝杆菌阳性,1份牛分枝杆菌阳性,其余均为阴性,与PCR的检测结果一致。由此可见,建立的二重实时荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速、可定量检测等优点,适合用于结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的鉴别检测。

摘要：根据GenBank上登录的日本脑炎病毒(JEV)E基因序列,设计内外2对引物。以JEV疫苗株为模板,建立了检测猪JEV的套式RT-PCR方法。应用该方法对JEV疫苗株RNA进行扩增,获得与预期大小相符,长度为228bp的目的片段;检出JEV-RNA的灵敏度约为0.3pg。表明所建立的套式RT-PCR方法对JEV的检测敏感性高、特异性强。

摘要：试验旨在利用体外产气法研究啤酒糟替代豆粕,发酵木薯渣替代象草的饲粮组合对水牛体外瘤胃发酵特性的影响。采用Mauricio等的压力读取式体外产气系统进行体外瘤胃发酵培养,采用2×2×2因子(3因素2水平)设计:精料为1个因素,2个水平,啤酒糟以25%、50%(DM)替代发酵底物中的豆粕;粗料为2因素、各设2个水平,即木薯渣以12.5%、25%(DM),发酵木薯渣以12.5%、25%(DM)替代发酵底物中的象草。试验结果表明:①72 h累积产气量4组(啤酒糟替代25%豆粕,发酵木薯渣替代25%象草的饲粮组合)最高。代谢能和可消化有机物含量对照组(豆粕15%,玉米25%,象草30%,青贮玉米30%)最高,这两个指标4组与对照组差异不显著(P>0.05)。②5组(啤酒糟替代50%豆粕和木薯渣替代12.5%象草的饲粮组合)的微生物蛋白质含量最高,微生物蛋白质含量4组、5组与对照组差异不显著(P>0.05),这3组显著高于其他组(P0.05)。4、5组的12 h甲烷产量和24 h甲烷产量与对照组差异不显著(P>0.05)。综上所述,4组(啤酒糟替代25%豆粕,发酵木薯渣替代25%象草的饲粮组合)是最优的饲粮组合。

摘要：本试验通过深入了解广西陆川猪猪肺炎支原体（Mhp）地方流行毒株的黏附因子P97基因R1区的序列特征、基本结构及遗传变异等特点,为广西地方品种陆川猪猪支原体肺炎（MPS）有效的综合防控措施提供理论依据,并为进一步研究广西陆川猪Mhp地方流行毒株特性打下坚实的基础。参考Mhp基因组序列设计扩增P97基因R1区的1对引物,以2011年—2014年广西陆川猪MPS阳性病料为研究对象,提取基因组DNA,PCR扩增P97基因R1区,对PCR产物进行测序,将广西陆川猪Mhp不同地方流行毒株的P97基因R1区序列的碱基组成和推导的氨基酸序列进行比对。DNAStar软件分析结果表明,所获得的15株广西陆川猪Mhp毒株（GXLC-1、GXLC-2、GXLC-3、GXLC-4、GXLC-5、GXLC-6、GXLC-7、GXLC-8、GXLC-9、GXLC-10、GXLC-11、GXLC-12、GXLC-13、GXLC-14、GXLC-15）和3株广西其他品种猪Mhp毒株（GX227、GX595、GX674）的P97基因R1区的多处碱基发生变异。通过推导氨基酸序列统计P97R1区五氨基酸（AAKPV/E）重复数为9~18,平均值为12,TN重复数为1~4,结果发现广西陆川猪Mhp流行毒株变异使其毒力和黏附能力增强,再加上陆川猪呼吸道短小狭窄的特殊结构,更易导致广西陆川猪MPS的发生。

摘要：为了研制猪戊型肝炎(HE)基因工程疫苗,设计引物扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)的基因片段LB1、LB2、LB3,分别与真核表达载体pEASY-M1Expression Vector直接进行T-A连接,构建得到了重组真核表达质粒pEASY-LB1、pEASY-LB2、pEASY-LB3。将这3个重组真核表达质粒分别转染293T细胞,采用实时荧光定量RT-PCR检测目的基因,并进行SDS-PAGE电泳分析和Western-blot鉴定。结果显示,重组真核表达质粒pEASY-LB1、pEASY-LB2、pEASY-LB3在转染的293T细胞中均可表达一约20.5ku的目的蛋白,且具有良好的HEV抗原性。本试验获得的3个HEV ORF2连续片段的候选核酸疫苗为今后进一步研制HEV核酸疫苗奠定了基础。

摘要：针对猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)基因的保守序列设计了2对扩增PCV2和PCV3的特异性引物,通过优化各反应条件,建立同时检测PCV2和PCV3的二重PCR检测方法。敏感性和特异性结果显示,1.08×10-8μg/μL是对PCV2和PCV3的最低检测限具有较好的灵敏度;而对猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)、大肠杆菌、链球菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌的检测结果均无条带,表明所建立的方法具有较好的特异性。应用该方法检测了2017年9月—2018年8月从广西14个地市猪场采集的533份病猪死猪内脏组织,结果显示:PCV2阳性率为23.8%,PCV3阳性率为14.8%, PCV2和PCV3混合感染率为2.8%。广西14个地市中有12个地市的猪场送检样品检测出PCV2,有10个地市的猪场送检样品检测出PCV3,表明PCV2和PCV3在广西受检猪群中普遍存在,要重视和做好PCV2和PCV3感染的防控工作。

摘要：为了对猪场中猪肺炎支原体的感染和发病情况进行有效病原学监测,根据Genbank中猪肺炎支原体(Mhp)基因组序列,设计合成针对P46基因的1对特异性引物,经特异性试验表明,其对猪鼻支原体、猪絮状支原体、鸡毒支原体、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌的扩增结果为阴性;敏感性试验表明,其最低检出量为0.675 ng的基因组DNA;临床初步应用证明该方法可满足临床上对猪肺炎支原体的快速检测要求。

摘要：研究建立一种弧菌类致病菌的快速药敏试剂盒,设计与筛选了增菌培养基、药物包埋试剂、细菌生长指示剂、10种药物的定量药敏试剂盒。试剂盒包括试剂盒1和试剂盒2,试剂盒分为检测区、生长区和空白对照区,每种药物双样对照,通过生物指示剂颜色变化来判断药物的最小抑菌浓度。实验结果表明,创伤弧菌在培养基S2里具有较好的生长优势,指示剂对细菌生长具有较好的生长指示作用,准确判断每种药物最小抑菌浓度。结果表明,药敏试剂盒具有准确、简单和快速的特点。